山羊体外受精的研究

通过在山羊卵母细胞体外成熟培养液中添加不同的血清和不同浓度的卵泡液 ,在体外成熟培养液中培养不同的时间 ,以及采用不同的精子获能方法来摸索效率较高的体外受精方法体系。在山羊卵母细胞体外成熟培养液中添加FCS、EGS及不同浓度的卵泡液 ,成熟培养时间分别为 16、2 0、2 4和 2 7h ,山羊新鲜精液用钙离子载体法和肝素法进行获能处理后用于体外受精 ,比较其体外成熟率和体外受精率。添加FCS、EGS和 2 0 %卵泡液组的成熟率无显著差异 ,显著高于添加 10 %和 3 0 %卵泡液组的成熟率 ;但添加FCS和EGS组的受精率显著高于添加10 %、2 0 %、3 0 %卵泡液组的受精率。培养 2 4h组和 2 7h组的成熟率显著高于另外两组 ,而培养 2 7h组的受精率显著高于其余各组。用钙离子载体法处理的山羊精子的顶体反应率和体外受精率显著高于肝素法。EGS可以代替FCS添加于成熟培养液中 ,对COCs的成熟率和受精率没有明显的影响 ,但卵泡液不能完全代替FCS的作用。培养时间为 2 7h 。

FSH和PMSG对不同生理状态下山羊超数排卵的效果

近年来,胚胎移植技术在畜牧生产中的应用已得到普遍重视。在胚胎移植技术实施中,对供体母畜进行超数排卵为胚胎移植技术程序中不可缺少的一个环节。国内外对牛、绵羊、兔的超排已有较多的研究报道,而对山羊,尤其是对处于不同生理状态下的山羊进行超排未见系统报道。我们在进行核移植工程时用FSH和PMSG对不同生理状态下的2个品种山羊进行了超数排卵,现将结果报道如下。 材料和方法 1.试验羊 本试验以山东嘉祥青山羊和江苏丹阳白山羊为材料。选用健康、体况良好的母青山羊22头,体重15～25kg,年龄0.5～1.5岁;

超排山羊卵巢卵母细胞体外成熟和体外受精的研究

以ＴＣＭ１９９＋１０ｍｍｏｌ／ＬＨＥＰＥＳ＋青霉素（６ｍｇ／Ｌ）＋链霉素（５ｍｇ／Ｌ）为基础培养液（ＢＭ），再分别加入不同成分，配成５种卵母细胞成熟液：（Ａ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ；（Ｂ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ（２．５ｍｇ／Ｌ）；（Ｃ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２（１ｍｇ／Ｌ）；（Ｄ）ＢＭ＋１０％ＦＣＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２；（Ｅ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２＋颗粒细胞（１．５×１０６～３．０×１０６个／ｍＬ）。在３８．５℃、５％ＣＯ２下培养２６ｈ，排卵后第１天卵巢卵母细胞体外成熟率分别为６７．６７％（２０／３０），６０．４２％（２９／４８），８３．６７％（４１／４９）和８０．８２％（５９／７３），排卵后第５天卵巢卵母细胞，在培液Ｄ中体外成熟率为７１．４３％（４５／６３）。排卵后第１天的９８枚卵巢卵母细胞，体外成熟体外受精卵裂率为２１．４３％，２１枚２细胞胚移植５头受体获２头羔羊。研究表明，超排山羊卵巢卵母细胞经体外成熟可获得大量廉价的成熟卵母细胞。

山羊卵母细胞冷冻保存技术研究

检测不同冷冻保护剂(PROH、DMSO、甘油)及不同冷冻方法(程序冷冻法、OPS玻璃化冷冻法)对山羊卵母细胞发育情况。结果表明,PROH(GV:85.3%;IVM:85.4%)和DMSO(GV:82.2%;IVM:85.2%)对各期卵母细胞的正常形态保护能力无显著性差异(P>0.05),但均显著高于甘油(GV:70.4%;IVM:75.5%)(P<0.05)。以PROH作为冷冻保护剂,其GV期卵母细胞成熟率(27.2%)均显著高于DMSO(18.9%)和甘油(10.1%)(P<0.05);IVM卵母细胞受精率(25.6%)也显著高于DMSO(18.7%)和甘油(14.1%)(P<0.05)。常规程序冷冻和OPS玻璃化冷冻法,GV期卵母细胞的成熟率分别为21.3%和29.9%,受精率分别为6.3%和9.1%;培养9 h卵母细胞的成熟率分别为20.5%和32.0%,受精率分别为5.1%和10.7%;IVM卵母细胞的受精率分别为21.4%和30.3%,2-细胞率分别为4.8%和10.5%;不论是常规程序冷冻还是OPS玻璃化冷冻,GV期和培养9 h卵母细胞的成熟率和受精率差异不显著(P>0.05),但受精率均低于IVM卵母细胞(P<0.05)。结果显示,PROH作为山羊卵母细胞的冷冻保护剂,其保护作用明显优于DMSO及甘油;OPS玻璃化冷冻效果要明显优于常规程序法。

颗粒细胞对山羊卵泡卵母细胞体外成熟和体外受精的影响

试验系统研究了颗粒细胞对山羊卵泡卵母细胞体外成熟和体外受精的影响。COCs、机械裸卵和自然裸卵的体外成熟率分别为68.3%、45.6%和6.1%,组间差异显著(P<0.05),卵裂率分别为41.5%、8.1%和0,差异显著(P<0.05)。对照组和15×104个/ml、150×104个/ml颗粒细胞组卵母细胞体外成熟率分别为65.9%、60.2%和64.6%,无显著差异(P>0.05),但均显著高于1 500×104个/ml(50.0%)和1.5×108个/ml(30.3%)颗粒细胞组(P<0.05)。颗粒细胞单层共培养系统卵母细胞成熟率为75.8%,显著高于150×104个/ml颗粒细胞条件培养液组(63.4%)和M199培养液组(66.7%)(P<0.05)。颗粒细胞单层共培养系卵裂率为50.0%,显著高于150×104个/ml条件培养液组(36.7%)和M199培养液组(38.2%)(P<0.05)。

直肠B超在湖北黑头山羊发情鉴定和早期妊娠诊断中的应用

直肠B超在卵泡监测、早期妊娠诊断、卵巢及子宫疾病诊断等方面有独特优势,且具有快速、直观、准确、无损伤等特点。随着山羊养殖业规模化、集约化程度的不断提高以及同期发情、人工授精等技术的推广应用,借助B超诊断技术进行早期妊娠诊断,有利于山羊的科学饲养管理,提高繁殖率。目前,直肠B超在一些大家畜上的早期妊娠诊断已有报道,但其尚未应用于湖北黑头山羊。试验结合同期发情和人工授精技术,利用直肠B超监测湖北黑头山羊卵泡发育并进行早期妊娠诊断,旨在摸索出一套湖北黑头山羊发情和早孕的诊断方法,为湖北黑头山羊的快速扩繁和规模化养殖提供参考。

山羊卵母细胞成熟的超微结构研究

应用光、电镜技术研究山羊排卵后和体外成熟培养后的卵母细胞的形态学变化。结果表明：排卵后４ｈ的输卵管卵母细胞和体外培养２４～２６ｈ的卵泡卵母细胞已具有充分成熟（获能）的形态学特征，卵周隙大，微绒毛竖起，ＭⅡ纺锤体长轴在质膜下呈垂直状，最大数量的皮质颗粒呈线形排列在质膜下，线粒体散在分布。本研究结果为山羊卵母细胞体外成熟和体外受精最佳时期提供了可靠的形态学依据。

山羊卵子发育、受精和老化过程的电镜组化研究

应用改良柠檬酸铅法、Tris-Malcate法和Dermer氏保存磷脂的固定方法,分别研究了山羊卵母细胞发育、受精和老化过程中硷性磷酸酶(Alpase)、酸性磷酸酶(Acpase)和磷脂的超微结构定位和含量。结果表明,a.碱性磷酸酶主要定位于MV.卵皮质和伸入到卵母细胞内的颗粒细胞突起上;生长卵母细胞的硷性酸酶活性很强,排卵后活性减弱,受精卵中无Alpase活性。b.排卵24小时后卵母细胞内开始出现Acpase阳性的髓样小体,并随卵老化而逐渐增多。c.卵母细胞脂滴内磷脂含量很少,且恒定;MV、ZP、质膜和Mi上都含有许多磷脂;生长卵母细胞MV和质膜上磷脂多,排卵后减少;受精卵质膜和Mi膜上磷脂明显增多。文中讨论了酶和磷脂变化与卵母细胞生理状态的关系。

超排山羊17β-雌二醇和促卵泡素与卵巢反应的关系

对１７只性周期正常的母山羊于性周期第八、九天应用ＦＳＨ－ＰＧＦ２α超排处理，同时将同期化受体（ｎ＝６）作为对照，用放射免疫方法测定血浆１７β－雌二醇和促卵泡素浓度。试验发现，超排组排卵数（９２±０５枚／头）和收集胚胎数（１０５３±０５枚／头）显著高于对照组（２３±０１枚／头）（Ｐ＜００５）。在处理组中，有６头羊超排无效果（３５３％）；经ＦＳＨ处理后，１７β－雌二醇的血浆浓度呈上升趋势，于处理后８４ｈ达到峰值，此时表现发情，但超排有反应组的血浆浓度显著高于无反应组，发情时１７β－雌二醇浓度与排卵数、收集胚胎数呈正相关；发情及发情前后有反应组血浆ＦＳＨ浓度显著大于无反应组，但其变化趋势二者基本相似。

海门山羊超数排卵生理基础研究初探

用促性腺激素ＦＳＨ或ＰＭＳＧ处理４０只母羊，超排有效羊３４只，有效羊平均每只获胚胎８．３枚，４０只羊排卵数最高为２６枚，最低为“０”；测定卵巢变化表明：海门山羊在发情周期的第十三至＋子、天超排处理，卵又体积均比同情期羊卵巢大１—２倍。观察外源激素无反应母羊表明，卵巢上有大量未退代的白体存在，说明母羊本身激素调节不平衡使白体未能迟化，占据了卵泡生长发育的空间位置，引起卵泡发育受阻，从而对外源激大无反应或只发情而不排卵。用外源促性腺激囊处理山羊超数排卵，虽然已在山羊胚胎工程中广泛应用，并基本形成了一个模式程序，且每次超排均能获得卵。但是，起数排卵母羊个体间反应力存在很大差异，少数羊对超排无反应，即超排时母羊的生理基础存在差异。本文结合胚胎冷冻和分割试验；对海门山羊超排生理基础分析探讨，以期为进一步研究探索新的途径。

不同激素影响山羊同期发情的效果试验

将80只经产绒山羊分成两组,每组40只,分别用孕激素、雌激素和阴道栓进行同期发情处理,其中A组取栓后注射PGF2a0.1mg/只;B组取栓前一天肌肉注射PMSG200IU/只,取栓后肌肉注射PGFa0.1mg/只。结果表明:A组同期发情率为52.5%,B组同期发情率为92.5%。两组对比,差异显著(P<0.05)。

羔山羊卵巢卵母细胞体外成熟培养条件的研究

将出生后５０～７０日龄的羔山羊，经超数排卵处理后，从卵泡中抽取卵母细胞，取外观形态正常的卵母细胞分成五组，在含有１０％胚牛血清（ＦＣＳ）的ＴＣＭ－１９９培养液中分别经１２、１６、１８、２０和２４ｈ的体外成熟培养后进行体外受精，探索不同体外成熟培养时间对体外受精及卵裂率的影响，另外，在成熟用培养基内还分别添加了发情母羊血清（ＥＮＧＳ）和ＦＣＳ以观察其次培养效果，结果表明，经过１２～２４ｈ体外成熟培养

不同剂量及批号FSH对山羊的超排效果

本试验用不同剂量及批号的ＦＳＨ随机对四组母山羊进行趋数排卵，于母羊发情后４５—４８小时取卵。结果表明，不同批号ＦＳＨ的效价相对比较稳定。

影响山羊卵母细胞OPS法冷冻效果因素的研究

研究了不同玻璃化液、冷冻基础液以及卵母细胞的成熟阶段等因素对山羊卵母细胞OPS法玻璃化冷冻后发育效果的影响。结果表明,玻璃化液20%EG+20%DMSO和EDFS40对卵母细胞的冷冻保护效果间差异不显著。与成熟卵母细胞相比,未成熟卵母细胞对低温更敏感,使用现有的冷冻方法和冷冻保护液冷冻保存未成熟的山羊卵母细胞尚无法得到满意的结果。DPBS和M199均可作为配制冷冻保护液的基础液。

白山羊体外成熟卵母细胞的体外受精和受精卵移植

白山羊体外成熟卵母细胞的体外受精和受精卵移植宋杰王文英高运东仲跻峰王庆国（山东省农业科学院生物技术研究中心济南２５０１００）前言哺乳动物体外受精技术从５０年代初到现在已得到深入而系统的发展，但对山羊体外受精的研究则进行得较迟。日本学者Ｈａｎａｄａ，...

通过测电阻鉴定母羊发情的方法简述

母羊在发情周期的不同阶段，阴道和子宫颈口黏液的电阻值呈现出一定的变化规律，可据此作为判定母羊发情的一种方法，现简单介绍如下。

OPS法玻璃化冷冻山羊卵母细胞的研究

采用两种不同的冷冻保护液VSⅠ(EG+DMSO)和VSⅡ(PROH+DMSO),用OPS法对不同期的卵母细胞进行冷冻。结果表明:两种冷冻液VSⅠ和VSⅡ的冷冻效果差异不显著(P>0.05),但从数据看,VSⅠ要优于VSⅡ;而不同期的卵母细胞对于冷冻后的发育能力有明显的影响,无论是VSⅠ还是VSⅡ,GV期和培养10小时卵母细胞的形态正常率、成熟率、受精率差异不显著(P>0.05),但GV期和培养10小时卵母细胞受精率均低于IVM期卵母细胞,它们之间差异显著(P<0.05)。

山羊非手术采胚技术的研究

对 2 4只经产波尔山羊进行超数排卵处理 ,通过超声波检测排卵。用不同的冲卵方法回收胚胎。试验结果表明 :84 %的胚胎或卵子分布在头 10次冲洗中 ,表明冲卵液冲洗一侧子宫角时 ,也会流至另一侧。冲洗一侧子宫角 ,能节省冲卵时间 。

山羊胚胎体外培养和移植的研究

用FSH、LH、PMSG、HCG对40只山羊进行超数排卵处理，平均每只排卵21．5枚，回收11．5枚胚胎。超数排卵和卵子回收数，FSH分别为24和14枚，PMSG为19和9枚。将正常的30枚1细胞，12枚2细胞和45枚4细胞胚胎在TCM──199培养液，5％CO2和38．5℃环境中培养60－78小时，65．23％的胚胎可发育至囊胚，移植6只受体羊。妊娠检查已孕3只。

波尔山羊精液高倍稀释的研究

将一只波尔山羊精液按稀释后每头份穴0郾5～0郾8mL雪含有效精子精子数穴1郾720郾86、0郾43、0郾28、0郾21、0郾17亿/头份雪和稀释倍数穴10、20、40、60、80、100倍雪分为6组,分别输给900头母羊,来观察精液稀释倍数和有效精子数对母羊受胎率、产仔数的影响。结果表明:除稀释倍数在80、100倍、有效精子数是0郾21、0郾17的两组比对照组穴10倍、1郾72亿/头份雪显著下降外,其余各组均不显著。说明在生产上推广高倍稀释的低浓度输精是可行的。