乙基香兰素人工抗原的合成及鼠源多克隆抗体的制备

为研究检测乙基香兰素(EV)的免疫学方法,采用活性酯(AE)和混合酸酐(MA)2种方法,将乙基香草酸(EVA)与牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备乙基香兰素人工免疫抗原BSA-EV(AE)和BSA-EV(MA),并采用紫外扫描(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)对人工抗原进行鉴定。将BSA-EV(AE)和BSA-EV(MA)分别免疫BALB/c小鼠,3免后10 d断尾采血并分离血清制备鼠源多克隆抗体。采用间接ELISA法测定血清抗体效价,间接竞争ELISA法测定血清抗体敏感性和特异性。结果显示,乙基香兰素人工抗原制备成功,BSA-EV(AE)和BSA-EV(MA)的偶联比分别为1∶2.92和1∶37.95。BSA-EV(AE)免疫组3号血清效价最高为1∶51 200,对EV的半数抑制浓度(IC_(50))为173.78μg/L,线性范围为14.79~2 041.74μg/L。BSA-EV(MA)免疫组1号血清效价最高为1∶102 400,对EV的IC_(50)为617.00μg/L,线性范围为42.66~8 709.64μg/L。2个免疫组的血清抗体与香兰素、甲基香兰素、麦芽酚、乙基麦芽酚、BSA、鸡卵清蛋白(OVA)的交叉反应率均小于1%。综上,人工抗原BSA-EV合成成功,并成功制备了对EV灵敏特异的鼠源多克隆抗体。

桦褐孔菌口服佐剂对禽类疫苗的体液免疫增强作用研究

为了明确桦褐孔菌发酵产物(Inonotus obliquus fermentation product,IOFP)作为禽类疫苗佐剂的适用性,选择商品化禽流感灭活疫苗和鸭坦布苏病毒弱毒活疫苗分别免疫SPF鸡和SPF鸭,并饲喂含0.8%IOFP的饲粮,同时设置饲喂商品化饲粮的对照组。在免疫后不同时间点采集鸡和鸭的外周血,分离血清后分别测定禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)特异性血凝抑制(hemagglutinin inhibition,HI)抗体、鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)特异性抗体及二者中和抗体效价。使用统计学方法评价IOFP对机体体液免疫反应的影响。鸭免疫后28 d使用DTMUV强毒株攻毒,持续检测泄殖腔排毒量,以确定IOFP对DTMUV排毒量的影响。结果显示,IOFP作为口服佐剂能够显著提升AIV、DTMUV疫苗抗体和中和抗体水平,特别是对免疫早期抗体的改善效果尤为显著。此外,添加IOFP还能够减少DTMUV的排毒量,缩短排毒时间。由此可见,IOFP是一种禽类病毒性疫苗普遍适用的口服佐剂,对于缩短免疫“空窗期”、提升疫苗保护效果具有较好的改善作用。

三种疫苗对牦牛免疫血清抗体效价监测分析

为监测牛病毒性/黏膜病灭活疫苗、牛副伤寒灭活疫苗及多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗对牦牛的免疫效果,本试验选取健康牦牛40头,以多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗每头4 mL的剂量、牛病毒性/黏膜病灭活疫苗及牛副伤寒灭活疫苗每头2 mL的剂量进行接种,并于免疫后30、60、90、120、150和180 d后采集血液,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法对牦牛血清抗体进行检测。结果表明,病毒性/黏膜病灭活疫苗免疫保护效果较好,免疫6个月后能维持较高的血清抗体效价;牛副伤寒灭活疫苗及多杀性巴氏杆菌灭活疫苗免疫抗体效价较低。本试验对免疫后抗体的监测评估为今后牦牛三种疫病的疫苗免疫防控提供了数据支撑。

血清4型禽腺病毒胶体金免疫层析检测方法的建立

为建立对血清4型禽腺病毒(FAdV-4)进行快速检测的胶体金免疫层析法,将FAdV-4的hexon-L1蛋白进行原核表达,免疫兔制备多克隆抗体,将多抗包被在检测(T)线,将羊抗兔IgG包被在质控(C)线,用胶体金标记的多抗作为示踪剂,制备胶体金免疫层析检测卡,用于检测FAdV-4抗原,并对其敏感性和特异性进行评价,用其检测临床样本并与PCR检测结果相比较。结果显示,制备的胶体金检测卡可检出FAdV-4含量为10^(2.094)^(5)EID_(50),FAdV-8、新城疫病毒、禽白血病病毒等均不出现特异性条带,对临床样本的检测与PCR检测的符合率达98%。建立的胶体金检测方法可用于FAdV-4感染的快速检测。

线粒体质量控制对畜禽氧化应激影响的研究进展

在畜牧生产中,氧化应激是一种常见的生理现象,可影响畜禽生长、健康和生产性能。线粒体作为细胞内主要的能量产生中心和氧化应激的主要靶标,其质量控制对于维持细胞内氧化还原平衡至关重要。本文综述了线粒体质量控制对畜禽氧化应激影响的研究进展,包括作用机制、相关调节途径以及在畜禽生产中的应用前景,旨在为畜禽养殖业中应对氧化应激问题提供参考。

母源抗体对禽流感-新城疫疫苗免疫后抗体效价的影响规律研究

为研究母源抗体对鸡免疫禽流感-新城疫灭活疫苗后抗体效价的影响及其变化规律,试验将1日龄鸡苗随机分成A、B两组,分别于1、7日龄接种禽流感(H9)-新城疫二联灭活疫苗,并在1、7、21、35、42日龄分别采血,HI试验测定禽流感和新城疫抗体效价,试验期42 d。结果显示:A、B两组鸡免疫21d后禽流感抗体效价持续下降并达到最低值,A组禽流感抗体下降速度和幅度较B组高,禽流感抗体阳性率21日龄最低,A组抗体阳性率较B组低约30%,A组抗体效价明显低于B组(P<0.05);A、B两组新城疫抗体效价持续下降,21日龄达到最低值,28日龄开始上升,35日龄达到峰值,两组间各日龄抗体效价、峰值均无显著差异(P>0.05),A组新城疫抗体效价下降和上升的速度较B组慢。结果表明高母源抗体对禽流感灭活疫苗免疫后抗体效价影响较大,在高母源抗体基础上免疫禽流感疫苗,影响免疫后抗体效价的上升速度和幅度;高母源抗体对新城疫灭活疫苗免疫后效价影响较小,早免疫能有效保护鸡群。

不同白油佐剂制备的鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗的比较试验

为研究不同白油佐剂制备的灭活疫苗免疫效果,试验采用2个厂家的3个国外进口白油样品、1个国产白油样品,制备4批鸡新城疫、禽流感(H9亚型)(La Sota株+WD株)二联灭活疫苗(以下简称:鸡新-流二联灭活疫苗),分别标A、B、C、D,按照现行版《中华人民共和国兽药典》方法,进行性状、安全检验、抗体检测以及吸收情况对比。结果表明,4批样品析出量均小于0.1 mL,稳定性合格。黏度对比结果,进口白油B最低27.6 cP、进口A 48.2 cP、进口C 56.5cP、国产D 52.0 cP,吸收情况D组最好,其次是C、A,B组最差。免疫持续期对比结果B组抗体最好,免疫后28 d抗体最高,ND抗体滴度为9.83log2,H9抗体滴度为11.33log2,直到免疫后154 d,ND抗体滴度为5.1log2,H9抗体滴度为8.6log2,仍可以达到保护效果;其次是D组,ND部分免疫后21 d抗体滴度最高为8.17log2,H9免疫后42 d抗体滴度最高为9.58log2,ND免疫后154 d抗体滴度为4.2log2,H9抗体滴度为7.8log2;最后为C、A两组。综合评定B组抗体滴度最高但吸收度最差,蛋鸡免疫时可以考虑使用;D组抗体和吸收整体比较好,结合性价比确定为最佳白油佐剂。

不同IBD商品疫苗对国内新型变异株的免疫攻毒保护实验

传染性法氏囊病(IBD)是严重危害家禽业的疾病之一,该病目前呈全世界分布。近期我们进行的IBD流行病学调查结果显示,不同类型鸡群都存在一定比例的IBD野毒感染情况,包括经典毒株、超强毒株及新型变异株都有检出,其中又以新型变异株为主。我们筛选了两个具有代表性的毒株并命名为S1、S2,其与美国变异株在进化树上同属一个分支,氨基酸序列一致性为96.81%~98.24%。为了对IBD的防控提供最新的参考依据,我们在实验室条件下使用不同的商品IBD疫苗免疫SPF鸡后进行攻毒试验,由此来评估其对新型变异株的免疫保护效果。试验结果表明:针对目前国内普遍流行的IBDV变异株攻击导致的法氏囊组织萎缩,HVT-IBD载体疫苗较抗原抗体复合物疫苗、中等偏强毒力活疫苗以及VP2亚单位疫苗在保护力上都具有一定优势,且HVT-IBD载体疫苗单独免疫的保护效果也不比HVT-IBD载体疫苗与IBD活疫苗及HVT-IBD载体疫苗与VP2亚单位疫苗组合免疫的效果差。我们推荐在保证雏鸡具有较高水平的母源抗体的基础上1日龄免疫HVT+IBD载体疫苗,同时辅以良好的生物安全措施会取得比较理想的效果。

实验动物血清胶冻样成因分析及消除方法探索

动物血清是常用的实验材料,血清质量往往决定实验数据的准确性和科学性。动物血清制备常出现一些异常情况,如血清析出,但呈胶冻样血清。胶冻样血清对血清学检测过程和数据造成很大影响,严重干扰实验结果。减少血清胶冻样的形成,对涉及血清学检测的实验都具有重要意义。本文基于血液凝固机制,重点分析实验动物血清胶冻样的成因,并探索消除血清胶冻样的系列方法,减少血清胶冻样的形成,对于血清学检测具有重要的意义。

尘螨诱导特应性皮炎小鼠模型和哮喘小鼠模型的构建

旨在构建尘螨诱导的特应性皮炎(atopic dermatitis, AD)小鼠模型和哮喘小鼠模型。本研究利用3种主要尘螨螨种(屋尘螨、粉尘螨、热带无爪螨)的主要变应原Der p 1、Der f 1、Blo t 5等比混合,分别诱导AD小鼠模型和哮喘小鼠模型,并通过皮肤及肺组织的相关炎症细胞因子水平(IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17A)、血清总IgE水平等指标对AD小鼠的过敏程度进行评估;通过IgE水平、耳朵点刺试验、肺部组织苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining, HE)等指标评估哮喘小鼠模型。结果表明,AD模型中致敏区域皮肤出现破损后结痂现象,皮肤及肺组织中细胞因子水平的变化表明小鼠体内反应偏向Th2反应,IgE水平较正常组显著升高;哮喘模型组小鼠血清总IgE水平显著升高,变应原激发后模型小鼠体温下降明显,且90 min后仍未恢复初始温度,耳朵点刺试验中,抗原的攻击使模型组小鼠耳朵染料渗漏增加,肺组织HE染色显示模型组小鼠炎症细胞浸润增加。本研究成功诱导尘螨AD小鼠模型和尘螨哮喘小鼠模型。

层状双氢氧化物-rFel d 1-Can f 1融合变应原对小鼠模型过敏反应的预防效果分析

旨在预防猫、犬诱导的过敏反应,本研究将猫主要变应原Fel d 1与犬主要变应原Can f 1融合原核表达,纯化制备了rFel d 1-Can f 1融合变应原。将层状双氢氧化物(layered double hydroxides,LDH)与rFel d 1-Can f 1混合,制备LDH-rFel d 1-Can f 1,皮下注射法免疫BALB/c小鼠,随后利用rFel d 1-Can f 1融合变应原诱导过敏小鼠模型,通过检测小鼠应激性过敏反应的体温变化、耳朵点刺试验、肺部组织切片HE染色、血清IgE水平等指标评价LDH-rFel d 1-Can f 1对猫犬诱发过敏反应的预防效果。研究表明,LDH与rFel d 1-Can f 1质量比为7∶1时,LDH可以完全吸附rFel d 1-Can f 1融合蛋白。LDH-rFel d 1-Can f 1可以有效缓解应激性过敏反应引起的小鼠体温下降,显著减少过敏导致的染料渗透面积。肺部组织切片HE染色结果显示,LDH-rFel d 1-Can f 1可以缓解过敏引起的炎症细胞浸润。此外,LDH-rFel d 1-Can f 1免疫后可以诱导小鼠产生较高水平IgG,这为开发抑制宠物猫犬诱发过敏反应的疫苗奠定基础。

小反刍兽疫活疫苗的制备工艺及其质量控制

本文详细探讨了小反刍兽疫活疫苗的制备工艺及质量控制。包括病毒的选择、培养、减毒,以及疫苗提取、纯化和配方调整。特别强调了疫苗稳定性测试和保存条件的重要性。在质量控制方面,论述了生产环境、原材料质量监控,生产工艺的监控,及成品疫苗的安全性、有效性和纯度评估。通过这些严格的步骤和措施共同确保了疫苗的高效性和安全性,对于防控小反刍动物疫病具有重要意义。

汨罗市部分地区羊衣原体血清学调查与分析

本研究从汨罗市4个乡(镇)26个羊养殖场(17个规模化羊养殖场和9个散养户)采集血清样品1 045份,采用间接血凝试验检测羊衣原体流行情况。结果发现,衣原体血清阳性样本共192份,阳性率为18.37%,其中,规模化羊养殖场和散养户来源样本阳性率分别为15.60%(127/814)和36.80%(85/231);哺乳羔羊、幼年羊、青年羊、成年母羊和成年公羊阳性率分别为10.52%(8/76)、13.38%(19/142)、17.63%(67/380)、21.50%(86/400)和25.53%(12/47);不同季节衣原体感染情况差异较大。其中,秋季和冬季稍高,分别为23.76%(67/282)和25.0%(55/220);而春季和夏季偏低,分别为13.99%(41/295)和11.69%(29/248)。结果表明,汨罗市部分地区羊养殖场衣原体感染情况较为严重,对人畜健康造成巨大的威胁。

浅述兽用核酸疫苗及展望

核酸疫苗包括DNA疫苗和RNA疫苗,是近年备受关注的新型疫苗,其可诱导机体产生全面的免疫应答,具有安全、可靠、生产方便、便于储存和运输等优点。本文对动物核酸疫苗的作用机制、影响免疫效果因素、研究进展、存在问题、应用前景等方面的简单综述,以期为核酸疫苗的发展提供思路。

猪用疫苗免疫接种后应激反应及应对措施

疫苗免疫接种是防范传染性疾病发生流行最节约最有效的手段之一,通过接种经过特殊处理的抗原能够更好地诱导机体产生相应的抗体,当机体再次受到相同的抗原入侵之后,就能够迅速识别抗原产生抗体,短时间的杀灭抗原,有效增强猪群的身体抵抗能力,抵御病原的传播流行,降低传染性疾病的发生率。本文主要结合实际工作经验,探讨了生猪免疫接种疫苗之后应激反应产生的原因,并提出相应的应对措施,希望通过研究对广大同行有所帮助。

MDPV和MDGPV母源抗体对MDPV-MDGPV二联活疫苗抗体水平影响的研究

为明确番鸭细小病毒(MDPV)和番鸭小鹅瘟病毒(MDGPV)母源抗体对免疫MDPV-MDGPV二联活疫苗(下称“二联活疫苗”)番鸭抗体水平的影响,本研究将二联活疫苗分别免疫1日龄不同母源抗体水平的雏番鸭,并设非免疫对照组,分别于免疫前和免疫后不同时间点连同非免疫对照组同时采血,采用乳胶凝集抑制试验(LPAI)分别测定各组雏番鸭血清中MDPV LPAI和MDGPV LPAI抗体效价。并按雏番鸭母源抗体高低分组即:MDPV母源抗体阴性组(<1 log2,A组)、MDPV低母源抗体组(1 log2~3 log2,B组)、MDPV高母源抗体组(4 log2~6 log2,C组)、MDGPV母源抗体阴性组(<1 log2,D组)、MDGPV低母源抗体组(1 log2~3 log2,E组)和MDGPV高母源抗体组(4 log2~6 log2,F组),根据LPAI抗体检测结果分析各免疫组抗体水平变化和非免疫对照组母源抗体消长规律。结果显示:免疫二联活疫苗均可诱导1日龄雏番鸭产生不同水平的LPAI抗体,免疫后7 d(7 dpi)MDPV LPAI和MDGPV LPAI抗体均100%阳性,随后逐渐升高至28 dpi达峰值;其中,7 dpi~28 dpi母源抗体阴性组(A组和D组)的MDPV LPAI和MDGPV LPAI抗体快速升高且明显高于母源抗体阳性组(B组、C组、E组和F组);1 dpi~5 dpi母源抗体阳性组(B组、C组、E组和F组)因母源抗体未衰减,其MDPV LPAI和MDGPV LPAI效价均高于母源抗体阴性组(A组和D组)。非免疫对照组番鸭母源抗体消长分析结果显示不同母源抗体衰减期存在差异,随着日龄增长母源抗体逐渐下降,低母源抗体组(1 log2~3 log2)和高母源抗体组(4 log2~6 log2)分别在8日龄和15日龄时均有80%左右番鸭MDPV LPAI和MDGPV LPAI抗体转为阴性。上述结果表明低母源抗体对1日龄雏番鸭二联活疫苗抗体的产生无明显影响,而高母源抗体对番鸭抗体峰值有一定影响,建议高母源抗体雏番鸭可适当推迟至5日龄免疫。本研究为该二联活疫苗免疫程序的制定提供了科学依据。

副猪嗜血杆菌AfuA-ELISA抗体检测方法的建立与应用

为建立一种特异性强、灵敏度高的副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)ELISA抗体检测方法,为副猪嗜血杆菌病的诊断及免疫抗体检测提供技术支撑,首先重组表达了HPS 2个具有免疫原性的蛋白(HbpA、AfuA),随后对HbpA、AfuA进行初筛,选择AfuA作为最佳包被蛋白。通过优化AfuA-ELISA反应条件,确定了最佳抗原包被质量浓度为5μg/mL,最佳封闭液为5%脱脂乳溶液,最佳样品稀释液为2%BSA溶液,最佳样品孵育时间为30 min,最佳样品稀释度为1:25,最佳酶标二抗稀释度为1:20000,最佳酶标二抗孵育时间为30 min,最佳底物孵育时间为10 min。特异性试验显示,建立的AfuA-ELISA方法对猪其他常见病原阳性血清的检测结果均为阴性,表明其具有良较好的特异性。对300份临床样品进行检测,AfuA-ELISA方法分别检出阳性、阴性血清177、123份,与商业化试剂盒的阳性、阴性符合率分别为90.0%、87.5%,总体符合率为89.0%。结果表明,本研究建立的AfuA-ELISA方法具有特异性强、灵敏度高,与商业化试剂盒符合率高的优点,可以用于临床HPS抗体检测。

天峻县牦牛牛出败的诊治

采用实地调查、临床剖解、细菌分离培养及PCR检测等方法,对来自天峻县木里镇某养殖户的病死牦牛进行诊断,从死亡牦牛肺脏组织中分离到巴氏杆菌,经PCR检测发现多杀性巴氏杆菌特异性条带,因此该病例是由多杀性巴氏杆菌引起牛出败而导致死亡的。

2022年云南省边境地区牛蓝舌病病毒及阿卡斑病毒抗体检测

为了解云南省边境地区牛蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)与阿卡斑病毒(Akabane virus,AKAV)的流行与分布现状,2022年在云南省9个边境县(市)采集1 820份牛血清样本,应用c ELISA方法进行BTV与AKAV抗体检测,并对检测结果利用IBM SPSS Statistics 22、Excel 2007等软件进行区间、群间和时间的分类统计分析。结果显示:共检出BTV阳性样品1 207份,样品阳性率为66.32%(1 207/1 820);检出AKAV阳性样品350份,样品阳性率为32.17%(350/1 088)。各县(市、区)的BTV样品阳性率为43.50%~93.00%,AKAV为12.90%~50.00%,不同地区间的差异有统计学意义(P <0.01);黄牛和西门塔尔牛的BTV和AKAV抗体样品阳性率均高于水牛,入境牛BTV抗体阳性率显著高于本土牛,两组数据差异均有统计学意义(P <0.01);规模养殖场的BTV和AKAV抗体阳性率和散养户差异无统计学意义(P> 0.05);7-8月的BTV和AKAV抗体阳性率显著高于5-6月(P <0.01)。结果表明:BTV和AKAV在云南省边境地区已广泛存在,其感染有加重趋势;病原通过境外牛传入国内的风险不断增加,防控形势较为严峻。因此,云南省应继续加强边境地区BTV、AKAV等虫媒病毒的监控,并制定实施相应防控措施,以保障国内畜牧业健康发展。

贵州省正安县不同养殖模式下鸡H5、H7和H9亚型禽流感血清学调查

为了监测并评价贵州省正安县各养殖模式禽流感的免疫效果,采用血凝试验与血凝抑制试验检测血清中H5、H7、H9亚型禽流感病毒(AIV)的抗体情况,2020—2022年累计采集贵州省正安县鸡血样660份,为做好禽流感监测预警与防控工作奠定基础。结果表明,2020—2022年,鸡H5抗体阳性率分别为81.00%、79.20%、76.30%,H7抗体阳性率分别为74.00%、77.90%、82.00%,H9抗体阳性率分别为78.64%、70.00%、84.00%。禽流感H5、H7、H9免疫抗体合格率均达到国家标准。