微卫星DNA与延边黄牛肉用生长性状关系

选择与肉牛主要生产性状紧密连锁的 5个微卫星位点 ,以肉牛线性体型评分方法作为衡量肉牛生长发育的指标 ,运用最小二乘法拟合线性模型 ,分析了延边黄牛肉用生产性状与微卫星标记的关系 ,并分析了微卫星 ETH10和IDVGA4 6位点的不同基因型与肉用生产性状的关系。结果表明 ,微卫星 EHT10位点的等位基因 2 0 9对外貌线性评定中的背线性状、肌肉度线性评定中的肩部性状有正面影响 ,等位基因 2 13对外貌线性评定中的系部、肌肉度线性评定中的尻形状和细致度线性评定中的骨骼及皮肤性状有正面影响 ,而等位基因 2 15对外貌线性评定中的背线性状、肌肉度线性评定中的尻形状有负面影响 ;微卫星 IDVGA4 6位点的等位基因 2 4 9对背线、前肢和后肢等外貌线性评定性状 ,肌肉度线性评定的腰宽以及细致度线性评定的骨骼和皮肤性状有正面影响 ,等位基因 2 0 3对外貌评定性状的头部、背线 ,肌肉度评定性状腰宽以及细致度评定性状骨骼和皮肤有负面影响 ,等位基因 2 4

3个中国地方黄牛品种遗传结构及其遗传分化的研究

利用12对微卫星引物对中国3个地方黄牛品种(鲁西黄牛、渤海黑牛及闽南黄牛)及2个对照群体(中国荷斯坦牛和青海牦牛)的群体遗传结构、遗传分化及基因流水平进行研究,结合聚类分析,结果表明:5个牛群体总近交系数(Fit)为58.5%,群体内近交系数(Fis)为43.2%,群体间基因分化系数(Fst)为26.9%,3个指标均达到极显著水平(P<0.001)。5个牛群体内近交系数(Fis)鲁西黄牛最高(0.640),青海牦牛最低(0.231)。鲁西黄牛与荷斯坦牛间每世代群体间有效迁移个体数(Nem)最大(1.149),牦牛与鲁西黄牛间最小(0.509)。5个牛群体每个体属于所属群体的平均概率从91.4%到98.5%不等。结合聚类分析、基因流分析及STRUCTURE分析结果,5个牛群可分为3大类:鲁西黄牛和中国荷斯坦牛为一类,渤海黑牛和闽南黄牛为一类,牦牛自为一类,这说明在鲁西黄牛和渤海黑牛的形成过程中,鲁西黄牛受普通牛影响较大,而渤海黑牛受瘤牛影响较大,同时探讨了以上品种的演化与形成过程。

鲁西黄牛肉用品系育种目标性状经济权重计算

根据鲁西黄牛肉用品系的育种和生产实际,在基础母牛群体规模固定的二阶开放核心群育种生产体系下,构建了核心群和商品群中犊牛、青年母牛、青年公牛、成年母牛、成年公牛和育肥牛6个群体,包含断奶重、周岁重、成年母牛体重、育肥期日增重、胴体等级、屠宰率、初产年龄、产犊间隔和生产年限9个目标性状的利润函数模型。采用边际预算法计算目标性状的经济值,经贴现指数和遗传标准差校正后估算其经济权重。结果表明,6个群体体系中,每头母牛年利润为-1033.96元;9个目标性状经济值分别为:1.44元/kg,1.49元/kg,-3.02元/kg,1.81元/g,315.45元/级,66.85元/%,-0.54元/d,-4.43元/d,0.09元/d;相对经济权重分别为0.11,0.11,0.14,0.26,0.14,0.12,0.01,0.08,0.03。结果表明,鲁西黄牛从役肉兼用向专门化肉用方向选育,需要加强生长发育性状选择的同时,兼顾胴体性状和繁殖性状。

陕西小菜蛾对9种杀虫剂的抗药性监测

【目的】明确陕西关中地区小菜蛾田间种群对9种常用杀虫剂的抗药性现状，为抗性治理和田间有效防治小菜蛾提供依据。【方法】在室内采用生物测定法和区分剂量法，测定2012-2013年间陕西杨凌、宝鸡和渭南3个地区小菜蛾田间种群对阿维菌素、高效氯氰菊酯、丁醚脲、啶虫隆、溴虫腈、茚虫威、多杀菌素、Bt毒素Cry1Ac和氯虫苯甲酰胺9种常用杀虫剂的敏感性。【结果】陕西3个地区的小菜蛾田间种群对大部分供试药剂都产生了不同程度的抗性。宝鸡、渭南和杨凌种群均对高效氯氰菊酯产生了高极高水平抗性，对阿维菌素产生了中等高水平抗性，对溴虫腈和啶虫隆产生了低中等水平抗性，对茚虫威、多杀菌素和氯虫苯甲酰胺的抗性水平相对较低，处于敏感低水平抗性。对丁醚脲和Bt毒素的抗性各地差异较大，对丁醚脲的抗性，杨凌种群处于低中等水平抗性，渭南种群处于中等水平抗性，宝鸡种群处于敏感性下降；对Bt毒素的抗性，宝鸡种群处于中等水平抗性，杨凌和渭南种群处于敏感性下降低水平抗性。【结论】3个地区应停止使用已产生高水平抗性的高效氯氰菊酯和阿维菌素，减少已产生中等水平抗性药剂的使用次数，处于低水平抗性的杀虫剂可作为防治小菜蛾的主要药剂。在杀虫剂使用过程中应注意药剂的轮换使用，以延缓小菜蛾抗药性加剧。

基于转录组数据的蒙古牛皮肤组织抗寒相关信号通路及候选基因的筛选

本研究旨在通过对冬夏两季蒙古牛皮肤组织进行转录组测序和生物信息学分析,找到与蒙古牛抗寒性状相关的信号通路及候选基因。用Ion ProtonTMSequencer分别对冬季和夏季成年蒙古牛的皮肤组织进行转录组测序,随后对转录组数据进行处理、与参考基因组比对、差异表达分析、GO和KEGG富集分析以及候选基因筛选,并用Real-time PCR方法对转录组数据进行可靠性检测。结果显示,冬季组和夏季组分别得到86 954 060和69 837 009条reads;冬季组与参考基因组的唯一比对率为73.21%,夏季组为75.55%;冬夏两组共有182个差异表达基因(DEGs),与夏季组相比,其中117个在冬季组中上调,65个在冬季组中下调;Real-time PCR分析显示,转录组测序结果可靠;GO分析结果显示,细胞组分、分子功能、生物学过程分别富集到21、39和224个term;KEGG分析结果显示,差异表达基因(DEGs)显著地富集在脂类代谢、凝血、酪氨酸代谢、类固醇合成和视黄醇代谢相关通路上;共筛选出8个候选基因。综上表明,脂类代谢、凝血、黑色素合成相关通路和基因,以及与毛发发生相关的基因可能在蒙古牛抗寒过程中发挥重要作用。

固原本地黄牛及其利杂群体Pit-1基因多态性与育肥性状的关系

为了分析固原本地黄牛及其利木赞牛杂交群体(简称利杂群体)Pit-1基因的多态性与育肥性状的关系,为固原本地黄牛下一步的杂交改良提供理论基础,利用PCR-RFLP技术研究了固原本地黄牛及其利杂群体共178个个体的Pit-1基因多态性,并分析了其与育肥个体育肥性状的相关性。结果表明,451 bp的PCR产物被限制性内切酶HinfⅠ消化后表现出多态性,固原本地黄牛及其利杂群体在该位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态,等位基因A/B的频率分别为0.3039/0.6961和0.1614/0.8386。与部分育肥性状的相关分析表明,在育肥的初期阶段,BB型和AB型个体的精料料肉比均显著低于AA型个体(P<0.05);7月龄育肥牛BB型个体的胸深显著低于AA型,而胸宽显著高于AA型(P<0.05);育肥牛6~12月龄体长增长量也表现出BB型个体优于AB型的趋势(P<0.05)。初步认为,BB基因型与优良的育肥性能显著相关,对B等位基因的选择有利于优良性状的改良。

应用PCR法和LAMP法鉴定牛早期胚胎性别的研究

通过设计特异性引物,优化Mg2+浓度、退火温度和循环时间等影响PCR的因素,确定了适合现场应用的PCR反应体系;46枚胚胎现场的鉴定率为87%,移植妊娠率为28%,准确率为85%,证明建立的PCR胚胎性别鉴定方法可用于生产。使用LAMP法对126枚常规胚胎和42枚性控胚胎现场鉴定,鉴定率95%,移植妊娠率33%,准确率88%,结果证明该方法可应用于牛早期胚胎性别鉴定。PCR法和LAMP法所鉴定同一样品的结果一致,说明在控制好实验条件的情况下,根据实际情况可选用这两种方法中的任何一种进行性别鉴定应用。

秦川牛GH基因第5外显子的多态性及其与体尺性状的关联性

【目的】研究秦川牛生长激素基因第2外显子的多态性,及其与部分体尺性状指标的相关性。【方法】以502头2周岁左右秦川牛为研究对象,利用PCR-RFLP技术检测生长激素基因上存在的单核苷酸多态性(SNPs),并分析其与秦川牛体尺性状的关联性。【结果】在GH基因第5外显子中发现了2处SNPs,分别为错义突变和同义突变。位点1经AluⅠ酶切后产生AA、AB和BB 3种基因型,A、B等位基因频率分别为0.825 7和0.174 3;卡方检测显示,该位点在所检测秦川牛群体中处于Hardy-Weinbery不平衡状态;关联分析表明,该位点不同基因型个体之间在体高、胸围、体斜长和尻长上差异显著。位点2经AflⅡ酶切后产生CC和CD 2种基因型,C和D等位基因的频率分别为0.902 4和0.097 6;卡方检测显示,该位点在所检测秦川牛群体中处于Hardy-Weinbery不平衡状态;关联分析表明,该位点不同基因型个体间在腰角宽、坐骨端宽和尻长上差异显著。第5外显子2个位点合并基因型分析结果表明,双杂合基因型个体各体尺性状均显著高于其他基因型组合,并且多标记位点的组合效应高于单标记位点。【结论】组合ABCD各体尺性状数值均高于AB和CD基因型,组合ABCD可能是影响牛体尺性状的最佳基因型组合。

湘西黄牛LPL基因exon5的多态性与生长性状的相关性

脂蛋白脂酶(LPL)是机体脂质和脂蛋白代谢的关键酶,在脂质代谢、转运和能量代谢方面发挥着重要作用,影响着动物的生长发育。为探讨湘西黄牛LPL基因的分子遗传特征和寻找与生长性状相关的分子标记,采用PCR产物测序的方法检测了湘西黄牛LPL基因的SNP位点,并进行了LPL基因exon 5的g.365458G>A位点进行了群体遗传多态与生长性状的关联分析。SNP检测结果表明,LPL基因在Intron 4上新发现了3个SNP(g.365186A>C、g.365248C>T和g.365249C>T),在exon5的182 bp处检测到了1个SNP(g.365458G>A)。g.365458G>A位点的多态性检测结果表明,g.365458G>A位点存在AA、AG和GG 3种基因型,呈中度多态,且达到了Hardy-Weinberg平衡状态。多态性与生产性状的相关性分析结果表明,湘西黄牛AA基因型个体的体高和胸围显著大于GG基因型个体(P<0.05),AA基因型个体的体长和体重极显著大于GG基因型个体(P<0.01)。A等位基因对湘西黄牛的体高、体长、胸围和体重都为正效应,而G等位基因都为负效应。推测LPL基因exon5的g.365458G>A位点有可能作为湘西黄牛生长性状的分子遗传标记位点。

秦川牛Chemerin基因第2和第6外显子的SNPs检测及其与肉质性状的相关性

【目的】对秦川牛Chemerin基因第2和第6外显子进行SNPs检测,并研究其与秦川牛肉质性状的相关性。【方法】采用DNA直接测序技术并结合PCR-SSCP方法,对324头2~3岁秦川牛Chemerin基因第2和第6外显子进行多态性分析,用最小二乘法拟合线性模型对Chemerin基因不同基因型与秦川牛肉质性状（宰前活质量、胴体质量、背膘厚、大理石花纹评分、系水力、眼肌面积和嫩度）进行关联分析。【结果】秦川牛Chemerin基因第2外显子868 bp处发生了A→G突变,第6外显子2 948 bp处发生了C→G突变;用PCR-SSCP方法检测得到AA、AG、GG、EE和EF 5种基因型,其基因型频率分别为0.219 1,0.432 1,0.348 8,0.348 4和0.651 6,均处于中度多态,其中C2948G位点处于Hardy-Weinberg极度不平衡状态（P〈0.01）。关联分析结果表明,秦川牛Chemerin基因第2外显子AA基因型与眼肌面积、背膘厚、大理石花纹评分和系水力均显著相关（P〈0.05）;第6外显子各基因型与供试肉质性状间没有相关性（P〉0.05）。【结论】Chemerin基因第2外显子可能是影响秦川牛眼肌面积、系水力和大理石花纹评分等肉质性状的主效QTL或与之紧密连锁,可以尝试将其用作秦川牛品质改良的辅助选择标记。

徐闻黄牛和海南黄牛血液蛋白的遗传多样性

采用淀粉凝胶电泳技术和组织化学染色方法，研究徐闻黄牛、海南黄牛和荷斯坦牛血液蛋白的遗传多样性。在分析的３６种血液蛋白（酶）共计４０个遗传座位中，徐闻黄牛和海南黄牛有相同的１３个多态座位，荷斯坦牛有１１个多态座位。徐闻黄牛和海南黄牛的多态座位百分比均为Ｐ＝０．３２５，徐闻黄牛的平均杂合度Ｈ＝０．１４１，海南黄牛的平均杂合度Ｈ＝０．１３２；荷斯坦牛的多态座位百分比Ｐ＝０．２７５，平均杂合度Ｈ＝０．０９９，研究结果表明这３个品种的遗传多样性相当丰富，多态座位百分比和平均杂合度随着品种选育程度的提高而降低。研究结果为把徐闻黄牛和海南黄牛合称为雷琼黄牛的观点提供了佐证。

连续多重PCR牛胚胎性别鉴定

本实验以BOV97M序列和牛的1.715卫星DNA序列设计引物进行PCR扩增,其中前者为雄性特异扩增,后者为雌雄共同扩增,以进行牛的性别鉴定。PCR扩增共进行43个循环,其中前11个循环为雄性特异扩增,在随后的33个循环中,再加入内标引物,即进行多重PCR扩增,其灵敏度可达到10pg级(约3个细胞)。

秦川牛脂联素基因第2外显子多态性及其与部分产肉性状的相关性

【目的】研究秦川牛脂联素基因第2外显子的多态性及其与部分产肉性状的关系。【方法】以405头24月龄的秦川牛为研究对象,利用PCR-SSCP和测序技术对其脂联素基因第2外显子的多态性进行检测,并对发现的多态位点与秦川牛产肉性状的相关性进行分析。【结果】秦川牛脂联素基因第2外显子存在AA、AB和BB 3种基因型,基因型频率分别为0.696,0.207和0.097;等位基因A和B的基因频率分别为0.799和0.201。BB基因型个体在64 bp处发生了G→C突变,导致22位的谷氨酸(GAA)转变为谷氨酰胺(CAA)。胸围、宰前活质量、胴体质量、背膘厚和眼肌面积等指标,AA型个体显著高于AB型(P<0.05);AA型个体腿臀围显著高于AB型(P<0.05),极显著高于BB型(P<0.01)。【结论】脂联素基因第2外显子可能是影响秦川牛产肉性能的主效数量性状座位或与之紧密连锁,可作为秦川牛产肉性状的辅助选择标记。

关岭黄牛ANGPTL4基因多态性与生长性状关联分析

为研究牛血管生成素样蛋白4(angiopoietin-like protein 4,ANGPTL4)在调节脂肪和能量代谢中的作用,采用DNA测序技术,对关岭黄牛92头个体ANGPTL4基因的多态性进行研究,分析多态性位点与关岭黄牛生长性状的相关性。结果表明,在扩增片段为752 bp的产物中,发现387 C>T、418 C>T、449 A>T等3个突变位点,3个突变位点均处于哈代-温伯格不平衡状态(HWE)(P<0.05),3个多态位点的多肽信息含量(PIC)均为中度多态。相关性检测结果表明,418 C>T突变位点不同基因型关岭黄牛的体高、体斜长、胸围、腹围表现出差异极显著(P<0.01),449A>T突变位点不同基因型关岭黄牛的体高表现出差异显著(P<0.05),胸围、腹围表现出差异极显著(P<0.01)。

秦川牛运铁蛋白多态性与体尺、体重性状的关系分析

秦川牛运铁蛋白 (Tf)多态性与体尺、体重性状之间的关系分析表明 :( 1 )秦川牛体尺、体重的优势基因为TfD1与TfE ;( 2 )在胸深性状上 ,TfEF型的LSE值极显著地大于其它各基因型值 (P <0 .0 1 ) ,TfD1E、TfD1D2 、TfAA、TfEE、TfD2 E、TfD1D1、TfD2 D2 、TfAD1的LSE值显著地大于TfD2 F值 (P <0 .0 5) ;( 3)其他 8个性状各基因型值间差异不显著 (P >0 .0 5)。

柴达木黄牛与我国其它品种黄牛亲缘关系的探讨

采用聚丙烯酰胶凝胶电泳法对柴达木黄牛和青海东部黄牛HB ,TF ,PTF ,PA和ALP5个基因座进行分析 ,根据其基因频率计算与我国其它品种黄牛的遗传距离 ,并用最短距离法进行聚类分析 ,以评价柴达木黄牛与其它黄牛的亲缘关系。结果表明 ,柴达木黄牛与青海东部黄牛之间存在最亲密的亲缘关系 ,与北方牛系蒙古牛 。

大别山牛PAX3基因多态性及其与生长性状的关联分析

【目的】探究PAX3基因多态性与大别山牛生长性状的相关性。【方法】采集292头安徽大别山成年(24~48月龄)母牛的耳组织,并测定其体尺数据,提取DNA后,通过PCR和测序技术鉴定出大别山牛群体中PAX3基因的多态性,利用POPGENE、Haploview和SHEsis软件,分别对多态位点进行遗传多样性、哈代-温伯格平衡和单倍型分析,利用SPSS 23.0软件分析其与生长性状的相关性。【结果】在大别山牛PAX3基因第4内含子中检测到3个SNPs位点(g.4718G>C、g.4744T>C和g.4757C>A),第6内含子中检测到1个SNPs位点(g.78920C>T),4个SNPs位点均存在3种基因型。遗传多样性分析发现,g.4718G>C位点属于低度多态(PIC≤0.25),g.4744T>C、g.4757C>A和g.78920C>T位点均属于中度多态(0.25<PIC≤0.50),且除g.4757C>A外,其余3个位点均处于哈代-温伯格平衡状态(P>0.05)。单倍型分析发现,4个SNPs位点间无强连锁相关(r^(2)<0.33),形成13种单倍型,其中频率大于0.03的单倍型有6个。相关性分析发现,g.4718G>C位点与大别山牛的十字部高显著相关(P<0.05);g.4744T>C位点与十字部高、腹围和腰角宽极显著相关(P<0.01);g.4757C>A位点与腰角宽显著相关(P<0.05);g.78920C>T位点与腹围极显著相关(P<0.01),与管围显著相关(P<0.05)。【结论】PAX3基因第4内含子的g.4718G>C、g.4744T>C和g.4757C>A位点以及第6内含子的g.78920C>T位点多态性与大别山牛群体部分生长性状具有显著或极显著的相关性,可以作为大别山牛遗传选育的候选分子标记。

化学辅助去核法对延边黄牛卵母细胞去核率及其重构胚发育率的影响

为提高延边黄牛体细胞克隆的效率,采用化学辅助去核法——化学诱导剂脱羰秋水仙碱(Demecolcine,简称Deme)处理体外成熟的MⅡ期延边黄牛卵母细胞,经显微操作构建重构胚后观察发育情况。试验研究了Deme的处理浓度、作用时间对延边黄牛卵母细胞去核效果及其重构胚发育的影响。结果显示:体外成熟的卵母细胞在0.2μg/mL、0.3μg/mL、0.4μg/mL的Deme溶液中处理45 min,显核率与去核率无显著差异,去核率达100%,但是0.2μg/mL处理组的囊胚发育率显著高于其他处理组;45 min处理组的显核率显著高于30 min、60 min处理组,45 min处理组的囊胚率高于其他处理组;化学辅助去核法的囊胚率显著高于盲吸法。化学辅助去核能够准确定位去除细胞核,并提高了延边黄牛体细胞克隆的去核率及重构胚的体外发育率。

黄牛毛色位点表型遗传分化的研究

应用扩展的Ｎｅｉ·Ｍ公式对陕西境内４个黄牛群体毛色位点的表型遗传分化进行了研究。结果表明，各总群平均表型异质度与其选种水平密切相关，各总群的表型遗传分化程度与各畜群规模及分布范围有关，各总群遗传变异来源在系统内和系统间存在明显差异，部分表型遗传分化程度较高的指标可作为未来品系育种的研究对象。

牦牛和黄牛Prdm9基因锌指域序列的比较

为了研究牦牛杂交雄性不育的分子机制,采用3'-RACE方法分别从牦牛、黄牛睾丸组织的总RNA中获取其Prdm9基因的部分cDNA序列,长度分别为1 548、1 392 bp,包含全部的锌指域。对比分析显示:牦牛、黄牛的Prdm9基因均含有5个连续的C2H2型锌指,每个锌指均由21个氨基酸构成,锌指间是高度保守序列TGEKPYV,并且锌指域从这段高度保守序列开始;牦牛、黄牛各自Prdm9基因中的5个锌指间在氨基酸构成上存在差异,并且二者在整个锌指域上有6个氨基酸差异,其中5个都在锌指中的重要正向选择位点处,推测这些氨基酸差异可能与牦牛种间杂交后代的雄性不育有关。