不同培养液对体外培养的小鼠胸腺上皮细胞增殖的影响

分离纯化小鼠胸腺上皮细胞(mTEC),以DMEM、DMEM/F12、RPMI 1640 3种基础培养液加10%胎牛血清完全培养液进行培养,MTT法和流式细胞术分别检测mTEC的增殖及细胞周期,筛选出最适合mTEC生长的培养液。结果表明,DMEM培养的mTEC增殖快,细胞增殖指数明显高于DMEM/F12、RPMI 1640培养液,表明DMEM是mTEC体外培养的最佳培养液。

信阳水牛成纤维细胞的体外培养及生物学特性分析

为建立信阳水牛成纤维细胞系,以信阳水牛耳缘组织为实验材料,采用组织块培养法进行原代和传代培养,并对其形态学、生长曲线、细胞活力、染色体、微生物检测等生物学特性进行分析。结果表明,培养的细胞形态为典型的成纤维细胞,生长曲线呈"S"型,细胞冻存前和复苏后的活率均在95%以上,细胞在10代之内二倍体均在96%以上;细菌、真菌、支原体检测结果为阴性。信阳水牛成纤维细胞的体外培养可在细胞水平上对信阳水牛的遗传资源进行保存,也可为体细胞克隆提供实验材料。

鸡胚免疫系统器官组织学变化观察

鸡胚免疫系统器官组织学变化观察鲍恩东，陈万芳（南京农业大学动物医学院２１００９５）鸡胚孵化至后期，其免疫系统器官已基本成熟，因而进行鸡胚免疫是可行的。有关鸡胚免疫的研究多见于血凝抑制（ＨＩ）抗体滴度的测定及免疫保护率的试验。本项研究旨在通过对孵化１０...

下丘脑IFN-γR和ER免疫组化双标技术探索

[目的]选出一种提高下丘脑中雌激素受体(ER)和γ-干扰素受体(IFN-γR)免疫组化双标阳性检出率和染色强度的方法。[方法]用MaxVision法对大鼠下丘脑冰冻切片和石蜡切片分别进行IFN-γR和ER免疫组化双标染色,其中石蜡切片进行抗原微波修复。[结果]下丘脑石蜡切片抗原微波修复后IFN-γR和ER阳性检出率较冰冻切片有明显提高,且双标着色对比鲜明,易于镜下观察。[结论]下丘脑IFN-γR和ER免疫组化双标染色宜选用石蜡切片并进行微波修复,能提高双标阳性率,且显色强,值得推广。

鸭疫里默氏杆菌的共感染情况调查

为了调查山东省鸭疫里默氏杆菌病与其他疾病的混合感染情况,对从山东省6个肉鸭养殖较多县(市)收集到的118份样品进行了大肠杆菌、沙门氏菌和鸭病毒性肝炎的分离鉴定。结果显示,鸭疫里默氏杆菌和大肠杆菌单独感染分别占到样品总数的21.18%和11.86%,鸭疫里默氏杆菌与大肠杆菌和鸭病毒性肝炎的双重感染最为普遍,分别占到样品总数的38.14%和18.64%,鸭疫里默氏杆菌、鸭大肠杆菌、鸭病毒性肝炎的三重感染占到样品总数的6.78%。其中,鸭大肠杆菌的优势血清型为O78和O92,分别占总分离株数的16.90%和15.49%,其次是血清型O93和O142,分别占到总分离株的11.27%和8.45%。

实验性脾虚证大鼠肝脏和肌肉组织中糖原变化的组织学观察

将45只大白鼠随机分成对照组、脾虚模型组及治疗组,每组15只。以利血平(1mg/kg·d)复制大白鼠脾虚证模型,四君子汤辅助治疗,在实验进行至第7天和第14天分别捕杀各组大白鼠,取肝脏、肌肉组织,用组织化学方法测定在不同组间和不同实验阶段其中糖原的变化。结果,在第7天时,脾虚组和治疗组糖原含量明显低于正常对照组,第14天时,与正常对照组相比较,脾虚组和治疗组糖原含量显著升高,且脾虚组糖原含量较其它两组高,提示肝脏和肌肉组织中糖原的变化可能是脾虚证发生发展的重要指标。

东亚钳蝎毒腺的组织学观察

东亚钳蝎毒腺的组织学观察沈萍（河北农业技术师范学院动物科学系昌黎０６６６００全蝎是一种名贵的中药材，具有息风镇惊、通络止痛等功效。《医学入门》有“蝎有用全者，有用梢者，梢力尤劲”之论述，揭示了蝎尾力大效宏的作用。近年来，国内外学者通过一系列研究，确认...

胰岛分离纯化方法概述

胰岛的分离纯化是胰岛移植及胰岛体外功能检测成功的前提和关键,关于胰岛分离纯化的试验研究越来越多,分离纯化的技术日益精进,但其高效性和一致性还未彻底完善。回顾国内外文献,针对目前实验室常用的切碎法、胆总管穿刺法、胆囊穿刺法、多点穿刺注射法等多种分离方法及连续密度梯度离心法、单一密度梯度离心法等多种纯化方法加以综述,简单介绍了胰岛的产量、活性鉴定及体外功能检测的方法,比较了各种方法的优缺点,并总结了分离过程中的一些影响因素,为胰岛分离纯化的进一步优化和标准化提供参考。

高铜对雏鸡器官组织病理损害的研究

将420只1日龄艾维茵健雏,随机分为7组,分别饲以含铜量11 mg/kg的基础日粮和含铜量分别为100、200、300、400、500和600 mg/kg的6种高铜日粮6周,研究高铜对雏鸡的病理损害。结果显示,日粮含铜100和200 mg/kg对雏鸡有促生长作用。日粮铜水平达300 mg/kg以上时,对雏鸡器官组织造成不同程度的病理损伤,表现为肌胃角质层增厚呈黄褐色；肝呈浅黄色或深褐色,肝细胞脂肪变性；消化道上皮细胞变性坏死；免疫器官和肾、心脏、胰腺、大脑等器官的实质细胞肿胀；淋巴免疫器官体积缩小,淋巴细胞数量减少。超微结构观察发现,肝细胞胞浆和胞核内见有数量不等、大小不一的高电子密度的沉积物；凋亡的淋巴细胞染色质呈花瓣样、半月形或环形,聚集在核膜下。表明,肝、消化道和免疫器官是高铜损害的主要靶器官。

牛双芽巴贝斯虫GST-HSP20(exon)融合蛋白间接ELISA检测方法的建立

【目的与方法】以纯化的牛双芽巴贝斯虫GST-HSP20(exons)融合蛋白作为检测抗原,通过优化ELISA反应条件,建立了检测牛双芽巴贝斯虫血清特异性抗体的新型间接ELISA方法。【结果】方阵试验确定的GST-HSP20抗原的最适包被浓度为5μg/mL,血清最佳稀释倍数为40倍,ELISA阳性反应的临界值为OD450≥0.292,批内和批间重复试验的变异系数均小于10%。HSP20间接ELISA方法能排除GST的干扰,与其它梨形虫病无交叉反应,与巢式PCR检测方法的阳性符合率为96%。【结论】所建立的ELSIA检测法重复性好、特异性强、灵敏度高。这是国内首次利用重组蛋白建立的牛双芽巴贝斯病血清学诊断方法,为大规模地进行牛巴贝斯虫病的流行病学调查和血清学诊断提供有效的技术手段。

牛双芽巴贝斯虫巢式PCR诊断方法的建立

【目的与方法】根据Genbank上登陆的双芽巴贝斯虫HSP20基因设计两对引物,SHSP-P1与SHSP-P2和SHSP-P3与SHSP-P4,以其建立牛双芽巴贝斯虫巢式PCR快速检测方法。【结果】第一次、第二次扩增的退火温度均为57℃,分别扩增出约631和409 bp的条带,与预期的大小相符,而作为对照样本的牛巴贝斯虫、牛环形泰勒虫基因组DNA均无此扩增目的条带出现。将感染双芽巴贝斯虫的全血基因组DNA做10倍递减稀释到106倍扩增时,巢式PCR还能见到目的条带,其灵敏度相当于4.6 pg/mL全血基因组DNA。在对50份疫区牛全血DNA样本检测中,阳性检出率分别为22%(11/50)。【结论】所建立的牛双芽巴贝斯虫巢式PCR方法准确、敏感、特异,可以用于牛双芽巴贝斯虫病的快速检测和小范围的流行病学调查,具有重要的临床意义。

新疆军垦细毛羊肾小管上皮细胞的原代培养及鉴定

【目的】建立一种高效、实用的新疆军垦细毛羊肾小管上皮细胞原代培养方案,为肾脏损伤引起的疾病研究奠定基础。【方法】取5～8个月大的出栏细毛羊肾脏皮质,剪成1～2 mm3大小组块,分别采用传统组织块法和改良组织块法,在含15%～20%新生小牛血清的DMEM的培养基中进行原代培养,无需研磨或使用酶和化学试剂,根据上皮细胞自身的生长特性,首次结合刮除法,相差消化法和差速贴壁法,分离纯化上皮细胞,再选用0.037 mm孔径网筛过滤除去肾小球上皮细胞,分离纯化培养肾小管上皮细胞,细胞免疫组化进行鉴定。【结果】改良方法与传统方法相比,细胞贴壁早,生长快,处理时间短,减少了污染机率,提高了细胞培养效率,分离培养的肾小管上皮细胞,纯度达90%以上,细胞呈多角形,鹅卵石状,折光性强,连接紧密,可传至第9代,免疫细胞化学(CK-18)染色鉴定为阳性。【结论】改良的组织块培养与传统的组织块培养以及常用的酶消化培养相比,经济、简单、不易污染,分离培养的肾小管上皮细胞,活性高,纯度高,是一种高效、实用的细毛羊肾小管上皮细胞培养方法。

动物组织块染色石蜡包埋制片法

动物组织切片的制作,是教学、科研和病理检验中的一项经常性工作。但在大批制作时,由于程序繁多,所以工作效率不高。为了简化制作过程,提高工作效率,笔者进行了组织块染色石蜡包埋制片法试验。是将组织的染色,改放在组织包埋切片之前进行,组织切片后不再染色,直接贴片至封固,即成永久标本。

应用碱性抽提法和羟基磷灰石柱层析法提纯质粒DNA

用碱性抽提法和羟基磷灰石柱层析法,加以改进,总结出一套简便易行、低花费的质粒提纯方法。此法适用于一般条件试验室,可进行质粒的批量制备,所提纯质粒经限制性内切酶消解和转化试验,其产量(900μg/500 ml)、纯度和生物学活性均可满足重组DNA的需要。

新形势下基层兽医实验室的定位与发展

动物疫病预防控制机构兽医实验室在动物疫病防控、维护公共卫生安全方面发挥着举足轻重的作用,随着现代畜牧业的不断发展,兽医实验室建设、功能定位都发生了较大变化,本文着重探讨新形势下基层兽医实验室功能定位及发展方向。

应用噻唑蓝法初步研究兔外周血单个核细胞转化的条件

应用噻唑蓝法研究了ＰＨＡ－Ｐ引起兔外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）转化的最适条件，培养时间为４８ｈ，ＰＢＭＣ密度为５×１０１２／Ｌ，ＰＨＡ－Ｐ的终浓度为０．５ｍｇ％。并测定了在此最适条件下的吸光值（ＯＤ），为０．２７６±０．１４２。

用雏鸡肝细胞作为靶细胞检测鸡TNF-α细胞毒活性

为了检测鸡源性肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）样品，常用微量细胞病变法，该方法繁琐、费时；国外虽有用生物学测定的报道，但需要特定的靶细胞（Ｏｇｕｒａ等，１９８７），使鸡ＴＮＦα检测工作难以开展。然而，ＴＮＦα对免疫、抗感染和抗肿瘤方面的研究具有重要意义...

预湿纱布团蘸取犬猫唾液采样法

为配合上级疫控部门开展狂犬病免疫效果监测和唾液带毒情况检查，本单位受委托做部分血液和唾液样品的采集工作。每份唾液2mL。在为宠物犬、猫采集唾液的过程中，我们根据采样要求和宠物生理特点摸索总结出一种宠物主人易于接受、对宠物刺激相对较小的采样法——纱布团蘸取法，使采样任务顺利完成。

北京鸭的粪尿量和肾糖阈值测定

北京鸭的粪尿量和肾糖阈值测定俞莲君，刘敏雄，王柱三（郑州牧业工程高等专科学校４５００４５）（北京农业大学）分析动物粪尿成分及排出量，是研究消化代谢的一种重要手段，可以为氮平衡试验及估测各种营养物质的消化率提供必不可少的基础数据。了解北京鸭粪尿排出量及...