沐川乌骨黑鸡LIPE基因第1外显子多态性及其与体重、肌内脂肪含量的关联分析

【目的】探究沐川乌骨黑鸡激素敏感脂酶(hormone-sensitive lipase,LIPE)基因第1外显子单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点的遗传变异,并分析其与体重、肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)含量的相关性。【方法】采集106只沐川乌骨黑鸡血液,利用PCR扩增和直接测序技术检测LIPE基因第1外显子SNP位点,采用SPSS 21.0软件分析LIPE基因第1外显子SNP位点多态性及其与沐川乌骨黑鸡体重、胸肌IMF含量的相关性;通过生物信息学在线工具分析LIPE基因第1外显子SNP位点对其编码氨基酸的影响;利用实时荧光定量PCR检测LIPE基因在沐川乌骨黑鸡不同组织和不同基因型个体胸肌中的相对表达量。【结果】沐川乌骨黑鸡LIPE基因第1外显子共检测到3个SNP位点,66 bp处SNP位点(SNP1:c.66 A>C)上发现AA、AC和CC 3种基因型;440 bp处SNP位点(SNP2:c.440 A>G)上发现AA和AG 2种基因型;462 bp处SNP位点(SNP3:c.462 G>A)上发现GG和GA 2种基因型。卡方适合性检验表明,沐川乌骨黑鸡LIPE基因第1外显子的SNP2、SNP3位点符号哈迪-温伯格平衡状态(P>0.05),SNP1位点偏离哈迪-温伯格平衡状态(P<0.05)。关联分析表明,SNP2位点的AG基因型个体胸肌IMF含量显著高于AA基因型(P<0.05),各位点不同基因型个体体重均无显著差异(P>0.05)。氨基酸序列比对分析显示,SNP2为非同义突变,其导致赖氨酸变为精氨酸。实时荧光定量PCR结果显示,LIPE基因在脂肪组织中表达量较高,SNP2位点AA基因型个体胸肌中LIPE基因mRNA表达水平极显著高于AG基因型(P<0.01)。【结论】沐川乌骨黑鸡LIPE基因第1外显子存在3个SNP位点,其中SNP2位点对沐川乌骨鸡IMF含量具有显著影响,该位点可作为沐川乌骨黑鸡IMF含量选育的候选分子遗传标记。

贵妃鸡与麒麟鸡杂交后代主要性状的测定与分析

为了研究贵妃鸡与麒麟鸡杂交后代(F1代)的肉用开发价值,以贵妃鸡为父本、麒麟鸡为母本进行杂交,测定12周龄F1代鸡的体尺性状、屠宰性能、肉品质和血液生理、生化指标。结果显示:(1)F1代公鸡体斜长、龙骨长、胫长分别显著高于母鸡1.73、2.60、0.87cm;(2)屠宰性能:F1代公鸡活体质量、屠体质量、半净膛质量、全净膛质量、胸肌质量、腿肌质量、心脏质量、半净膛率分别极显著高于母鸡173.67g、176.22g、170.08g、104.70g、30.90g、49.74g、2.79g、2.34个百分点;腿肌率、翅膀质量分别显著高于母鸡3.90个百分点、16.56g;皮脂厚极显著低于母鸡;(3)肉品质:F1代母鸡的胸肌失水率显著高于公鸡,腿肌肉色L值、失水率分别极显著高于公鸡,肉色a值极显著低于公鸡;(4)血液生理、生化指标:F1代鸡血液生理指标变异系数均在20%以下,生化指标除乳酸脱氢酶(LDH)、α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)指标外,其他指标的变异系数均在40%以下。以上结果表明,F1代公鸡屠宰性能和肉品质优于母鸡。

徐海鸡不同产蛋期蛋品质指标变化及其相关性

为研究产蛋期蛋品质的变化情况及性状间相关性,以徐海鸡为研究对象,分别于产蛋前期(24周龄)、产蛋中期(40周龄)、产蛋后期(52周龄)测定蛋品质,并分析性状间的相关性。结果表明,随着产蛋日龄的增大,徐海鸡的蛋品质性状均有不同程度的变化,除蛋黄颜色、蛋形指数、蛋壳厚度差异不显著(P>0.05)外,其余性状均存在显著差异(P<0.05)。相关分析表明,各阶段蛋品质性状间均存在不同程度的相关性。本研究结果对徐海鸡的保护和选育利用具有指导意义。

稀释精液人工授精技术在罗曼粉蛋种鸡中的应用

[目的]解决种鸡人工授精生产中常出现的精液不足问题。[方法]应用稀释精液人工授精技术,从精液稀释液的选择、精液稀释比例、稀释液的配制及保存、人工授精技术等方面对其在罗曼粉蛋种鸡中的应用进行了综述。[结果]复方稀释液的效果优于单方稀释液。自制稀释液按照1∶1比例稀释的效果最好。[结论]该研究可为种鸡生产提供参考。

脂肪粉对黑凤鸡抗氧化性能、蛋白质代谢及甲状腺激素水平的影响

为研究饲粮中不同水平的脂肪粉对黑凤鸡抗氧化性能、蛋白质代谢及甲状腺激素水平的影响,试验选取800只体质量和产蛋率相近的300日龄黑凤鸡,随机分成4组。对照组饲喂基础日粮,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组饲粮在基础日粮中分别添加1%、3%、5%的脂肪粉,试验期30d。结果显示:与对照组相比,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组血清超氧化物歧化酶(SOD)的活性分别显著提高0.97%、3.29%、2.80%;Ⅱ、Ⅲ组血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性分别显著提高10.66%、8.16%,但Ⅰ组与对照组间差异不显著;各试验组血清丙二醛(MDA)的含量均降低,以试验Ⅲ组最低;Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组血清尿酸(UA)的含量分别显著降低15.63%、21.88%、18.75%,而血清谷丙转氨酶(ALT)的活性分别显著提高2.68%、4.11%、3.40%;各试验组血清尿素氮(BUN)的含量均降低,以Ⅱ组最低;Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组血清三碘甲腺原氨酸(T3)的含量分别显著提高15.69%、21.57%、17.65%,T3/T4的比值分别显著高于对照组13.61%、18.67%、18.35%,血清甲状腺素(T4)的含量以试验Ⅱ组最高。可见,日粮中添加脂肪粉可促进黑凤鸡蛋白质合成代谢,改善其抗氧化性能和甲状腺的分泌功能,其中3%的添加量效果最好。

沐川乌骨黑鸡肌内脂肪沉积相关microRNAs的筛查与鉴定

试验旨在挖掘高肌内脂肪(IMF)含量和低IMF含量鸡胸肌中差异表达的microRNA(miRNA)(DEM),以期从miRNA角度探究鸡IMF沉积的分子调控机制。以120只沐川乌骨黑鸡为研究对象,采用高通量测序分别完成3个IMF含量极高(H组)和极低(L组)鸡胸肌组织的miRNA测序,测序结果经生物信息学分析,鉴定H和L组中差异表达的miRNAs,随机选择6个miRNAs进行实时荧光定量PCR验证。IMF含量测定结果表明,每只鸡平均100 g胸肌中IMF含量为4.08 g,H和L组IMF含量存在极显著差异(P<0.01);6个测序文库结果表明,每个测序文库获得Clean reads均超过10000000条,Clean reads占Raw reads的百分比>93%,21~23 nt的small RNA(sRNA)数量占总sRNA的百分比>50%,其中22 nt长度的sRNA所占比例最高,平均GC碱基含量为48.95%,获得的测序数据可靠;6个测序文库中sRNA注释为rRNA、tRNA、snRNA、snoRNA以及重复序列的比例较低,分别为2.74%、1.85%、6.21%、1.58%、2.82%和2.81%;6个测序文库共鉴定已知miRNAs成熟体578个,miRNAs前体500个,鉴定差异表达的miRNAs 23个,其中H组中上调表达的miRNAs有16个,下调表达的miRNAs有7个;miRNA靶基因预测分析结果表明,23个差异表达miRNAs共预测靶基因628个;GO分析结果表明,共鉴定了30个显著富集GO条目,包括6个细胞成分、13个生物学过程和11个分子功能;KEGG富集分析表明,差异表达miRNA的靶基因显著富集于胰岛素信号通路、半乳糖代谢、脂肪细胞因子信号通路、鞘糖脂生物合成、糖酵解及淀粉和蔗糖代谢;实时荧光定量PCR结果表明,gga-miR-124a-3p、gga-let-7a-5p在H组中表达量极显著或显著高于L组(P<0.01;P<0.05);gga-miR-19a-3p在H组中表达量极显著低于L组(P<0.01),gga-miR-6553-3p和gga-miR-128-3p在H组中的表达量显著低于L组(P<0.05),其表达趋势与测序结果一致。以上结果表明,差异表达的miRNA gga-miR-124a-3p、gga-let-7a-5p、gga-miR-6553-3p、gga-miR-128-3p和gga-miR-19a-3p参与脂肪生成,是鸡IMF含量调控重要的候选miRNAs,为阐释miRNA调控鸡IMF沉积分子机制提供理论基础。

苜蓿草粉比例和蛋白质水平对豁鹅蛋品质的影响

本试验采用3×3因子设计,将日粮苜蓿草粉比例设为10%、20%、30%三个水平,蛋白质设为15.83%、14.01%、12.74%三个水平,选用180只12月龄健康产蛋豁鹅,随机分为9组,每组20只,试验期20d。研究日粮苜蓿草粉比例和蛋白水平及二者交互作用对豁眼鹅蛋品质的影响。试验结果表明:随着苜蓿草粉添加比例增加,蛋黄比例、哈夫值随之显著增大,苜蓿草粉比例添加20%、蛋白水平为14.01%时哈夫值最大。苜蓿草粉可以显著改善鸡蛋蛋黄色泽、提升蛋白品质。

河南斗鸡线粒体D-loop区多态性及与4种斗鸡的进化分析

对28只河南斗鸡线粒体基因组(mitochondrial genome,mt DNA)D-loop区全序列进行PCR扩增和测序,并结合Gen Bank中其他品种中国斗鸡D-loop区序列,进行序列比对和进化分析。结果发现,河南斗鸡mt DNA D-loop区全长1232 bp,单倍型多样性(Hd)为(0.542±0.086),核苷酸多样性(Pi)为(0.00236±0.00083),共发现9处单核苷酸多态位点,3种单倍型。品种间进化分歧显示,河南斗鸡和西双版纳斗鸡遗传距离最近(0.0095),与漳州斗鸡遗传距离最远(0.0226)。系统发育分析发现,5个斗鸡品种可以分成A、B、C、D和E 5个分支。研究表明,河南斗鸡mt DNA D-loop区呈中度多态,有2个母系起源,本研究可以为河南斗鸡的遗传资源保护和选育提供一定参考。

脂肪粉对黑凤鸡繁殖性能、蛋品品质及血清生化指标的影响

为探讨脂肪粉对家禽生长的作用机制,选取800只体质量、产蛋率相近的300日龄黑凤鸡,随机分成4组,研究脂肪粉对黑凤鸡繁殖性能、蛋品品质及相关血清指标的影响。对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组分别饲喂添加1%、3%、5%脂肪粉的基础日粮,测定种蛋合格率、受精蛋孵化率、健雏率、蛋黄色泽级数、蛋壳厚度及血清指标等。结果显示,各试验组的种蛋合格率、受精蛋孵化率和健雏率均较对照组有一定程度的提高,其中试验Ⅱ组的鸡蛋种蛋合格率、受精蛋孵化率和健雏率最高,分别显著高于对照组3.45%、2.78%、3.98%;各试验组的蛋黄色泽级数和蛋壳厚度均不同程度高于对照组,其中试验Ⅲ组的蛋黄色泽级数和蛋壳厚度显著高于对照组17.24%和8.82%,鸡蛋哈氏单位值以试验Ⅱ组最高,显著高于其他组;各试验组的血清总胆固醇(TC)含量和血清甘油三酯(TG)含量均较对照组有一定程度的降低,其中试验Ⅱ组的血清总胆固醇(TC)含量和血清甘油三酯(TG)含量最低,分别显著低于对照组4.86%和2.43%;各试验组的血清磷(P)含量分别显著高于对照组2.59%、7.33%和3.88%,血清钙含量以试验Ⅲ组最高,显著高于其他各组。由此可见,饲粮中添加脂肪粉能够提高黑凤鸡的繁殖性能和蛋品品质、影响机体物质代谢,综合考虑,饲粮中添加3%脂肪粉效果较好。

鸡肺表面活性蛋白A的表达及其多克隆抗体的制备

目的表达鸡肺表面活性蛋白A(cSP-A)重组蛋白,并制备鼠抗cSP-A多克隆抗体。方法人工合成cSP-A的凝集素糖识别区(CRD)基因(cSP-A-CRD),亚克隆到pGEX-6P-1载体中进行原核表达,对表达产物进行鉴定。切胶纯化法纯化重组蛋白,并免疫小鼠制备抗cSP-A多克隆抗体,ELISA检测抗体效价,Western blot法、免疫荧光组织化学染色和ELISA鉴定该抗体的特异性和适用范围。结果获得鼠抗cSP-A血清,效价达到105;Western blot法结果表明多抗血清具有良好的特异性和反应性,并可用免疫荧光组织化学技术检测鸡肺上皮细胞表达的cSP-A和用间接ELISA检测鸡肺灌洗液中存在的水溶性cSP-A蛋白。结论成功表达了cSP-A重组蛋白并制备了小鼠抗cSP-A多克隆抗体。

稻鸭共生模式对绍兴鸭生产性能的影响

本研究旨在探讨稻鸭共生模式与地面常规平养模式及稻鸭共生模式下不同饲养水平对绍兴鸭生长性能的影响。试验结果表明：稻鸭组鸭与对照组鸭相比，在体重、日增重、饲料转化比等指标存在显著差异（P〈O．05），稻鸭组鸭全期增重比对照组快36．78％.

猪增生性回肠炎检测方法的确立

笔者于2010年3月～2011年3月对全国80家猪场采集4、6、8、10、12、14、后备母猪及经产母猪的粪便进行检测。随机对其中10个场的各生产阶段样品作2～3个重复。粪便尽量采集新鲜、未着地部分的松软粪便、稀便、饲料便或水泥色粪便。现场诊断这些猪场是否存在回肠炎感染，以及回肠炎在该场中的感染状况并提供准确的感染时间点，为精准地策略性投药防控回肠炎提供科学依据。

山鸡生长曲线拟合和分析比较研究

为了探索山鸡生长发育规律,试验采用Gompertz、Logistic、Bertalanffy三种非线性模型每周分别对0-17周龄不同性别山鸡的3个品种中华环颈雉、美国七彩山鸡和黑化山鸡测定体重数据后进行了生长曲线拟合和分析。结果表明：三种模型均能较好地模拟山鸡生长曲线,而Gompertz和Bertalanffy模型拟合效果更佳;进一步分析三个模型的拟合值,Bertalanffy模型对初生重的拟合值与实测值相差很大,Logistic模型对3个品种不同性别前3周的拟合值与实测值差异较大,而Gompertz模型拟合值更精确地拟合山鸡不同周龄的体重。运用三种模型,特别是Gompertz模型对山鸡进行生长曲线拟合和分析,可以及时了解山鸡生长发育规律,为开展山鸡精准饲养和育种提供可靠依据。

禽腺病毒血清4型Y17215-1株对SPF鸡胚及SPF鸡的致病性研究

为了探究一株禽腺病毒血清4型(FAdV-4)天津分离株Y17215-1对SPF鸡胚及SPF鸡的致病力,试验将Y17215-1株(病毒效价为1×10^(6.5) TCID_(50)/0.1 mL)经卵黄囊和尿囊膜两种接种途径分别接种6,10日龄SPF鸡胚,经滴鼻点眼和肌肉注射两种途径分别接种7,14,21日龄的SPF鸡,观察SPF鸡胚死亡情况和病理变化情况,统计SPF鸡发病死亡情况,检测试验鸡不同组织及不同采集时间的泄殖腔中的病原,观察试验鸡的临床病变和组织病理学变化。结果表明:两种接种途径均可致鸡胚死亡,经卵黄囊途径接种致死的鸡胚可见胚体全身出血,经尿囊膜途径接种致死的鸡胚尿囊膜明显增厚;两种接种途径均可引起不同日龄SPF鸡发病和死亡,且肌肉注射组试验鸡较滴鼻点眼组试验鸡发病快、病程短,致死率高,发病鸡临床表现为精神沉郁、采食量明显下降、排黄绿色粪便。心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、腺胃等器官病原检测结果均为阳性,各试验组的泄殖腔拭子样品在感染后第2天即可检测到FAdV-4。剖检可见典型的心包积水、肝脏肿大、肾脏肿大等病变,肝细胞内有嗜酸性包涵体。说明FAdV-4天津分离株Y17215-1对鸡胚及鸡具有较高致病性。

峨眉黑鸡与青脚麻鸡屠宰性能及肉质性状的比较研究

为了明确峨眉黑鸡屠宰性能与肉质性状及其与青脚麻鸡的差异,试验选择36周龄峨眉黑鸡和青脚麻鸡进行了体尺指标、屠宰性能、肉品质及化学成分分析。结果表明:与同周龄青脚麻鸡相比,峨眉黑鸡拥有更大的体斜长、龙骨长、胸深和胫长,体型更大。峨眉黑鸡和青脚麻鸡的屠宰率都达到了90%以上,全净膛率分别为(63.40±2.67)%和(61.20±7.83)%,产肉性能良好。除了水分,峨眉黑鸡胸肌粗灰分含量极显著高于青脚麻鸡(P<0.01),胸肌、腿肌中其他营养指标在峨眉黑鸡和青脚麻鸡之间均差异不显著(P>0.05)。说明峨眉黑鸡与青脚麻鸡相比,多个屠宰性能与肉质性状相当,某些指标显示出优势。

宁夏地区规模化散养草鸡疾病防控体系的建立

目前草鸡及其产品的市场需求日趋旺盛,但规模化草鸡散养这一生态养殖模式在我国的很多地区还处于起步阶段。为了实现草鸡散养模式的顺利推进和平稳发展,也为了保证草鸡产品的安全、健康,规模化散养草鸡疾病的防控应先行。

鸡新城疫、传染性法氏囊病二联灭活疫苗免疫效果研究

为了观察鸡新城疫(Newcastle disease,ND)、传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)二联灭活疫苗免疫效果,使用鸡新城疫、传染性法氏囊病(HQ株)二联灭活疫苗免疫1日龄SPF鸡与商品蛋鸡,分别于免后第7~91天,每隔1周采血1次,监测传染性法氏囊病毒中和抗体,同时进行传染性法氏囊病毒强毒攻毒,观察免疫后的法氏囊中和抗体消涨情况及不同日龄的攻毒保护情况。结果表明:SPF鸡组免疫后IBD抗体快速上升,免疫后2周法氏囊抗体达到10 lb左右,免疫后4周达到14 lb以上,抗体维持到免疫后第91天,从免疫后5周开始到7周攻毒保护率达到100%。而商品蛋鸡组IBD母源抗体在免疫后2周下降至10 lb左右,在免疫后4周抗体达到13 lb;免疫5周后攻毒保护率达到80%以上。说明鸡新城疫、传染性法氏囊病二联灭活疫苗免疫要在免后4周才能达到较好的保护效果。