胶体金免疫层析技术在动物病毒性传染病诊断中的应用

自胶体金标记技术问世以来,已在妊娠检测、传染病、毒品、食品安全和兽医等领域得到了广泛的应用。就兽医领域而言,已应用在动物寄生虫、细菌、病毒以及兽药残留检测等方面。论文总结了胶体金免疫层析技术的基本原理和常见的检测抗原、抗体的方法,对胶体金免疫层析技术在动物病毒抗原和抗体检测中的应用进行了详细的介绍,并对该技术在动物病毒性疾病上的应用前景进行了展望。

间接ELISA检测新型鸭瘟病毒抗体

以50%饱和度的硫酸铵粗提病毒,再经SephadexG＿200过柱层析纯化了新型鸭瘟病毒,以此作为包被抗原,并用自制油苗免疫雏鸭,获得了高效价的血清抗体,又经过各种条件优化,建立了检测血清抗体的间接ELISA方法。经对不同发病日龄和免疫油苗后雏鸭的血清检测,证明该检测方法有很高的敏感性、特异性和重复性,可作为快速诊断该病的一种可靠方法。

猪附红细胞体对红细胞免疫水平的影响

为了探讨附红细胞体对红细胞免疫水平的影响,从河南省新乡市某猪场选取了4头感染附红细胞体阳性猪和4头无附红细胞体感染的健康猪,进行血涂片染色镜检,测定红细胞C3b受体花环率和红细胞免疫复合物花环率。结果显示:红细胞出现凹陷或变形,甚至形成空洞,这就有可能使其结构和功能发生改变,甚至出现破裂溶血现象。感染附红细胞体病猪红细胞C3b受体花环率和红细胞免疫复合物花环率都显著下降,说明附红细胞体侵袭红细胞的同时,破坏了红细胞膜表面的C3b受体,游离状态的C3b受体数量明显减少,导致机体红细胞的免疫黏附活性降低,红细胞免疫功能低下。红细胞免疫功能的破坏将直接或间接地影响到整个免疫系统功能的协调,从而使机体的抵抗力下降,为其他病原菌的侵入打开了门户。

气肿疽梭菌菌体抗原分析

[目的]了解气肿疽梭菌的抗原特性。[方法]对气肿疽梭菌标准菌株(C54-1)的菌体抗原进行提纯过柱,通过制备小鼠免疫血清及免疫印迹技术进行了反应原性试验。[结果]气肿疽梭菌的菌体抗原有8条蛋白带,电泳图谱上分别出现了与之相对应的条带,分子质量分别为93、72、56、46、38、26、15、11 kD,其中第2(72 kD)、5(38 kD)、6(26 kD)峰的抗原表现出明显的特异性。用酶联免疫印迹技术分析气肿疽梭菌分泌蛋白的抗原组分,气肿疽梭菌感染小鼠的血清能与抗原组分蛋白发生反应,其中72、38、26 kD蛋白带显色最深。[结论]为气肿疽梭菌的深入研究提供了理论依据。

shRNA表达质粒体外防治猪传染性胃肠炎病毒感染

猪传染性胃肠炎病毒是引起猪胃肠道感染的主要病原之一,新生仔猪感染后死亡率很高,给养猪业带来重大经济损失。为了探索运用RNA干扰技术防治猪传染性胃肠炎病毒感染的可能性,我们构建了两个靶向病毒基因组的小发卡RNA (shRNA)表达质粒pEGFP-U6/P1和pEGFP-U6/P2,并分别转染猪睾丸(ST)细胞。通过细胞增殖试验(MTS)和定量RT-PCR检测试验表明,这两个质粒均可高效特异地抑制猪传染性胃肠炎病毒的复制。研究结果表明,RNA干扰(RNAi)技术可以用来有效防治猪传染性胃肠炎。

畜禽免疫增强剂中复合多糖的提取及免疫活性研究

[目的]为中药有效成分的进一步研究提供理论依据。[方法]通过正交试验对中药方剂中复合多糖的提取工艺进行筛选。以环磷酰胺作为免疫抑制剂建立小鼠免疫抑制模型,进行免疫脏器指数的检测、碳粒廓清试验、血清溶血素形成和外周血T淋巴细胞数检测,探讨中药复合多糖对免疫功能低下小鼠的影响。[结果]中药方剂中复合多糖的最优提取条件为:温度60℃,料液比1∶40,超声处理30 min。中药复合多糖能明显提高正常小鼠脾脏指数、胸腺指数及免疫抑制小鼠脾脏指数;增强正常小鼠和免疫抑制小鼠单核巨噬细胞系统的吞噬功能;促进溶血素的形成并提高外周血中T淋巴细胞数。[结论]该中药复合多糖对免疫抑制小鼠有免疫兴奋作用。

生长抑素亚单位苗对鸡粘膜免疫的影响

在肌肉注射生长抑素 (SS)亚单位苗的基础上应用鸡新城疫弱毒苗进行消化道粘膜免疫鸡 ,显示和检查小肠粘膜中免疫球蛋白A (SIgA)阳性细胞和上皮内淋巴细胞 (iIEL)数量的变化。结果表明 ,应用SS亚单位苗首免后第 3周和第 4周 ,十二指肠中iIEL数量比对照组均显著增加(P <0 0 5) ;首免后第 3周 ,十二指肠、空肠和盲肠扁桃体中SIgA阳性细胞比仅用新城疫弱毒苗免疫组极显著增加 (P <0 0 1 ) ;首免后第 4周 ,十二指肠和空肠中SIgA阳性细胞比仅用新城疫弱毒苗免疫组极显著增加 (P <0 0 1 )。提示SS可抑制小肠粘膜中SIgA阳性细胞和iIEL的分化和增殖。SS亚单位苗可中和体内SS 。

动物免疫失败的影响因素及对策

免疫失败是动物免疫预防中常发生的一种现象,对养殖业健康发展造成很大影响。论文针对日常动物免疫接种过程中出现的免疫失败现象,从疫苗因素、动物机体因素、人为因素等方面进行探讨分析,并提出防止动物免疫失败的主要对策。

胸膜肺炎放线杆菌毒力因子重组蛋白免疫原性研究

【目的】研究猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)重组亚单位疫苗的免疫保护效果。【方法】用1.0mmol/LIPTG诱导重组表达质粒pET-ApxⅠA、pET-ApxⅢA和pPRoAppOML-1,SDS-PAGE鉴定。纯化的表达产物通过Western blot分析有较好的免疫原性。将rApxⅠ、rApxⅢ和rOmp组合作为疫苗Ⅰ组,rApxⅠ、rApxⅢ、rOmp和灭活菌苗组合作为疫苗Ⅱ组,APP 1、3、7型菌制备的灭活疫苗作为疫苗Ⅲ组,PBSⅣ作为空白对照组,进行家兔的免疫试验。免疫共分2次,每次间隔2周。【结果】疫苗Ⅱ组的抗体水平均显著高于疫苗Ⅲ组,疫苗Ⅰ组抗体水平不如疫苗Ⅲ组,其血清效价最高滴度为1∶256。【结论】猪传染性胸膜肺炎毒力因子重组蛋白具有一定的免疫原性,为进一步研究新型亚单位疫苗奠定了基础。

牛结核病的诊断研究进展

牛结核病是由结核分支杆菌引起的牛的一种慢性消耗性传染病,不仅严重危害养牛业的发展,也对人的身体健康造成威胁。做好牛结核病的诊断,是实现该病净化的一种重要手段和前提。本文从病原学、血清学、分子生物学等方面对该病的诊断进行了阐述。

种公牛口蹄疫三价灭活疫苗免疫抗体水平消长测定

为降低口蹄疫病毒对种公牛健康造成威胁,影响正常生产,提高种公牛有效利用率,我站对国内已检测和局部发生过的三种口蹄疫疫病,用三价灭活疫苗免疫注射,并检测种公牛免疫抗体效价的消长,测定该疫苗对种公牛的保护周期;对全群,60头种公牛颈部深层肌肉注射口蹄疫三价灭活疫苗,分别在免疫后21d、60d、120d、172d随机选取15头种公牛采血分离血清,检测免疫抗体水平,疫苗注射后检测分析22头种公牛精液理化指标变化;结果注射疫苗后21d后抗体水平开始升高,达到有效保护水平,60d达到高峰,120d高峰持续,到150d后逐渐下降,172d免疫抗体仍处在保护区间内,注射该疫苗对种公牛未造成过敏反应,对精液理化指标和数量影响差异不显著;注射疫苗后检测对精液理化指标和数量影响差异不显著,免疫保护期的延长,为下一次免疫注射争取了安全期,经过临界期检测免疫抗体水平,能减少免疫注射次数,降低种公牛免疫应激反应。

藏獒犬白介素18基因的克隆及原核表达

通过RT-PCR技术从刺激的藏獒犬外周血淋巴细胞中成功克隆白介素18基因全长,其大小为582bp,编码194个氨基酸。与GenBank上发表的犬IL-18(NM001003305)比较,序列的同源性为100%,与犬、猫、猪,牛、羊、人的IL-18基因核苷酸同源性分别为100%、91.2%、91.1%、88.5%、89.3%、84.4%。系统进化树可以看出,藏獒犬基因与犬的亲缘关系最近,与猫的其次,与人是较远的。然后构建-IL18去信号肽的原核表达载体pET-30a-IL18,转化BL2L,IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE分析表明,表达出25kd融合蛋白而且目的蛋白主要以包涵体的形式存在,westbloting验证表达的蛋白正确。

胸腺素α_1对墟岗黄鸡免疫器官组织学结构的影响

本试验研究了不同剂量的胸腺素α1(Tα1)对墟岗黄母鸡免疫器官指数和组织学结构的影响。结果表明:0.015mg/kg体重剂量的Tα1可显著提高鸡免疫器官指数,可使胸腺皮质增宽,髓质胸腺小体数和胸腺细胞数增加;脾脏胸腺依赖区和法氏囊依赖区细胞增殖;高剂量Tα1则引起法氏囊髓质局部细胞变性和坏死。

禽流感诊断技术的研究进展

禽流感不仅在全球造成了巨大的经济损失,也对人类的健康乃至生命安全提出了前所未有的挑战,本文主要对目前禽流感病毒抗体和病毒病原的检测技术作一简要综述。

兔红细胞免疫功能的研究

应用红细胞C3b受体花环 (C3bRR)和免疫复合物花环 (ICR)试验 ,对 12只大耳白兔红细胞免疫功能进行检测 ,证实兔红细胞表面存在补体C3b受体 (C3breceptor ,C3bR ) ,C3bR花环率为 15 .13 %± 3 .5 5 % ,IC花环率为 9.92 %±1.81% ,表明红细胞免疫系统 (RCIS)的概念亦适用于兔。

黄芪多糖对树突状细胞形态和功能影响研究进展

树突状细胞(DC)是目前发现功能最强的一类抗原递呈细胞(APC),因其在机体免疫应答及免疫功能发挥中担当重要角色,成为免疫学研究热点。多糖是中药黄芪的重要有效成分,由己糖醛酸、果糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸等组成,具有免疫调节、抗肿瘤、抗应激和抗氧化等作用。黄芪多糖的免疫调节一直是人们研究的重点,研究发现其可通过促进DC成熟而发挥免疫调节作用。论文从DC的形态和功能变化、DC的成熟和DC表面标志CD80、CD86、CD83和相关细胞因子表达等方面,综合分析了黄芪多糖对DC抗原递呈能力的影响。

抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的制备与鉴定

为了制备抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)的单克隆抗体(MAb),本试验将Vero细胞中增殖的PEDV超速离心纯化,作为免疫原免疫BALB/c雌性小鼠,采用常规的淋巴细胞杂交瘤技术和PEDV重组S蛋白为基础的间接ELISA方法,制备并筛选能稳定分泌PEDV特异性抗体的杂交瘤细胞;分别采用间接ELISA、Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验,对单克隆抗体的亚型、特异性等生物学特性进行鉴定。结果表明,本试验成功获得了1株稳定分泌PEDV特异性抗体的杂交瘤细胞株5C3。MAb亚类鉴定为IgM,轻链为k型。杂交瘤细胞连续传至20代,细胞培养上清液和小鼠腹水抗体效价分别稳定在1∶600和1∶10 000。特异性试验结果显示,MAb不与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪伪狂犬病毒(PrV)、猪圆环病毒(PCV2)发生交叉反应。western-blot结果显示,MAb能特异性识别PEDV的重组S蛋白。IFA试验结果表明,MAb能与PEDV感染的vero细胞产生特异性荧光。说明本试验获得的MAb能特异性识别重组及天然的PEDV S蛋白,具有良好的抗原性和特异性。

逆转录病毒感染小鼠原代巨噬细胞的方法

巨噬细胞在调节免疫反应中发挥着重要作用,但是其难以转染的特点妨碍了对巨噬细胞调节免疫反应的分子机制进行深入的研究。利用HEK293T细胞包装携带GFP标记的逆转录病毒载体,分别感染处于不同分化阶段的巨噬细胞,通过检测细胞的生长状况和GFP阳性细胞比例,探究感染时间对病毒感染效率的影响。结果表明,在巨噬细胞分化的早期阶段感染重组的逆转录病毒效率最高,并且对细胞的分化和增殖无明显影响。接下来,利用此方法研究了MKP5对I型干扰素表达的调节作用。通过构建和包装表达MKP5的重组逆转录病毒,在巨噬细胞分化后的第一天进行感染,然后进行Western杂交和实时定量PCR分析。采用这一感染条件,不仅检测到大量外源MKP5的表达,并且发现过表达MKP5能显著抑制LPS诱导的IFN表达。因此在巨噬细胞分化早期感染逆转录病毒,可以有效地表达外源目的蛋白,研究这些蛋白分子在巨噬细胞中调控免疫反应的功能,为今后的免疫学研究提供了一种行之有效的技术方法。