肉仔鸡肠道B淋巴细胞Ca^(2+)浓度流式细胞术测定方法的建立

【目的】建立以流式细胞术结合Fluo-3-AM测定肉仔鸡肠道B淋巴细胞胞内Ca2+浓度的方法。【方法】分离培养21 d肉仔鸡肠道B淋巴细胞,以不同质量浓度(0,5,10,15,20μg/mL)脂多糖(LPS)刺激B淋巴细胞,测定B淋巴细胞刺激指数(SI),确定B淋巴细胞增殖的最适LPS质量浓度,建立肉仔鸡B淋巴细胞体外增殖试验模型。以最佳质量浓度LPS刺激培养72 h的肉仔鸡肠道B淋巴细胞为研究对象,应用Fluo-3-AM作为钙指示剂,建立肉仔鸡肠道B淋巴细胞胞内Ca2+浓度的流式细胞术测定方法,并用该测定方法探讨不同质量浓度(0,20,40,60,80μg/mL)二十碳五烯酸(EPA)对肉仔鸡肠道B淋巴细胞胞内的Ca2+浓度的影响。【结果】LPS的最佳质量浓度为10μg/mL。建立了以Fluo-3-AM为标记的肉仔鸡肠道B淋巴细胞胞内Ca2+浓度流式细胞仪测定方法。EPA可极显著降低B淋巴细胞胞内Ca2+浓度(P<0.01)。【结论】Fluo-3-AM结合流式细胞术可检测肉仔鸡肠道B淋巴细胞胞内的Ca2+浓度,且EPA极显著降低了B淋巴细胞胞内的Ca2+浓度。