山羊胚胎分割及同卵双生试验

选择山羊晚期桑椹胚、囊胚、孵出囊胚和孵出增大胚泡,用简化分割法二分。将19对裸半胚移植于18只受体羊,结果有12只妊娠,其中两只胚胎消失,两只流产,其余8只足月分娩,共产半胚羔11只。晚期桑椹胚、囊胚、孵出囊胚和孵出增大胚泡各组的半胚发育为羔羊的发育率分别为12.5％(1/8)、20％(2/10)、25％(3/12)和62.5％(5/8)。前三组均未获得同卵双生羔羊。在第四组,将4对裸半胚移植于4只受体,有3只妊娠,足月分娩半胚羔5只,其中两对为同卵双生。本研究证明,对称分割山羊孵出增大胚泡,不仅其半胚在体内仍可继续发育形成正常胎儿,而且不装透明带移植其裸半胚,仍能获得较高的同卵双生率。山羊孵出增大胚泡更适宜用简化分割法分割。

波尔山羊胚胎移植技术的研究与应用

对 75只波尔山羊超排处理 ,共获 A、B级胚胎 776枚 ,平均 (10 .35± 6 .4 5 )枚 /只 ,鲜胚移植受体 36 7只 ,移植产羔率达 5 5 .6 %。应用 CIDR和 PMSG同期发情处理受体山羊 5 6 0只 ,5 4 9只达到同期发情 ,32 h内同期率为 98.0 4 %。囊胚和扩张囊胚在发情后 7d的移植产羔率分别为 6 2 .2 2 % (84 /135 )和 5 8.2 6 % (6 7/115 ) ,显著高于桑椹胚 (43.18% )和孵化囊胚 (5 1.72 % ) (P<0 .0 1) ,而囊胚和扩张囊胚间、桑椹胚和孵化囊胚间差异不显著 (P>0 .0 5 )。受体山羊的黄体数量直接影响到移植产羔结果 ,黄体数≥ 2的受体山羊移植产羔率显著高于黄体数为 1的受体山羊移植产羔率 (P<0 .0 1) ,分别为 6 4 .83% (94 /14 5 )和 4 9.5 5 % (110 /2 2 2 )。PMSG注射时间 (在取 CIDR前 2 d或当天注射 )和剂量对受体羊的黄体数和移植产羔率均无显著影响 (P>0 .0 5 )

改进山羊超数排卵方法的研究

实验以黑龙江地方山羊为实验材料 ,应用国产激素研究了单纯使用 FSH和 FSH结合PMSG,以及氯前列烯醇 (PG)和孕酮 (Pr)的超排和发情同步效果。结果显示 ,单纯用 FSH处理的山羊 (N=6 )平均排卵 6 .83± 1.19个 ,平均获卵 5.83± 1.0 1个 ,获卵率在 85.30 % ;用 FSH结合 PMSG处理的母羊 (N=17)平均排卵 13.94± 1.11个 ,平均获卵 10 .59± 0 .97个 ,获卵率为 78.2 0 % ;t检验证明 ,两种处理山羊的排卵和获卵数差异均显著 (P <0 .0 5) ;说明 FSH与PMSG联合使用大大提高了山羊的排卵和获卵数。尽管 PG和 Pr两种同步发情方法都使山羊在开始超排处理后 72到 96 h之间发情 ,但用 PG处理的超排山羊 (N =2 0 )发情时间更为集中 ,大多数 (70 % )都于注射 PG后 2 4～ 30 (开始超排处理后 72～ 78) h开始发情。注射 h CG(发情 )后2 4～ 30 h,70 %以上的卵母细胞都具有第一极体 ,为新排的卵母细胞 ;到 h CG后 36～ 4 0 h,只有不到 4 0

山羊手术法胚胎移植对供受体母羊重复使用的影响

采用手术法对白绒山羊进行胚胎移植，探讨手术对供受体母羊重复使用的影响．结果：１９９１～１９９４年４年中，用于第１、２、３、４次超排（ＦＳＨ＋ＬＨ）的有效供体母羊数为９１只、４３只、７只和２只，手术取胚的胚胎回收率分别为７０．１％、８２．７％、７９．６％和６３．６％．供体母羊手术取胚后，在下１～２情期中发情时进行人工授精，用于第１、２、３、４次手术后人工授精的所有组合的供体母羊数为１３６只、５９只、１６只和３只，分娩率分别为５２．２％、３７．３％、４６．７％和６６．７％．用于第１、２、３、４次手术移植的受体母羊数为２４４只、８５只、４５只和９只，移胚后分娩率分别为６８．４％、６１．２％、６４．４％和３３．３％．经统计学检验表明：手术次数对供体母羊超排后的胚胎回收率及其术后１～２情期中人工授精的妊娠分娩率无影响．受体母羊第１、２、３次手术移胚的分娩率之间无差异，但显著高于第４次手术受体母羊的分娩率（Ｐ＜０．０５）．

山羊大腔卵泡卵母细胞的体外成熟和体外受精

从屠宰场采集卵巢。抽吸法回收2～6mm大腔卵泡卵母细胞。随机抽样后，测量其直径为167.42±17.43μp。A，B级卵泡卵母细胞进行体外成熟培养，其成熟率为67.50％。山羊新鲜精液以BO液或MD-H液处理后，与体外成熟卵母细胞进行授精，受精率分别为56.61％（17／30）和63.33％（19／30），两组间差异不显著（P＞0.05）。BO和MD-H液均适宜于山羊精子获能处理。体外受精卵的2细胞胚发育率为16.67％（6／36），4细胞胚发育率为2.78％（1／36）。

波尔山羊的超数排卵和胚胎移植

以波尔山羊为胚胎供体、当地淮山羊为受体 ,以孕酮阴道栓作同期发情处理。采用促卵泡激素和促黄体激素对供体母羊作超数排卵处理。供体母羊与波尔种公羊首次交配后的 3.5 d和 5 .5 d分别于输卵管和子宫角回收胚胎。从 3头供体母羊共获 6 5枚胚胎 ,经鉴定分级 ,其中 5 3枚为可移植胚胎 ,分别移植至相应同期发情的 2 7头受体母羊的输卵管或子宫内 ,每头受体移入 1～ 2枚胚胎。经过 3个情期以上 ,其中 2 0头受体母羊未出现返情 ,受体妊娠率 74%。 7头母羊产双羔 ,9头母羊产单羔 ,共获 2 3头羔羊。妊娠受体产羔率为 80 % ,移植胚胎的发育率为43.4%。平均每头供体母羊获得纯种波尔山羊羔 7.7头。上述结果表明 ,此项技术在国际上已属较高水平 。

声肌图(SMG)的初步研究

超声波扫描术可以检查在静态或者动态情况下的人的肌肉,也有报道用超声波扫描术来估计人的手臂或者手的肌肉和神经。但目前还没有研究报道超声扫描肌肉空间变化时得到的图像变化和相应的关节运动之间的关系。我们把超声扫描肌肉时得到的动态超声图像以及从中得到的动态信号称为“声肌图(sonomyography)”,简写成SMG。本文提出了SMG信号的概念,对手腕进行屈伸运动时在前臂采集到的SMG信号使用图像处理法进行了初步的研究分析,并讨论了其潜在的应用价值。

不同品种受体对波尔山羊胚胎移植效果的研究

将2127枚波尔山羊胚胎移植给1182只受体,移植单胚、双胚、3胚和4胚时的受体妊娠率分别为60 2%(171/284)、62 7%(540/862)、64 0%(16/25)和54 6%(6/11),胚胎成羔率分别为60 2%(171/284)、51 6%(890/1724)、41 3%(31/75)和36 4%(16/44)。各品种受体移植单胚时妊娠率和胚胎成羔率均无显著差异(P>0 05),移植双胚的奶山羊受体胚胎成羔率显著高于成都麻羊和简阳大耳羊(P<0 05),而南江黄羊低于奶山羊、高于成都麻羊和简阳大耳羊,但差异不显著(P<0 05)。受体羊卵巢上黄体数量对受体妊娠率和胚胎成羔率无明显影响,但随着黄体体积变小,胚胎成羔率逐渐下降。

陕北白绒山羊种公羊的体细胞克隆

【目的】利用体细胞核移植技术克隆陕北白绒山羊优秀种公羊个体。【方法】以特别优秀成年陕北白绒山羊种公羊耳部皮肤成纤维细胞为供体细胞,体外培养成熟的陕北白绒山羊卵母细胞作为受体,利用显微操作方法对成熟卵母细胞进行去核操作,然后将供体细胞注射到其卵周隙内,经电融合将其导入去核卵母细胞内形成核移植重组胚。利用钙离子载体Ionomycine联合蛋白酶抑制剂6-甲基氨基嘌呤(6-DMAP)对核移植重组胚进行激活处理,挑选激活后完整的胚胎继续进行体外培养,然后在2～16细胞期时将克隆胚胎移植到相应的同期发情受体母羊体内,利用PCR-RFLP技术鉴定克隆羊。【结果】构建了体细胞核移植胚胎253枚,重组胚胎的融合率为71.54%(181/253),体外培养后的卵裂率为68.33%(123/180),囊胚发育率为25.20%(31/123);在此基础上,构建了537枚克隆胚,将其中卵裂的359枚分别移植到32只代孕母羊体内,移植60d后,有2只受体母羊确认妊娠,最终1只受体母羊妊娠第4月流产出2只死羔;另1只受体母羊维持到期并顺产体细胞克隆羊1只。经遗传学鉴定,2只流产羊羔与1只存活个体均为体细胞核移植后代。【结论】获得陕北白绒山羊克隆个体,建立了相对完善的陕北白绒山羊克隆技术体系。

波尔山羊胚胎移植奶山羊应用技术研究

1999～ 2 0 0 0年 ,在成都波尔山羊种羊场进行了波尔山羊胚胎移植奶山羊应用技术研究。对 12只供体用FSH减量法进行超排处理 ,回收胚胎 2 5 7枚 ,平均 2 1 4± 11 1枚 ,其中可用胚 2 0 6枚 ,平均 17 2± 8 3 3枚。将 170枚可用胚移植给同期发情的 78只雅安奶山羊受体 ,其中 2只在妊娠 2个月后流产 ,49只受体羊妊娠到期产下纯种波尔山羊羔 88只 ,移植受体妊娠率 65 4%(5 1/ 78) ,产羔受体比率 62 8% (4 9/ 78) ,胚胎成羔率 5 1 8% (88/ 170 )。平均每只波尔山羊供体通过胚胎移植增加纯种后代7 3 3只。其中RB5 2号波尔山羊获 16枚胚胎 ,移植给 8只奶山羊 (双胚 ) ,全部妊娠 ,产下 13只纯种波尔山羊 ,胚胎成羔率达 81 3%。结果表明 ,波尔山羊胚胎移植奶山羊能获得较高的妊娠率和胚胎成羔率 ,已可从研究阶段发展到产业化应用。

山羊胎儿成纤维细胞的冷冻保存和体外培养(英文)

将胎儿成纤维细胞悬浮于不同的冷冻保护液中 ,在不同的温度下进行冷冻保存试验。结果显示 ,当保护液中含有 90 0 m L / L胎牛血清 (FBS)时 ,- 196℃下保存的山羊胎儿成纤维细胞解冻后的细胞贴壁率高于- 80℃ ,且前者贴壁细胞增殖也较后者快 ,二者间差异显著 ;而在 - 2 0℃条件下只有一小部分细胞能够存活 ,与前两者相比差异极显著 ,说明 - 2 0℃不适合冷冻胎儿细胞。冷冻保护液中含有 10 0 m L / L二甲基亚砜 (DMSO)的保护效果明显好于 5 0 m L / L DMSO,二者间差异显著。用组织块法培养的细胞 ,在两种培养基 DMEM和 M199中添加 10 0 m L / L FBS和 2 mm ol/ L 2 -巯基乙醇 (2 - Me) ,其组织块成活率及细胞生长速度均高于单纯添加 10 0 m L / LFBS,同时证明 DMEM和 M199都能用于胎儿成纤维细胞的体外培养。以 DMEM培养液为基础 ,分别添加 2mm ol/ L 2 - Me,5 m L / L FBS,10 0 m L / L FBS和 2 m mol/ L 2 - Me+10 0 m L / L FBS对山羊胎儿成纤维细胞进行体外培养 ,结果显示 ,细胞在 10 0 m L / L FBS和 2 mm ol/ L 2 - Me+10 0 m L / L FBS培养液中生长迅速 ,两者间无明显差异 ,2 - Me的存在促进了细胞的增殖 ;两者都与添加 2 m mol/ L 2 - Me组存在显著差异 ;添加 2 m mol/ L 2 - Me和 5m L / L

白绒山羊性控胚胎生产及移植应用研究初探

应用X性控冷冻精液对超排供体白绒山羊进行人工授精,生产性控胚胎并进行鲜胚移植。结果发现,①用性控冻精和鲜精输精的供体母羊,平均卵子回收数分别为13.3和12.5枚,其中性控冻精组受精卵比例为29.6%(55/186),极显著低于鲜精组94.0%(281/299)的比例(P<0.01);②性控胚胎和普通胚胎移植受体母羊产羔率分别为42.2%和58.1%,二者差异极显著(P<0.01);③性控胚胎移植受体母羊所产羔羊雌性所占百分数为100%,极显著高于普通胚胎移植(P<0.01)。表明通过白绒山羊X、Y精子分离、人工授精生产性控胚胎,同时结合胚胎移植技术,可以达到按照生产实际中的意愿得到性别控制子代白绒山羊的目的。

饲养管理对波尔山羊胚胎移植效果的影响

在5个不同饲养管理条件的波尔山羊种羊场对体况较好和较差的69只母羊超排情况进行了比较研究。结果表明,对体质较差羊群的母羊实施超排处理时,回收卵平均数和可用胚平均数均低于体质较好的母羊群,虽然未表现出统计学差异,但有下降的趋势。在不同羊场使用同品种受体奶山羊进行胚胎移植试验结果表明,饲养管理条件差的羊场Ⅱ,一月龄羔羊存活率为81 7%(76/93),显著低于其他的场,羊场Ⅰ、羊场Ⅲ、羊场Ⅴ分别为98 9%(87/88)、96 6%(197/204)、97 8%(89/91);羊场Ⅱ胚胎成羔率为49 2%(93/189),显著低于羊场Ⅲ和羊场Ⅴ,其分别为60 5%(204/337)、67 9%(91/134)。

山羊卵母细胞冷冻保存及其对发育效果的影响

在程序冷冻条件下,冷冻保护剂种类对山羊卵母细胞发育效果有显著影响。对于山羊GV期卵母细胞,解冻后的形态正常率,PROH(83 1%)和DMSO(81 7%)均高于甘油(70 7%)(P<0 05);而体外成熟率则是PROH(20 3%)高于DMSO(14 2%)和甘油(9 8%),DMSO又高于甘油(P<0 05)。对于山羊IVM卵母细胞,解冻后的形态正常率,PROH(84 5%)和DMSO(86 4%)均高于甘油(74 2%)(P<0 05);而受精率则是PROH(23 2%)高于DMSO(17 5%)和甘油(13 1%),DMSO又高于甘油(P<0 05)。冷冻方法和卵母细胞发育阶段对冷冻效果有显著影响。从冷冻方法看,程序冷冻和OPS玻璃化冷冻,GV期卵母细胞的成熟率分别为19 7%、27 6%,受精率为3 3%、8 6%;培养9h卵母细胞的成熟率分别为20 6%、30 9%,受精率为4 4%、10 3%;IVM卵母细胞的受精率分别为20 9%、29 4%,2 细胞率为4 4%、8 8%,均是OPS玻璃化高于程序冷冻,差异显著(P<0 05);从卵母细胞发育阶段看,不论是程序冷冻还是OPS玻璃化冷冻,GV期和培养9h卵母细胞的成熟率、受精率差异均不显著(P>0 05),但受精率均显著低于IVM卵母细胞(P<0 05)。

供体母羊及与配公羊个体对波尔山羊胚胎移植效率的影响

对135只波尔山羊供体母羊进行超排处理,回收卵总数2504枚,平均18 55±7 63枚,其中可用胚2182枚,平均16 16±7 46枚。将2127枚鲜胚移植给1182只受体,妊娠率为63 03%(745/1182),移植胚胎成羔率为52 1%(1108/2127)。试验结果表明,供体各个体之间所获得的胚胎移植成羔率存在着显著差异(P<0 05),胚胎成羔率大于80%的供体平均每只获胚胎移植羔羊14 8±4 27只,胚胎成羔率小于20%的供体平均每只获胚胎移植羔羊1 83±1 17只,其中个体获得羔羊最多的为21只(21/26)。有9 63%的供体胚胎移植成羔率大于80%,有4 44%的供体胚胎移植成羔率小于20%。14只公羊配种的135只供体获得的胚胎可用率同样存在着显著差异(P<0 05)。

山羊卵泡卵母细胞体外成熟的研究

研究了ＦＣＳ，１７β－Ｅ２，ＦＳＨ，ＬＨ对山羊卵泡卵母细胞成熟的作用，及培养时间对卵母细胞核和细胞质成熟的影响。结果表明，添加体积分数为１０％～１５％的ＦＣＳ，１～２ｍｇ·Ｌ－１１７β－Ｅ２，２０～５０ｍｇ·Ｌ－１ＬＨ和１０ｍｇ·Ｌ－１ＦＳＨ有利于提高卵母细胞核成熟，并放出第一极体。而成熟培养２０，２４ｈ的卵母细胞成熟率显著高于培养１６ｈ（Ｐ＜０．０５），核成熟后培养３～４ｈ有利于卵母细胞质成熟，对其后的受精、卵裂及胚胎的进一步发育有重大影响。且ＴＣＭ１９９＋质量分数为１０％～１５％的ＦＣＳ＋１～２ｍｇ·Ｌ－１１７β－Ｅ２＋１０ｍｇ·Ｌ－１ＦＳＨ＋２０～５０ｍｇ·Ｌ－１ＬＨ是卵母细胞成熟的理想培养系统。

胚胎移植供受体山羊发情控制及配比问题的研究

用含１８甲基炔诺酮６０ ｍ ｇ 的阴道海绵栓预处理１１３ 只供体羊 １４～１５ ｄ后注射 Ｆ Ｓ Ｈ 进行超排，３６ ｈ 或４８ ｈ 后撤栓。１９９ 只受体羊用含炔诺酮５０ ｍ ｇ 的阴道栓处理，撤栓时注射或不注射 Ｆ Ｓ Ｈ 进行同期发情。结果表明，供、受体羊发情开始距撤栓的平均间隔时间分别为（３３．９±９９） ｈ 和（４４．３±１６．１） ｈ（ Ｐ＜ ０．０５），供、受体羊发情持续期长短相似（ Ｐ＞ ０．０５）。撤栓时注射 Ｆ Ｓ Ｈ ２５ Ｉ Ｕ 或 ３３ Ｉ Ｕ 的受体羊，卵巢上形成功能黄体的比率分别为６４．０％ 和 ６０．７％ ，显著高于不注射 Ｆ Ｓ Ｈ的受体羊（４２．２％ ， Ｐ＜ ０．０５）。结论认为，用本研究采用的超排及同期发情程序，受体撤栓时间应与供体相同或早于供体羊１２ ｈ；受体羊撤栓时应注射 Ｆ Ｓ Ｈ ２５ Ｉ Ｕ；根据供体羊回收可用胚胎数及同期发情后可用受体数量，供、受体羊的适宜比例为１∶６～１∶８。

安哥拉山羊胚胎冷冻试验

对安哥拉山羊用总量３５０ＩＵＦＳＨ按递减法处理，配种结束后第６天经子宫手术回收桑椹胚和囊胚供冷冻试验。选用１．４ｍｏｌ／Ｌ甘油、１．２ｍｏｌ／Ｌ和１．５ｍｏｌ／Ｌ乙二醇做防冻保护剂，快速冷冻，－３６℃投入液氮保存。采用直接水浴或在空气中停留６～１０ｓ使胚胎温度回升，再水浴解冻。胚胎解冻后，用０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖ＰＢＳＳ脱除保护剂，移入２％ＰＢＳＳ中，手术移植于发情后６ｄ的适移受体。结果表明，１．５ｍｏｌ／Ｌ乙二醇具有良好的冷冻保护作用。在１８～２０℃空气中使胚胎温度稍回升，再水浴解冻，可降低胚胎解冻过程中热应激导致的透明带破损，移植于适移受体的妊娠率达４５．５％

生产条件下山羊胚胎移植的组织实施与质量控制

从我国国情出发,系统论述了生产条件下山羊胚胎移植的组织实施步骤及质量控制因素。提出了生产条件下山羊胚胎移植的主要质量控制指标:选择适宜的供、受体,并加强饲养管理;用FSH300～350IU以减量法进行供体超排;用孕激素阴道海绵栓配合促性腺激素进行受体同期发情;鲜胚移植采用从供体子宫角手术回收的桑椹胚～囊胚期胚胎,胚胎冷冻或胚胎分割采用囊胚期胚胎,并移植于受体羊子宫角;完整的记录体系。