羊活体采卵及体外胚胎生产技术研究进展

近年来,集约化养羊业发展迅速,对具有优良性状的羊需求量逐年增加。高效的繁殖技术为羊群体的扩大提供了重要技术基础,特别是超数排卵-胚胎移植技术已经在羊的繁育中得到了高效应用,同时以羊的活体采卵技术、体外胚胎生产技术、幼畜超数排卵胚胎和移植技术等为核心的技术体系也取得了重要进展。活体采卵是指从活体家畜体内回收卵母细胞的技术,是羊体外胚胎生产的重要前提环节。文章对近年来羊体外胚胎生产的发展历程、相关技术应用现状及前景进行综述,以期为羊活体采卵、体外受精和胚胎移植技术的进一步完善提供参考。

影响羊供体超数排卵与受体移植受胎率的因素分析

为了研究影响羊供体超数排卵效果及胚胎移植受体受胎率的因素,试验选取萨福克羊和东弗里升羊2个供体品种,受体羊为本地阿勒泰羊,对促卵泡素(FSH)不同批次、长途运输应激因素、不同输精方式、技术员的熟练程度以及受体同期化时间差等5个方面的影响因素开展了相关研究。结果表明:FSH的不同批次对萨福克和东弗里升2种供体羊可用胚率无显著影响(P>0.05);长途运输组供体羊,无论是萨福克羊还是东弗里升羊,胚胎数和受胎率均极显著低于对照组(P<0.01);不同输精方式,子宫角+常规输精的获胚率极显著高于常规输精、子宫角输精(P<0.01),子宫角输精显著高于常规输精(P<0.05);胚胎移植操作熟练组受胎率显著高于对照组(P<0.05);受体羊撤栓时间不同,发情时间相差±12 h,两组受体羊受胎率均无显著差异(P>0.05)。本试验结果可为从事胚胎移植工作的科研工作者和技术员提供借鉴。

羊体外胚胎高效生产技术研究现状

体外胚胎生产技术作为胚胎工程技术的基础,在提高繁殖潜力、加速良种繁育等多方面具有重要意义,包括卵母细胞采集、体外成熟、体外受精、体外胚胎培养等技术。文章主要介绍羊体外胚胎高效生产技术研究现状,分析卵母细胞体外成熟、体外受精、体外胚胎培养影响因素,并提出了羊卵泡的预测标记、卵母细胞新型质检手段、模拟羊体内环境的培养体系,以期为羊卵母细胞体外培养技术的研究及在胚胎高效生产中的应用提供参考。

影响羊胚胎移植妊娠率的因素分析

本研究对胚胎质量、胚胎移植数量、胚胎发育阶段、冷冻方法、移植方法及饲养管理水平等因素对移植妊娠率的影响进行研究。结果表明:移植胚胎移植数量和妊娠率有显著影响(P<0.05);在冷冻胚胎前后,人为因素、使用设备等均可影响到胚胎的质量,进而影响到移植的妊娠率(P<0.05);经过不同处理方法的胚胎其移植效果差异显著,用程序冷冻法冷冻波尔山羊胚胎移植妊娠率为10.7%(60/560),用EFS40玻璃化冷冻法冷冻胚胎其移植妊娠率为42.9%(60/140);受体的营养状况不同对移植妊娠率起很大作用,从营养状况不好到营养状况良好的受体,其移植妊娠率差异显著;供、受体发情的同期化程度也是决定妊娠率的主要因素,发情同步差在6h内的妊娠率最高(62.3%);受体的重复使用、健康状况和季节等因素均可影响到移植的妊娠率。

羊胚胎移植B超监测技术及其影像的研究

利用AMI-900型兽用B超,对羊胚胎移植进行了全程监测.主要包括供、受体羊选择前的普查,供体超排效果的监测,受体妊娠及胚胎发育监测,子宫、卵巢恢复状况监测等.根据所得资料和经验,总结出了羊胚胎移植中的B超监测技术及其声像图表现.

绵羊体外成熟、体外受精卵的体外发育及移植后的产羔

体外成熟、体外受精后的绵羊卵在体外长期培养或在2～4细胞期和桑堪～囊胚期移植给受体母羊,观察了培养卵的发育和移植后的受胎率。方法是将采自屠宰场的绵羊卵巢在1～12小时内带回实验室,抽取卵母细胞。从中选取卵丘细胞层完整的卵子,在二氧化碳培养箱内,用含有10％NSS(或FCS)、hCG和E_2,并以Hepes缓冲的M199培养24～26小时。再用以IonophoreA23187诱导获能处理过的新鲜公羊精于进行体外受精.7～10小时后移入发育培养基,即含有10％FCS(或NSS)和丙酮酸钠的Hepes缓冲的M199内继续培养,受精后将部分发育为2～4细胞胚和桑堪～囊胚期胚手术移植给受体母羊。另一部分卵子则在受精后48～72小时的不同时间内统计其卵裂卵的出现率,并继续培养7～12天详细观察卵裂卵的发育情况。在受精后48～72小时卵裂卵的出现率,FCS和NSS组分别为39.6％145/366)和52.4％(182/347),前者显著低于后者;将61枚2～4细胞期胚和桑椹～囊胚期胚分别移植给20只受体母羊,有10只受胎。共产羔11只,受胎率为50％;在发育培养液内继续培养的482枚卵裂卵中有312枚(64.7％)发育为桑椹～囊胚期胚(其中包括部分孵化囊胚)。

影响杜泊绵羊超数排卵效果的因素分析

对53只杜泊绵羊实施超排处理，系统地分析了供体羊年龄、胎次、重复超排、两次超排间隔时间、胚胎回收部位和季节对超数排卵效果的影响。结果表明：24月龄以上羊平均回收胚胎数（8．71）显著高于8～12月龄羊（7．18）。8～12月龄羊可用胚胎所占比例（95．29％）显著高于13～24月龄羊（75．96％）；经产二胎羊平均回收胚胎数（8．71）显著高于初产羊（7．00），初产羊可用胚胎所占比例（96．14％）显著高于经产一胎羊（75．88％）；第3次超排处理平均回收胚胎数（6．60）显著少于首次（8．71）和第2次处理（8．10），首次超排处理平均可用胚胎数（7．47）高于第2次（5．90）和第3次超排处理（5．00）；2次超排间隔10个月可用胚胎所占比例（92．14％）显著高于间隔1个月（77．09％）；从输卵管平均回收胚胎数（10．14）显著多于从子宫角平均回收胚胎数（8．22）；秋季超排处理平均可用胚胎数和可用胚胎所占比例（7．53和91．67％）均显著高于冬季（5．97和74．90％）。

细毛羊胚胎冷冻移植试验

细毛羊胚胎冷冻移植试验石国庆，曾培坚，杨永林，倪建宏，周鹏飞，皮文辉（新疆农垦科学院畜牧兽医所石河子８３２０００）前言细毛羊多为单胎，双胎极少，终生正常繁殖后代仅５～７只。为挖掘开发优秀细毛母羊繁殖潜力，增加羔羊数量，使用外源激素，超数排卵，人工授精...

绵羊体外成熟卵母细胞的电激活及其在体外孤雌发育的研究

首先对绵羊卵母细胞收集及其体外成熟（ＩＶＭ）条件进行了摸索，然后对影响电刺激激活ＩＶＭ卵母细胞的因素进行了研究，观察激活后卵母细胞在体外的发育能力。结果表明，剥离法比注射器吸卵法所获得的卵母细胞成熟率高，激活更加正常。剥离法收集的卵母细胞体外成熟培养２７小时后，以含０１ｍｍｏｌ／ＬＣａＣｌ２、０１ｍｍｏｌ／ＬＭｇＳＯ４和１０ｍｍｏｌ／Ｌ组氨酸的０２８ｍｏｌ／Ｌ肌醇（ｉｎｏｓｉｔｏｌ）作基础电击液，施以２次脉冲（间隔２２分钟）可获得最佳的激活效果。激活后的卵母细胞，在体外培养后进一步观察到，先在ＣＺＢ中与输卵管上皮细胞（ＳＯＥＣ）共同培养４８小时，再转移至Ｍ１９９＋１０％胎牛血清及ＳＯＥＣ共同培养，卵母细胞分裂率（７８３％）及桑椹胚和囊胚发育率（３０％）明显提高。

新鲜山羊输卵管液对体细胞克隆和转基因胚胎体外发育的影响

用添加不同浓度发情期山羊输卵管液的培养基,对正常单细胞受精卵、注射外源基因后受精卵和细胞核移植后山羊重构卵进行体外培养,探讨其对胚胎体外发育的影响。结果表明:添加20%输卵管液后正常受精卵桑椹胚分裂率为26.1%(11/42),极显著(P<0.01)高于对照组(未添加输卵管液)(7.6%)、50%输卵管液组(4.7%)和100%输卵管液组(0);添加20%输卵管液后,体外培养显微注射转基因受精卵有20.0%(8/40)发育至16-细胞,极显著(P<0.01)高于对照组(6.7%)和50%输卵管液组(4.8%);细胞核移植重构卵在含20%输卵管液的培养基中桑椹胚分裂率为7.3%,与体内培养桑椹胚分裂率(11.1%)差异不显著。在体外培养条件下,添加20%输卵管液可明显提高正常受精卵、转基因受精卵和克隆重构卵的分裂率和发育率。

胚胎移植技术在优质细毛羊育种中的研究与应用

采用 FSH、L H、PMSG、氟孕酮阴道海绵栓等激素进行超数排卵 ,通过人工授精、手术采卵、同期发情、胚胎移植、B超妊娠检查等技术 ,共处理优秀美利奴母羊 4 5 6只 ,获得可用胚胎 (A、B、C级胚胎 ) 30 33枚 ,平均 6 .6 5枚 /只(30 33/ 4 5 6 ) ,移植受体母羊 2 333只 ,冻胚受孕率 4 7.0 2 % (10 97/ 2 333) ,产羔数 14 2 6只 ,产羔率 12 9.99% (14 2 6 /10 97)。其中 ,公羔 6 85只 ,母羔 74 1只。优质细毛羊初生重公羔平均 4 .4 5 kg,母羔平均 4 .6 1kg。断奶重公羔平均38.2 4 kg,母羔平均 33.6 8kg。 12月龄平均体重公羊 76 .15 kg,母羊平均 6 2 .15 kg。周岁毛长公羊平均 11.6 7cm,剪毛量平均 12 .0 4 kg;母羊毛长平均 11.12 cm ,剪毛量平均 7.6 5 kg;平均净毛率达到 6 8.5 %。 2岁公羊体重平均 10 6kg,毛长平均 11.5 cm,剪毛量平均 11.85 kg,净毛率 6 9.5 %。2岁母羊体重平均 72 kg,毛长平均 11.0 cm,剪毛量平均8.5 kg,净毛率 6 9.0 6 %。羊毛纤维平均细度 18.71μm。 3岁公羊最大体重 14 8kg,母羊最大体重 10 2 kg。

提高萨福克羊超数排卵的效果研究

对 5 4只 (次 )萨福克羊采用CIDR +FSH +PG法进行超数排卵 (以下简称超排 ) ,发情配种后第 6天从子宫角采胚 ,只均获胚数和只均获可用胚数分别为 (6 89± 2 6 2 )枚 (372 / 5 4 )和 (6 0 7± 2 2 8)枚 (32 8/ 5 4 )。并对不同国家产FSH ,注射LRH -A3 +P4,重复超排 ,左、右侧卵巢等影响萨福克羊超排效果的因素进行研究 ,结果表明 ,以加拿大和日本FSH超排效果最好 ,只均获可用胚分别为 (9 2 0± 1 6 4 )枚 (n =10 )和 (7 75± 1 6 7)枚 (n =16 ) ;注射LRH -A3 +P4组只均获可用胚(7 2 5± 1 18)枚 (n =16 ) ,极显著高于对照组 (4 11± 1 38)枚 (n =9) ;重复超排 (间隔 12月 )第 2次超排只均获可用胚(9 19± 3 39)枚 (n =16 ) ,明显高于第一次只均获可用胚 (6 0 0± 3 2 7)枚 (n =16 ) ;左右侧卵巢对萨福克羊超排效果无显著差异。

特克塞尔(TEXEL)肉羊胚胎移植报告

肉羊 ;为扩大纯种特克塞尔肉羊数量 ,实验采用胚胎移植技术对其进行了纯种扩群。实验采用FSH进行超排 ,PGF2α和孕酮 +PGF2α两种方法进行同期发情处理 ,以东北半细毛羊作为受体。结果 3只供体羊共获可用胚胎 39枚 ,移植到 9只受体羊 ,最终产纯种特克塞尔羔羊 8只。结果表明 :采用胚胎移植的方法进行纯种大型引进品种绵羊的快速扩群是完全可行的。

中国美利奴(细毛型)胚胎冷冻移植试验

中国美利奴（细毛型）羊属于单胎繁殖家畜，双胎很少，仅占８％～１０％，母羊正常繁殖年龄一般在７～８岁，终生仅能繁殖后代６～８只。为充分发挥中国美利奴（细毛型）优秀母羊的繁殖潜能，迅速增加其后代的数量，采用外源激素，超数排卵、人工授精、手术采卵、同期发情...

绵羊卵母细胞的孤雌激活

本文探讨了不同激活方法对绵羊卵母细胞的孤雌激活和其后的发育。结果表明 ,电激活可以激活绵羊卵母细胞孤雌发育到囊胚 ;Ca2 + 载体A2 3187和CHX组合 ,Ionomycin和 6 DMAP组合可以激活绵羊卵母细胞 ,其卵裂率与电激活相比差异显著。 7%乙醇激活绵羊卵母细胞 7min效果较好。不同场强、不同脉冲次数对绵羊卵母细胞激活都有影响 ,以 1.2kV/cm ,间隔 30 μs和 3次脉冲效果较好。

影响供体羊超数排卵效果的因素研究

超数排卵（简称超排）是在母畜发情周期的适当时间注射外源促性腺激素，提高血液中促性腺激素的浓度，减少卵巢中闭锁卵泡数量，从而使较多的卵泡发育并排卵，是肉羊胚胎移植技术中的关键技术。

屠宰绵羊卵巢卵母细胞的体外培养

为了使屠宰绵羊卵巢卵母细胞能够用于体外受精,本文着重探索了使卵巢卵母细胞体外培养成熟的方法和条件。实验结果表明,以TCM-199加10％FCS作为基本培养基,培养24～25小时,可以使绵羊卵巢卵母细胞培养成熟,其成熟率可达55.5％(435/784)。如果在培养液内添加hCG(0.02mg/ml)或LH(0.01mg/ml),并且尽可能保持卵丘细胞的完整,则可以使成熟率提高到76.9％(140/182)～82.9％(112/135)。

速眠新麻醉剂在绵羊胚胎移植手术中的应用

在绵羊胚胎移植供、受体麻醉中,用速眠新麻醉剂以肌肉注射和静脉注射2种方法给药,测定了麻 醉绵羊进入麻醉期的各项生理常数,观察了麻醉诱导期、麻醉期、苏醒期绵羊的表现及其所用时间,综合评定了麻 醉效果。结果表明,两种麻醉方法均可以取得良好的麻醉保定效果。与肌肉注射麻醉相比,静脉注射麻醉的用药量 只有肌肉注射的1／5-1／7,麻醉绵羊进入麻醉期时间短(平均1．03-3．82 min),手术后苏醒早,有利于提高胚胎移 植手术的效率,而且安全性较高。研究还发现,不同品种绵羊对速眠新的反应有差异,体重、体况、气候等因素均影 响麻醉剂的用药量和麻醉效果。

绵羊冷冻胚胎移植试验报告

本试验用年龄为２～３岁的绵羊，产１胎次的３０只杂交羊作受体，采用自然发情和ＴＣＭ－１９９为基础液配制的解冻液，于１９９２年９月２日至２９日进行手术法移植，本试验共移植２５只受体母羊，共计３４枚冷冻胚胎，胚龄为５～６天，胚胎保存期为２～４个月。妊娠１７只，妊娠率为６８％，其中移植单胚１６只，妊娠１０只，妊娠率为６２％；移植双胚９只，妊娠７只，妊娠率为７７％。１９９３年１月２３日开始陆续产羔，共产羔２０只，产羔率为１１８％，其中３只羊产双羔。