鸭坦布苏病毒E蛋白的原核表达与反应原性分析

为了利用原核表达系统表达鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus, DTMUV)E蛋白,试验利用RT-PCR方法扩增DTMUV E基因,经核苷酸序列测定后,与pET-30a(+)载体连接,然后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,构建重组表达载体pET-DTMUV-E,再转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达DTMUV E蛋白,通过SDS-PAGE分析表达产物,Western-blot方法鉴定反应原性,分别从诱导时间和IPTG浓度方面对表达条件进行优化,并进行表达产物的可溶性分析。结果表明:克隆得到大小约为1 503 bp的DTMUV E基因,并成功与pET-30a(+)载体连接,获得分子质量约65 ku的融合蛋白,可以与兔抗6×His多克隆抗体和鸡抗DTMUV多克隆抗体发生特异性免疫反应,终浓度为4 mmol/L的IPTG诱导4 h为最佳表达条件,重组蛋白DTMUV E主要以包涵体形式表达。说明利用原核表达系统表达的以包涵体形式存在的DTMUV E蛋白,具有较好的反应原性。

益生菌降胆固醇作用及其机制研究进展

心血管疾病(Cardiovascular disease,CVD)严重威胁人类的健康,《2017年中国心血管病报告》显示,因CVD死亡的人数已占据我国居民疾病死亡的40%以上[1],2005—2015年因CVD造成的直接经济损失更是达到5500亿美元以上[2]。CVD的主要危险因素有动脉粥样硬化、冠心病和中风等,而这些危险因素都与高胆固醇血症密不可分,流行病学研究结果也表明,总胆固醇与CVD的发病呈正相关,降低血清胆固醇水平可显著降低心血管疾病的发病风险。