一起鹅源番鸭呼肠孤病毒的分离鉴定

2019年1月以来,山东菏泽、聊城、济宁、潍坊等地雏鹅发生了肝脏有密集性白色坏死灶的传染病。为寻找发病原因,笔者对发病鹅进行了症状观察、病理剖检、病原分离和PCR检测。剖检结果表明,病死鹅肝、脾密集性坏死灶出现几率近100%。PCR检测和序列比对结果表明,病原初步确定为番鸭呼肠孤病毒。根据检测结果采取了免疫接种、消毒等综合措施,病情得到了控制。

蓝舌病病毒VP7蛋白的可溶性纯化及多克隆抗体的制备

首先参照GenBank中已发表的基因序列人工合成蓝舌病病毒VP7基因,将其克隆到表达载体pSMK上。选取含有正确开放阅读框的重组质粒pSMK-VP7,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,于16℃利用IPTG诱导剂进行诱导表达,优化表达条件,纯化重组VP7蛋白,免疫新西兰白兔制备VP7多克隆抗体,利用免疫印迹试验对制备的多克隆抗体进行特异性分析。结果显示,重组VP7蛋白在大肠杆菌中呈可溶性表达,且16 h表达量最大,利用镍离子树脂纯化获得了高纯度的VP7蛋白;原核表达的重组VP7以及天然的VP7蛋白均能够与VP7多克隆抗体发生特异性反应。本研究成功实现了重组BTV VP7蛋白的可溶性表达和纯化,并制备了特异性良好的多克隆抗体,为进一步开展BTV的VP7功能研究和建立BTV诊断方法奠定了基础。