肉牛早孕因子(EPF)的活性检测及分离纯化

【目的】检测怀孕肉牛早孕因子（Early pregnancy factor,EPF）的活性,并对其进行分离纯化,以期为EPF快速检测方法的建立提供依据。【方法】采集妊娠1~9个月的肉牛血样,并进行妊娠诊断,通过玫瑰花环抑制试验（Rosette inhibition test,RIT）检测其早孕因子的活性。对有活性的血样依次进行DEAE-52离子交换层析、ConASepharose 4B亲和层析和Heparin Sepharose Cl 6B亲和层析,分离纯化EPF,对纯化产物进行SDS-PAGE检测,并测定其等电点。【结果】怀孕牛和未怀孕牛血清的玫瑰花环抑制滴度差异显著（P〈0.05）。玫瑰花环抑制试验显示,纯化出的EPF具有活性,其分子质量为53.6 ku,等电点为6.8。【结论】利用玫瑰花环抑制试验检测早孕因子活性,可以鉴定肉牛的妊娠状态;利用层析的方法可以分离出早孕因子的活性蛋白。