西藏羊和白-藏杂交羊外周血IFN-α、IgG和IL-2的研究

为了解西藏羊和白萨福克羊与西藏羊的杂交后代羊生长发育中免疫因子的分泌特点和免疫学特征,以西藏羊和白-藏杂交羊为研究对象,应用ELISA方法检测0.5、1和1.5岁外周血中干扰素(IFN-α)、免疫球蛋白G(IgG)和白细胞介素-2(IL-2)的质量浓度,分析其变化规律。结果表明:随年龄的增长,藏公羊IL-2呈逐渐降低的趋势,而藏母羊呈逐渐升高的趋势(P<0.05);藏杂交公羊和藏母羊IgG含量都呈逐渐降低趋势,藏公羊下降较明显(P<0.05);藏公羊IFN-α的含量逐渐降低,0.5岁与1岁之间下降趋势明显(P<0.05),而藏母羊变化不大。随年龄的增长,白-藏杂交羊公羊和母羊IL-2含量先降低再升高;白-藏杂交羊公羊IgG含量变化不大,母羊则是先升高后下降趋势,且1岁和1.5岁之间下降明显(P<0.05);白-藏杂交羊公羊IFN-α的含量逐渐降低,而母羊是先升高后下降。

不同因素对西藏阿旺绵羊胚胎冷冻与移植效果的影响

为探究西藏阿旺绵羊推行胚胎移植及胚胎冷冻技术的可行性,以阿旺绵羊为供体,澳湖羊为受体,探讨发情期内不同月份对阿旺绵羊超排效果的影响、不同发育阶段鲜胚和移植数量对母羊受胎率及产羔率的影响,以及冷冻方法对胚胎移植的影响。结果显示:发情期7月超排组平均可用胚数(3.95±4.23)显著低于10月超排组(5.45±4.03);阿旺绵羊胚胎移植2枚桑椹胚的受体妊娠率最高,达到81.81%,产羔率达57.58%,具有显著性差异;阿旺绵羊胚胎程序化冷冻组受体妊娠率为35.48%,显著优于玻璃化冷冻组受体妊娠率13.63%。以上结果表明,西藏推行阿旺绵羊胚胎移植技术的可行性较高。

L-半胱氨酸对绵羊卵巢颗粒细胞增殖、凋亡和类固醇激素分泌的影响

旨在探讨L-半胱氨酸(L-Cys)对体外培养绵羊卵巢颗粒细胞(GCs)增殖、凋亡和类固醇分泌的影响。本研究采集1~1.5岁龄体重相近饲养条件相同的30只健康性成熟小尾寒羊母羊新鲜卵巢,从优势卵泡(2~8 mm)中收集GCs,随机分为5组,每组6个重复,各组添加L-Cys浓度分别为0、100、300、500和700μmol·L^(-1),培养48 h后用CCK-8试剂盒进行细胞增殖活力测定,Annexin V-FITC/PI流式细胞仪检测GCs的凋亡情况,采用ELISA检测GCs培养液上清中孕酮和雌二醇的分泌水平并采用实时荧光定量PCR和Western blot分析L-Cys对绵羊颗粒细胞增殖相关基因(PCNA、CCND2、CCNB 1)、凋亡相关基因(BAX、Caspase-3、Bcl-2)和类固醇分泌相关基因的(STAR、3β-HSD、CYP 11A1、CYP 19A1)mRNA和蛋白表达的影响。结果显示,100、300和500μmol·L^(-1)组的L-Cys均可显著促进绵羊GCs的增殖活力(P<0.05),并显著抑制其凋亡率(P<0.05)。添加300μmol·L^(-1)的L-Cys显著抑制了孕酮(P 4,P<0.05)的分泌。进一步研究发现,300μmol·L^(-1)和500μmol·L^(-1)组的L-Cys可以上调增殖相关基因(PCNA、CCND2、CCNB 1)mRNA表达水平,其中300μmol·L^(-1)组的增殖蛋白(PCNA、CCND2、CCNB1)表达量显著上升(P<0.05);100μmol·L^(-1)和300μmol·L^(-1)组显著下调凋亡相关基因(BAX、Caspase-3)mRNA(P<0.05)及其蛋白表达水平(P<0.05)。添加300μmol·L^(-1)L-Cys显著降低了类固醇相关基因(STAR、3β-HSD)mRNA及蛋白表达水平(P<0.05),添加100μmol·L^(-1)和300μmol·L^(-1)L-Cys显著升高了类固醇相关基因(CYP 11A1、CYP 19A1)mRNA(P<0.05)及其蛋白表达水平(P<0.05)。综上,L-Cys通过上调基因PCNA、CCNB1、CCND2、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达、下调基因BAX、Caspase-3 mRNA及其蛋白表达,促进绵羊GCs增殖,抑制其凋亡;L-Cys通过下调基因STAR、3β-HSD mRNA及其蛋白表达以及上调基因CYP 11A1 mRNA及其蛋白表达抑制P 4的分泌。

肉羊体外胚胎生产技术规模化应用中品种的影响

旨在分析品种因素对OPU-IVEP商业化快繁效率的影响。本研究以经品种鉴定的健康8月龄至3周岁黑头萨福克、黑头杜泊、德克赛尔肉用种母羊为试验供体,在内蒙古赛诺种羊科技有限公司,采用OPU技术获取卵母细胞并进行体外胚胎工厂化生产或经腹腔镜输精和手术冲胚获得体内胚胎,进行胚胎移植,记录卵母细胞回收、胚胎发育以及移植妊娠的相关数据,进行统计分析。比较不同品种在体外胚胎规模化生产中卵母细胞回收效率、卵母细胞体外受精和胚胎发育能力、胚胎移植妊娠和产羔效率等方面的差异;同时,还比较了不同品种体内、外胚胎生产技术的应用效果。结果表明:1)3个品种间卵母细胞回收率差异极显著(P<0.01),黑头杜泊回收效率最高;2)3个品种的体外受精卵裂率无显著差异(P>0.05),但德克赛尔羊的囊胚发育率极显著高于其他两个品种(P<0.01);3)无论体内胚胎还是体外胚胎生产移植,各品种间胚胎移植受胎率和平均产羔数均无显著差异(P>0.05),且各品种内,体内胚胎和体外胚胎移植的平均受胎率和产羔率均无显著差异(P>0.05)。综上所述,在工厂化、规模化应用绵羊体外胚胎生产技术过程中,不同品种间卵泡发育、回收卵母细胞数、囊胚发育率等存在差异,平均卵泡数和平均回收卵母细胞最少的德克塞尔羊的囊胚发育率最高;移植后受胎和产羔情况在不同品种间无显著差异,体内胚胎和体外胚胎单次生产获得的后代数也无显著差异,但OPU-IVEP的供体利用率远大于MOET。

线粒体tRNA-Lys(T7719G)基因变异影响绵羊颗粒细胞凋亡生理机制研究

本团队前期研究发现小尾寒羊线粒体tRNA-Lys基因(T7719G)变异与产羔数显著相关,并降低了颗粒细胞凋亡率,为此,开展了该变异影响颗粒细胞凋亡生理机制的研究。本研究选取G、T基因型绵羊各3只,屠宰后取卵巢组织培养颗粒细胞,颗粒细胞生理指标检测试验分为两组,每组3个重复,分别检测线粒体基因组拷贝数,线粒体呼吸酶复合物Ⅰ、复合物Ⅱ、复合物Ⅲ、复合物Ⅳ、复合物Ⅴ活性,线粒体耗氧量和胞外产酸能力、ROS产量、ATP水平和膜电位,以及tRNA-Lys总量和氨酰化水平,13个mtDNA编码多肽蛋白表达水平。结果表明,G基因型颗粒细胞线粒体拷贝数与T基因型差异极显著(P<0.01),为T基因型的1.78倍。G基因型细胞线粒体复合物Ⅲ活性是T型细胞的1.25倍(P<0.05),表明G基因型细胞氧化呼吸功能增强。G基因型颗粒细胞线粒体耗氧量、ATP偶联耗氧量比T基因型细胞分别提高了6.84%(P<0.05)和15.46%(P<0.01),G基因型细胞糖酵解能力显著降低(P<0.01),活性氧含量水平显著降低了34%,ATP含量明显上升,为T基因型的1.25倍(P<0.05),线粒体膜电位显著上升,为T基因型的1.24倍(P<0.01);G基因型细胞tRNA-Lys总量显著提高50%(P<0.01),氨酰化tRNA-Lys比例较T型细胞提高33.4%(P<0.01)。线粒体基因组编码的13个多肽(ND1、ND2、ND3、ND4、ND4L、ND5、ND6、CtyB、COⅠ、COⅡ、COⅢ、ATP6、ATP8)表达水平均显著提高(P<0.05)。初步解析了线粒体tRNA-Lys(T7719G)变异影响绵羊颗粒细胞凋亡的生理机制,即tRNA-Lys(T7719G)变异影响tRNA-Lys稳态和氨酰化水平,影响mtDNA编码的多肽翻译效率,同时引起拷贝数、ATP水平、ROS含量和部分酶活性变化,进而改变线粒体能量代谢功能和细胞凋亡。

干扰PPARγ基因对绵羊滋养层细胞增殖、凋亡、迁移和脂质积累的影响

旨在通过干扰PPARγ基因的表达,探究PPARγ对绵羊滋养层细胞增殖活性、细胞凋亡、细胞迁移率以及脂质累积的影响,为深入研究PPARγ在绵羊滋养层细胞中的分子机制提供基础依据。本研究设计并合成干扰PPARγ基因的siRNA干扰片段,通过Western Blot和RT-qPCR筛选干扰效率最高的siRNA,并转染至分离培养的绵羊滋养层细胞中。通过BODIPY染色检测干扰PPARγ基因后滋养层细胞中脂滴的聚积,比色法检测细胞中甘油三酯的含量,并利用RT-qPCR检测脂代谢相关基因的转录水平。采用CCK-8法、划痕试验和流式细胞法,分别探究干扰PPARγ基因对滋养层细胞增殖活性、细胞迁移率及细胞凋亡的影响。筛选得到了干扰效率最高的siPPARγ-1片段用于转染滋养层细胞,在干扰滋养层细胞PPARγ基因表达后,细胞中脂滴聚积能力下降,甘油三酯含量降低(P<0.01),脂代谢相关基因CD36、FABP4和PLIN2的转录水平也受到抑制(P<0.01)。同时,滋养层细胞的增殖活力也显著降低(P<0.05),细胞迁移率减少(P<0.01),而细胞凋亡率显著上升(P<0.01)。本研究表明PPARγ基因在调控滋养层细胞功能方面起重要作用,可对其具体分子机制进行深入研究,以期用于繁殖育种实践中。

玉米赤霉烯酮影响绵羊卵母细胞体外成熟的分子机制研究

实验旨在研究玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)对绵羊卵母细胞体外成熟相关基因表达及活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)水平的影响。采集绵羊卵巢,收集卵母细胞,分为4组,包括对照组(CG组)和实验组(TG1、TG2和TG3组)。CG组不做任何处理,TG1、TG2和TG3组分别在成熟液中添加10、20、30μmol/L ZEA进行体外成熟培养,qPCR技术检测减数分裂成熟和凋亡等相关基因mRNA的相对表达量,ROS检测试剂盒检测卵母细胞内ROS水平。结果表明:与CG组相比,当培养液中ZEA浓度达到20μmol/L时,卵母细胞成熟率显著降低,GPX、SOD1、SOD2、Caspase3、ATG3和ATG7的mRNA表达水平显著升高,而CDC20、GDF9和BMP15的mRNA表达水平显著降低,但LC3、BAX和BCL-2的mRNA表达水平在统计学上没有显著差异;与CG组相比,添加ZEA后卵母细胞内ROS含量极显著升高。以上结果提示,ZEA能通过诱导绵羊卵母细胞发生凋亡和氧化应激,抑制细胞分裂从而影响卵母细胞的体外成熟。

大豆卵磷脂对绵羊精液低温保存效果的影响

为了研究大豆卵磷脂对绵羊精液低温保存效果的影响,在杜泊绵羊精液稀释液中分别添加0(对照)、1.875、3.750、7.500、15.000 g/L大豆卵磷脂,在4℃条件下进行低温保存,每隔12 h观察一次精子活率,统计精子有效存活时间和总存活时间,检测第48小时精子的畸形率和顶体完整率。结果表明,1.875 g/L组的精子有效存活时间、总存活时间显著高于对照组和其余各试验组(P<0.05);1.875 g/L组的精子顶体完整率显著高于15.000 g/L组(P<0.05),畸形率显著低于15.000 g/L组(P<0.05)。说明在稀释液中添加1.875 g/L的大豆卵磷脂可以延长精子的存活时间,提高绵羊精液低温保存的质量。

原花青素对青春期前羔羊卵母细胞体外成熟的影响

青春期前羔羊的卵母细胞发育能力低于成年母羊的卵母细胞,这限制了幼畜体外胚胎移植(Juvenile in vitro Embryo Transfer,JIVET)技术的广泛应用。为探讨原花青素B2(Procyanidin B2,PCB2)对提高青春期前羔羊卵母细胞发育能力的影响及其机制,本研究收集了经促性腺激素刺激的4~8周龄羔羊卵母细胞,在体外成熟液中培养。在卵母细胞成熟液中添加5μg/mL PCB2作为PCB2组,未添加PCB2组为对照组,培养24 h后测定卵母细胞第一极体排出率、孤雌激活后的卵裂率和囊胚率,并进一步测定胞内活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)含量、线粒体活性和线粒体膜电位水平等。结果表明:PCB2组卵母细胞第一极体排出率高于对照组(36.76%vs 31.11%,P<0.05),但卵裂率(49.17%vs 49.68%)及囊胚率(47.47%vs 54.06%)与对照组无显著差异;进一步研究发现在IVM液中添加5μg/mL PCB2降低了卵母细胞ROS水平(P<0.01),并提高了GSH水平(P<0.05)、线粒体活性(P<0.01)以及线粒体膜电位水平(P<0.05)。由此可见,在IVM过程中添加5μg/mL PCB2能有效降低青春期前羔羊卵母细胞的氧化应激,提升线粒体功能和成熟效率。

绵羊手工克隆关键技术流程优化

手工克隆技术(Handmade Cloning,HMC)是一种不需要显微操作仪的更为方便的克隆方法,但是其对于操作人员的要求更加严格。本文着重于对透明带消化时间、融合时间、供核类型、代数、饥饿与否几个关键节点进行优化。结果表明:链霉蛋白酶消化时间在70~105 s之间死亡率极显著低于处理时间大于105 s组(3.1%vs. 25.1%),胞质碎裂率极显著低于处理时间小于75 s组(2.1%vs. 72.0%)。另外,供核细胞为P0~P1代时,囊胚率极显著低于饥饿48h或0h的P2~P5代供核细胞(24%vs. 40.1%、39.8%)。在融合率方面,随着操作时间的加长,累加平均融合率呈现降低趋势。在供核的选择方面,使用脐带间充质干细胞获得的囊胚率极显著高于耳缘成纤维细胞(40.4%vs. 21.8%)。由此可见,绵羊HMC法克隆过程中,使用链酶蛋白酶处理75~105 s,融合时间控制在115 min之内,使用代数大于P2的间充质干细胞能够获得较高的囊胚率。

羊GV期卵母细胞玻璃化冷冻保存研究进展

生发泡(germinal vesial,GV)期卵母细胞由于未形成极为敏感的纺锤体,对于冷冻卵母细胞以及长期保存地方家畜种质资源具有无可比拟的优势。研究人员对此进行了广泛的关注,基于此,本文综述了羊GV期卵母细胞玻璃化冷冻保存的意义,分析了目前羊GV期卵母细胞冷冻保存过程中存在的问题,总结了有效提高卵母细胞冷冻效率的一些解决方法,对提高羊GV期卵母细胞冷冻保存效率具有一定的借鉴与参考。

安石榴甙对湖羊精液低温保存效果的影响

为探究安石榴甙对湖羊精液低温保存效果的影响,本实验采集3只1~2岁健康成年湖羊精液,混匀后取5份等量精液,按1:9的比例加入不同安石榴甙浓度(0、5、15、30、45μmol/L安石榴甙)的稀释液,4℃保存7 d。检测精子的活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体膜电位(MMP)、活性氧(ROS)含量、丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)活性等指标。结果显示:保存4~7 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精子活率、活力显著高于其他各组;保存2~7 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精子质膜完整率、顶体完整率显著高于其他各组;保存1、3、5 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精子的MMP显著高于其他各组;保存3、5 d时,30μmol/L安石榴甙组精子ROS含量显著低于其他各组;保存3、5 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精液MDA含量显著低于其他各组;保存1、3、5 d时,30μmol/L安石榴甙组湖羊精液CAT活性显著高于其他各组。本研究结果表明,在稀释液中添加30μmol/L安石榴甙可以显著提高精液保存质量。

不同季节吐鲁番黑羊血清中生殖激素的变化规律研究

为研究吐鲁番黑羊不同季节血清生殖激素的分泌变化规律与繁殖活动的调控关系,本实验以6只年龄为2~4岁、体重为45~55kg的吐鲁番黑羊母羊为研究对象,采集2019年7月-2020年7月春、夏、秋、冬4个季节吐鲁番黑羊血液样本,利用ELISA酶联免疫吸附试验分别测定整个发情周期血清中促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、雌激素(E_(2))和孕酮(P_(4))水平,并分析其分泌规律。结果表明:吐鲁番黑羊血液中FSH、LH、E_(2)、P_(4)含量呈现显著的季节性变化,夏秋两季FSH、LH和E_(2)的分泌量高于春季和冬季(P<0.05),P_(4)含量则是春季和冬季高于夏季和秋季(P<0.05);情期内4种激素上升下降变化趋势一致,没有明显的季节性差异,且吐鲁番黑羊在不同季节都能自然发情,其中夏季与秋季自然发情效果最好。综上,为进一步提高吐鲁番黑羊繁殖效率和生产效益,可在夏季和秋季对吐鲁番黑羊母羊进行同期发情人工授精,扩大吐鲁番黑羊种群。

原花青素对吐鲁番黑羊精液低温保存效果的影响

为研究原花青素(PC)对吐鲁番黑羊精液低温保存效果的影响,本实验采用假阴道法采集5只2岁成年吐鲁番黑羊公羊精液,在精液基础稀释液中添加不同浓度(0、10、20、30、40μg/mL)的PC进行低温保存,每隔24 h检测精子活率、活力、曲线速率(VCL)、直线速率(VSL)、畸形率、质膜完整率等指标,在保存24、72、120 h时检测总抗氧化能力(T-AOC)活性和过氧化氢酶(CAT)活性。结果表明:各PC添加组的精子活率、活力、VCL、VSL、质膜完整率、T-AOC和CAT活性均高于对照组(P<0.05),畸形率低于对照组(P<0.05),其中20μg/mL PC添加组的精子质量高于其他各组(P<0.05)。综上所述,在基础稀释液中添加PC可以显著提高精液品质,且PC添加浓度为20μg/mL时对吐鲁番黑羊精液低温保存效果最佳。

绵羊精液中X、Y 精子比率快速评价方法的建立

研究旨在建立以TaqMan荧光PCR为基础的快速检测绵羊X、Y精子比率的方法,为绵羊X、Y精子分离技术的发展与应用提供技术支撑。试验分别针对X、Y染色体特异性基因F9和SRY设计引物与探针,以绵羊基因组DNA为模板进行片段扩增、质粒连接、扩增提纯后按不同比率混合构建标准曲线,计算拟合方程。并通过对3份商用X、Y性控精液及2份鲜精进行测定来检验方法的准确性、稳定性及可靠性。结果表明,商用X性控精液中X精子的比率分别为(89.46±3.37)%、(89.86±2.85)%、(90.02±2.19)%,商用Y性控精液中Y精子的比率分别为(89.02±2.68)%、(88.21±2.63)%、(88.72±3.93)%,检测结果与质控报告所标注的X、Y精子比率无显著性差异(P<0.05)。鲜精的检测结果表明,X、Y精子比率分别为(49.86±2.90)%、(49.30±2.10)%,与理论值50%无显著性差异(P<0.05)。综上,研究建立的以TaqMan探针荧光定量PCR为基础的快速检测绵羊X、Y精子比率的方法速度快、检测所需精液体积小,准确性、稳定性及可靠性高,能够为绵羊X、Y精子分离检测提供技术支撑。

多胎绵羊两年三产高频繁殖技术优化试验

为建立多胎绵羊两年三产高频繁殖技术,以404只多胎萨福克经产母羊为研究对象,通过CIDR+PMSG法同期发情、人工输精、B超早期妊娠诊断施行两年三产,比较分析子宫颈口输精和腹腔内窥镜输精母羊的妊娠率,优化操作流程,分析经济效益。结果表明:采用CIDR+PMSG法实施同情发情母羊的发情率为95%,腹腔内窥镜输精母羊的妊娠率为87%,子宫颈口输精母羊的妊娠率为80%,腹腔内窥镜输精优于子宫颈口输精。两年三产高频繁殖技术母羊的产羔率为318%,比一年一产(212%)提高106%;同期发情及子宫颈口输精处理的成本40元/只,只均经济效益334.04元。说明两年三产高频繁殖技术可进一步提高多胎绵羊的繁殖效率,增加养殖效益。

不同运动方式对特克赛尔种公羊精液品质的影响

为研究运动方式对特克赛尔种公羊精液品质与性欲的影响,试验选取40只健康、性欲正常特克赛尔种公羊,随机分为4组,每组10只,进行10周不同方式的运动训练,试验期最后1 d间隔采精2次,测定4组种公羊的精液品质与性欲评分指标。结果表明,与对照组相比,A组、B组、C组的运动方式极显著提升种公羊的鲜精活率(P<0.01),运动方式对精液量与精子密度无显著影响,与A组、对照组相比,B组与C组极显著降低种公羊的精子畸形率(P<0.01),B组与C组的有效精子数显著升高(P<0.05);与对照组相比,A组、B组、C组显著降低种公羊的性反应时间(P<0.05),A组明显高于B组、C组(P<0.05),运动方式对种公羊射精爬跨次数与性欲评分无显著影响。由此说明,运动可显著改善特克赛尔种公羊的精液品质与性欲,驱赶跑动为种公羊最优的运动方式。

肉用绵羊高效繁育技术研究

新疆生产建设兵团第七师124团的畜牧业主要以发展养羊业为主,建成了以南非肉用美利奴羊罗米尼·希尔斯肉用羊养殖为主的种羊场,采用农区半放牧半舍饲方式进行规模化饲养。文章概述了该团绵羊品种现状、种质资源的利用情况和采取的改良措施,即应用胚胎移植、发情调控技术实行两年三胎,结合高效繁育配套技术,提高了品种繁育效率,加快了纯种繁育期限。

欧拉-湖羊杂交繁育同期发情与人工授精技术应用研究

为了提升临潭县牧区肉羊的繁殖能力、解决肉羊养殖体系不完善的问题,试验以当地优势湖羊为母本、引进欧拉羊为父本进行杂交改良。首先采用虎红平板凝集试验和聚合酶链式反应(PCR)对羊只进行布鲁氏杆菌病检测;其次通过DNA测序筛选湖羊多胎纯合子(GG型)个体,以此增加杂交肉羊的繁殖能力;最后应用同期发情及人工授精技术进行肉羊品种杂交改良,从而构建出一套增强临潭县肉羊繁殖性能的生产模式。结果表明:欧拉羊与湖羊杂交模式既利用了母本品种的繁殖力优势,又利用了父本的肉用和抗病力优势,后备母羊的受孕率得到了明显提升(85%),同时缩短了其繁育周期,有效增加了优质种公羊的配种效果,进一步降低了养殖成本。

高山美利奴羊种公羊利用效率研究与应用

该文从种公羊的选育鉴定技术、种公羊的饲养管理技术、种公羊繁殖技术(包括自然交配、人工辅助交配、人工授精技术)、冻精技术和胚胎移植技术等方面介绍了种公羊的利用效率,以期为提高种公羊的精液品质和繁殖性能,提高优质种公羊利用率和养羊业的经济效益提供理论参考。