几种抗氧化剂对马精液冷冻保存效果的影响

马精液的冷冻保存效果与其他家畜相差很大,这主要是由于马精液对冷冻过程更敏感,表现出更高的氧化应激与质膜损伤率,因此,需要找出更有效的方法来提高马精液冷冻保存效果。试验选取抗氧化剂谷胱甘肽(Gsh)、牛磺酸(Tau)、维生素C、蛋氨酸(Met)和原花青素(OPC),加入精液稀释液中,用精子分析仪测定冻融后马精液的总体活力(TM)、前进式活力(PM)、快速运动精子比例(RAP)、平均路径速度(VAP)和直线性(LIN),以评估不同抗氧化剂对马精液冷冻效果的影响;进一步试验选取牛磺酸为基础抗氧化剂,组合添加其他抗氧化剂后,评测抗氧化剂组合对马精子冻融后保存效果的影响;然后,选择在精液离心前、冷冻前和冷冻解冻后添加抗氧化剂,评估不同的抗氧化剂添加程序对马精液冷冻效果的影响。结果表明:单独添加牛磺酸、维生素C、蛋氨酸、原花青素等抗氧化剂的试验组2,3,4,5马精子活力参数均有提高;不同抗氧化剂组合试验中,添加谷胱甘肽与蛋氨酸的试验组9的抗氧化效果最好,马精子活力参数指标均高于对照组,而添加牛磺酸、谷胱甘肽、蛋氨酸的试验组8的抗氧化指标多数偏低;不同时间添加抗氧化剂牛磺酸,离心前添加的试验组10的马精子活力参数最高,冷冻前添加的试验组11次之,二者均显著高于冷冻前后二次添加的试验组12(P<0.05)。说明在精液稀释液中添加牛磺酸、维生素C、蛋氨酸、原花青素等抗氧化剂是有益的,但牛磺酸与其他抗氧化剂配合没有达到很好的抗氧化效果;抗氧化剂适宜在离心前或冷冻前添加,而冷冻前后二次添加抗氧化剂可能对精子有伤害。

不同品种绵羊的细管冻精解冻质量检测分析

选取8个不同品种羊(引进品种2个,本地品种4个,培育品种2个)的细管冻精,进行外观、剂量、精子活力、前向运动精子数和精子顶体完整率指标的检测分析。结果显示,各细管冻精外观均完好,符合生产标准;剂量检测值为(0.21±0.01) mL,均符合国家标准(≥0.18 mL);精子活力为(37.50%±1.70%)~(51.0%±3.70%),其中,陶赛特羊精子活力值最高,黑裘皮藏羊精子活力值最低;前进运动精子数为≥3×10^(7)个,符合国标;精子顶体完整率为(71.90%±1.13%)~(81.23%±1.0%),其中,西藏(草地型)羊精子顶体完整率最高,陶赛特羊精子顶体完整率最低。8个品种的羊冻精在解冻复苏后各项指标均达到配种生产要求。引进品种的精子活力比本地品种高,前进运动精子数和顶体完整率等其他指标有高有低。

岔口驿马细管冻精制作与人工授精推广方案初探

为了进一步保护、发展和利用岔口驿马种质资源,扩大岔口驿马种群数量,有关研究人员制定适合岔口驿马种属区域的细管冻精制作和人工授精技术示范及推广方案,以期为实现岔口驿马产业的高质量发展和岔口驿马品种改良应用提供参考依据。

稀释液中卵黄浓度对猪精液冷冻保存效果的影响

为探索卵黄在猪精液冷冻中的应用效果,筛选出猪精液冷冻稀释液中卵黄的最佳浓度,分别在猪精液冷冻稀释液中添加不同比例(20%、25%、30%)的卵黄,并以精子活率、活力、路径速率(VAP)、轨迹速率(VCL)、直线运动速率(VSL)等为指标,对猪精液稀释后、平衡后和冷冻后3个阶段的精液质量进行比较分析。结果表明,将猪精液冷冻稀释液中卵黄的添加量提高5～10个百分点,其稀释后、平衡后及解冻后3个阶段精子的5个运动参数与常规添加量相比均无显著差异(P>0.05)。可见,提高猪精液冷冻稀释液中卵黄浓度未能显著改善猪精液冷冻后的质量,综合考虑,猪精液冷冻稀释液中卵黄浓度仍以20%(v/v)为宜。

大豆卵磷脂对马精液冷冻保存的效果研究

为探索适宜浓度的大豆卵磷脂(soybean lecithin,SL)代替卵黄(egg yolk,EY)对马精液冷冻保存的效果,本试验分别以5%卵黄(V/V)和10%、20%、30%大豆卵磷脂(m/V)作为精液的冷冻保护剂冷冻解冻马精液,解冻后分别对精子细胞的运动参数、精子细胞膜的完整性、精子细胞脂质氧化物丙二醛的值和线粒体膜完整性进行检测。结果发现,精液冷冻解冻后,5%卵黄和10%、20%、30%大豆卵磷脂对精子的总运动精子数无显著影响(P>0.05),但30%大豆卵磷脂具有最大的原地摆动精子数和最小的直线前进精子数(P<0.05),其他运动参数差异不显著(P>0.05);20%大豆卵磷脂代替卵黄后具有最高的质膜完整性,同时产生最少的脂质氧化物丙二醛;线粒体膜电位经流式细胞仪检测时,30%大豆卵磷脂活精子高膜电位数最高,但与20%大豆卵磷脂之间差异不显著(P>0.05)。试验结果表明,20%大豆卵磷脂能够代替卵黄作为冷冻保护剂用于马精液的冷冻保存。

绵羊精液平衡过程中降温速率对精子品质的影响

本试验研究了河南大尾寒羊精液冷冻颗粒制作过程中,100、150、200和250 mL 4种不同体积水浴平衡降温速率对冻精精子品质的影响。结果表明:①4种水浴平衡处理的降温时间在2.2～3.9 h,以100 mL水浴降温速率最大,250 mL水浴降温速率最小,200和250 mL水浴处理降温速率较为接近。②精液冷冻水浴平衡降温速率前30 min,降温速率应控制在0.73～0.74℃/min之间;30～90 min降温速率应控制在0.11～0.12℃/min之间。③水浴平衡时的降温时间3 h较为适宜,250mL水浴平衡降温的处理对精子造成的冷打击最小,制作的冻精解冻后的精子品质最高。④精子活率:250和200 mL处理间差异不显著(P>0.05);2502、00 mL处理与150、100 mL处理间差异显著(P<0.05)。⑤畸形率:250 mL水浴平衡条件下最低,100 mL水浴平衡条件下最高。250与200 mL处理间精子畸形率差异不显著(P>0.05);250与150、100 mL处理间精子畸形率差异显著(P<0.05)。⑥顶体完整率:250和200 mL较高,两处理间差异不显著(P>0.05);250和200 mL处理与150及100 mL处理间精子顶体完整率差异显著(P<0.05)。

猪冷冻精液的研究

本试验以甘油、乙二醇为抗冻剂,并添加ATP或安息香酸咖啡因,以解冻后精子活力、顶体完整率、顶体膨胀率、顶体破损率、尾部畸形率和在37℃下的存活时间几个重要评定指标为依据,筛选了几种猪颗粒冻精的冷冻稀释液配方,并优化了其冷冻程序。结果表明,与对照组相比,在冷冻液中添加0 .1mg/ ml的ATP或2 m g/ ml的安息香酸咖啡因都能显著提高解冻后精子活力(分别提高0 .13和0 .18) ,降低顶体膨胀率(两者都将近降低了11% ) ,并能延长其存活时间(分别延长10 .5 h和11.8h) ;甘油和乙二醇两种抗冻剂配合使用,将显著提高冻后精子的活力与存活时间,其较优混合量为甘油3% ,乙二醇0 .5 %。

马精液冷冻保存技术研究进展

马精液冷冻保存是一种将种公马精液加入抗冻保护剂,再进行一系列处理,最后保存在超低温中(液氮、干冰)的技术。近年来该技术随着马冷冻精液在许多国家马匹繁殖育种中逐渐应用而得到了较好的发展。作者综述了马精液冷冻保存技术的精液稀释、离心、再稀释、降温平衡、分装剂型、降温冷冻、液氮保存的研究进展,旨在对马精液冷冻保存技术的进一步研究提供一定的参考,以期推动中国现代马业的健康可持续发展。

低强度瞬态电磁场下家猪精子的电穿孔效应

用低强度瞬态电磁场对家猪的精子细胞进行电穿孔处理 ,比较了精子细胞电穿孔前后的形态变化 .发现台盼蓝染料能够进入电穿孔后的家猪精子细胞 ,通过扫描电镜观察到电穿孔后的细胞膜表面有明显的孔洞 .实验结果表明 ,低强度瞬态电磁场能够促使猪精子细胞穿孔 ,并能促使外源物质进入细胞内部 .

利用人工授精技术杂交改良甘肃马鹿的研究

利用天山马鹿冷冻精液,通过人工授精技术对甘肃马鹿杂交改良的研究表明,授精母鹿产仔率比自然繁殖的对照组提高了5．97％;经过改良的仔马鹿,从初生至5月龄的体尺(体高和体斜长)、体重均高于同期自然繁殖的纯种仔鹿,杂交改良效果显著。

抗氧化剂对马精子低温及冷冻保存效果的影响

试验旨在研究不同抗氧化剂对马精子低温保存及冷冻效果的影响。选取6匹英纯血种公马作为试验动物,以INRA82液作为基础稀释液(对照组),分别添加谷氨酰胺(0.015g/mL)、甘氨酸(0.019g/mL)、半胱氨酸(0.024g/mL)、甲硫氨酸(0.015g/mL)、牛磺酸(0.063g/mL)、维生素C(0.4mg/mL)、维生素E(0.5mg/mL)、褪黑素(0.001mg/mL)制备成含有不同抗氧化剂的低温保存和冷冻保存稀释液,将浓缩处理后的马精子分别置于上述稀释液中保存或冷冻,检测低温保存48h后精子运动参数,评价抗氧化剂对精子低温保存的影响;检测精子冻融后运动参数、精子质膜完整性、线粒体膜电势及顶体完整性,评价抗氧化剂对精子冷冻效果的影响。结果表明,精子低温保存48h后,添加牛磺酸组活精子比例和前向运动精子比例显著高于对照组(P<0.05),添加维生素C组前向运动精子比例显著高于对照组(P<0.05)。冷冻解冻后结果表明,添加不同抗氧化剂没有改善精子冻融后活精子比例和前向运动精子比例,但添加甲硫氨酸显著延长了精子体外存活能力(P<0.05);添加不同抗氧化剂精子质膜完整性与对照组间无显著差异(P>0.05),但甲硫氨酸和甘氨酸组有高于对照组的趋势;添加维生素E和甲硫氨酸组精子线粒体膜电势显著高于对照组(P<0.05),不同抗氧化剂组精子顶体完整性与对照组间均无显著差异(P>0.05)。结果提示,低温保存时添加牛磺酸和维生素C可以提高精液低温保存效果;冷冻时添加甲硫氨酸能提高精子质膜完整性和线粒体膜电势,且能够延长精子冻融后的存活时间。

利用流式细胞仪评价不同防冻液对猪冻融精子成活率及凋亡状况的影响

人工采取5头优质大白猪精液,利用BTS稀释液和添加氨基—钠—十二烷基硫酸脂(OEP)、十二烷基硫酸钠(SDS)及卵黄所组成的防冻液稀释后,冷冻程控仪制成细管冻精,采用荧光显微镜及流式细胞仪对冷冻复苏后精子质膜完整率和凋亡状况进行测定,目的在于比较不同检测方法评估猪冻融精子活率的差异性,探讨OEP、SDS对猪冻融精子质膜完整率和凋亡状况的影响。结果表明,Annexin-V/PI染色流式细胞术能准确测出猪冻融精子质膜完整率及处于凋亡状态的数量,同Annexin-V/PI染色流式细胞术相比,利用SYBR-14/PI染色荧光显微镜法往往高估冻融精子的死亡率。各处理组间冻融精子质膜完整率及凋亡数量存在一定差别,添加OEP防冻剂的实验组早期凋亡精子的比例显著低于对照组(P<0.05),而正常活性精子的比例(46.5%)显著高于对照组(37.2%)(P<0.05),结果提示:OEP对维持冻融精子质膜完整性、抑制冻融精子凋亡起到较好作用。

二甲基亚砜对猪精液冷冻保存效果研究

用二甲基亚砜(DMSO)替代甘油做猪精液冷冻保护剂并对其效果进行研究。以3%甘油作为对照组,比较不同浓度的DMSO(40、50、60、70、80mL/L)对猪精液冷冻保护效果的影响,从而得到DMSO的最佳添加量。同时,将甘油和DMSO配伍(4∶1、3∶1、3∶2、1∶1和2∶3)成最终浓度为3%的混合冷冻保护剂,并分别记作A、B、C、D和E组,对比其对猪精液冷冻保存的效果,筛选出最佳配比。结果显示,添加6%的DMSO,解冻后精子畸形率、质膜完整率和顶体完整率均明显优于对照组和其它DMSO添加组(P<0.05),分别为16%、49%和51%,解冻后精子活率为26%显著高于其它DMSO添加组(P<0.05),但低于对照组(P<0.05)。B组解冻后精子畸形率为13%,显著低于C组、D组、E组、4%、5%、7%、8%DMSO添加组和对照组(P<0.05),但与A组、6%DMSO添加组差异不显著(P>0.05),顶体完整率和质膜完整率分别为53%和52%,均显著高于40、50、70、80mL/L DMSO添加组和其他配伍组(P<0.05),但与6%DMSO添加组差异不显著(P>0.05),解冻后精子活率37%显著低于对照组(P<0.05),但显著高于其他DMSO添加组和混合配伍组(P<0.05)。所以,DMSO单独添加时,最佳添加量为60mL/L,而最终浓度为30mL/L的混合冷冻保护剂最佳配比是甘油与DMSO为3∶1。

低温保存对绵羊精子质膜完整性的影响

为了探讨低温保存对绵羊精子质膜完整性的影响,研究采用低渗肿胀-伊红拒染(HOS-EY)法检测低温保存前后绵羊精子头膜和尾膜的完整性。试验设计了5个HOS-EY低渗染液浓度梯度组合(110,130,150,170,190 mOsm),按精子尾部肿胀与否和头部着色与否分为4种类型进行统计。结果表明:低温保存后,绵羊精子头膜、尾膜均完整的Ⅳ型精子发生率和头膜、尾膜均损伤的Ⅰ型精子发生率与鲜精相比分别极显著减少和增多(P<0.01),说明低温保存过程对精子质膜完整性有极显著影响;在低温保存过程中头膜损伤-尾膜完整的Ⅱ型精子发生率极显著增多(P<0.01),而头膜完整-尾膜损伤的Ⅲ型精子发生率显著减少(P<0.05),说明精子头膜或尾膜的损伤是独立发生的,且头膜比尾膜更易损伤。5种低渗液中,150 mOsm染液检测效果最好。

影响北京地区马人工授精受胎率的因素分析

为了提高马匹人工授精受胎率及迅速扩大良种马数量,试验于2017—2019年对北京市2个马场健康无繁殖疾病且发情周期正常的139匹马,按年度分3个批次通过月份、输精部位及输精次数对马匹情期人工授精受胎率的影响进行对比分析。结果表明:在繁殖季节,3,4,5月份平均情期受胎率较高,分别为64.45%、68.45%和64.68%,与7,8月份(平均情期受胎率为52.38%和47.62%)相比差异显著(P<0.05);6月份(平均情期受胎率为58.93%)较3,4,5月份有下降趋势,但也还比较理想;子宫体深部输精平均情期受胎率(65.72%)显著高于子宫颈输精(56.13%,P<0.05);输精次数为1,2,3次的平均情期受胎率分别为59.73%、64.08%和51.85%,各组间无显著性差异(P>0.05),但输精2次效果最好。说明北京地区马匹人工授精最佳时间是在3,4,5,6月份,饲养条件允许可以采取子宫体深部输精,最好进行2次输精。

意大利地中海水牛同期发情-人工授精试验效果的研究

为了繁育纯种地中海水牛,试验采用＂促黄体素释放激素A3＋氯前列醇＋促黄体素释放激素A3＂同期化处理国外引进的地中海育成水牛,并用引进的地中海水牛冻精进行人工授精。结果表明：经同期化处理的地中海水牛发情率为87.07%,淡、旺季发情率差异不显著（P〉0.05）;情期受胎率为37.39%,旺季配种受胎率显著高于淡季;淡季母牛48 h内排卵率为59.72%,旺季为81.13%,差异显著（P〈0.05）。间隔一定时间重复处理不影响发情率和受胎率。地中海水牛同期发情-人工授精效果与摩拉水牛、尼里-拉菲水牛、本地水牛的处理效果基本一致。

犬精液冷冻保存条件的优化

犬精液冷冻保存技术在犬种资源的保护、品种选育和加快良种进程等方面均能发挥关键作用。自1780年,意大利生理学家SpMlanzani首次用犬进行人工授精（AI）试验后,A.E.Harrop[1]又首次对犬的冻精进行AI试验并获得成功。我国在这方面的研究起步较晚,目前尚处于试验研究阶段。研究发现,

添加剂在猪精液冷冻保存中的应用

猪精液的冷冻保存显著影响猪精子的运动学参数,损伤精子质膜、顶体和DNA完整性,降低解冻后精子活率和受精能力。近年来,在以甘油和蛋黄作为冷冻保护剂的基础上,为了有效降低冷冻-解冻对精子的损伤,提高解冻精液的受精能力,研究人员将OEP、抗氧化剂(甲基黄嘌呤、丁羟基甲苯、谷胱甘肽、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、褪黑素和维生素E等)、2-羟丙基β环糊精以及透明质酸等物质作为添加剂应用于猪精液的冷冻保存,结果表明这些物质在保护精子质膜和顶体完整性,提高解冻后精子活力、活率和受精能力等方面均有显著作用。

家畜精子形态的判别与描述

对家畜精子形态的判别方式、方法进行了分析研究。目前精子形态的判别仍以人工目测为主,而计算机(软件)还不能投入到临床使用中,因为软件无法分析各个畜种精子形态上的缺陷,不能自动评估检测结果的可信度,最终还需要人工检测分析辅助。对各类畸形精子的形态进行了描述,提供了畸形精子形态图像的分析资料,同时分析了精子畸形的影响因素,不仅为精子形态学深入研究提供了理论基础,也为今后我国对家畜精液质量的检验提供了可靠参考。

马子宫角低剂量人工授精试验研究

文章旨在验证马子宫角低剂量浓缩细管精液人工输精方法的可行性。采用直肠触摸检查卵巢的方式确定卵泡的发育状况和输精时间,直肠把握低剂量浓缩细管鲜精子宫角输精,排卵后6 h内按同样方法再追精一次。结果表明:此次试验参配母马26匹,平均每匹输精2.1次,每次平均输精2.4 mL,其中18匹马受胎,情期受胎率69.23%。结论:在准确掌握母马卵巢发育水平的前提下,马子宫角低剂量浓缩细管精液人工输精技术上完全可行,在生产上具有较高推广价值。