棕色绿僵菌胞外酶的诱导及发酵液生化特性研究

为了研究不同液体培养基及诱导物对棕色绿僵菌作用过程中胞外酶的最佳诱导条件和发酵液的生化性质,从而在对家畜外寄生虫进行防治过程中更好地利用该菌,在前期研究基础上,试验使用培养效果较好的3种液体培养基加入不同诱导物对棕色绿僵菌进行液体发酵培养,检测发酵液的蛋白质含量、蛋白酶活性、磷酸酶活性以及杀蝇蛆效力等,确定该菌产生胞外酶和杀虫作用最适的培养基与诱导物。结果表明,蝇蛆三期幼虫诱导的枸橼酸培养基发酵液蛋白质浓度较高达404.45 mg/L、蛋白酶活性42.28 U/mL、酸性磷酸酶活性37.06 U/L、碱性磷酸酶11.04 U/L,同时杀蝇蛆效力也是最高的,达60%。因此,枸橼酸液体培养基是产生胞外蛋白质最佳培养基,较好的诱导物为蝇蛆三期幼虫。说明不同培养基及诱导物对棕色绿僵菌的代谢进程会产生显著影响,导致其代谢过程中分泌的蛋白质含量、蛋白酶和磷酸酶的活性产生明显差异,对杀蝇蛆效率产生影响。

家蝇抗药性相关乙酰胆碱酯酶基因突变的进化起源分析

家蝇是多种人与动物疾病的传播媒介,化学防治是家蝇防治的重要手段之一,但杀虫剂抗性是家蝇化学防治的一大障碍。以往的研究表明,乙酰胆碱酯酶(由Ace基因编码)的某些点突变与家蝇对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂抗性相关。在我国野外家蝇群中发现了可以导致抗药性的乙酰胆碱酯酶V260L、G342A、G342V和F407Y氨基酸置换,但对其进化起源模式尚缺乏认识。本研究采用基因片段测序的方法,获得了来自北京、山东、上海、广东4个省份的728头家蝇的Ace基因片段序列,从中鉴定出9种不同的Ace单倍型。分子系统树和网络图分析发现了V260L、G342A和F407Y突变的多起源性,4种三位点突变(L-A-Y)的单倍型源自两条不同的进化途径。

羊狂蝇化蛹、羽化的生物学研究

本文揭示羊狂蝇羽化与环境因素的相关性，幼虫在土壤栖息定位，蛹态，蛹与幼虫大小的相关性，成蝇活动行为和寿命，雌雄蝇比率等生物学特性，为羊狂蝇应用研究提供具有指导意义的基础资料。

中国区普氏野马(Equus przewalskii)胃蝇蛆病新病原体(Gasterophilus spp.)报道

近年在我国新疆地区普氏野马蝇蛆病的防治中一新病原体引起了学者的关注.根据采集到的该种幼虫标本鉴定,该病原为双翅目、胃蝇科、胃蝇属种类,其特征在目前国内文献中未见记载.该种第三龄幼虫具体特征：虫体绿色,长14～17 mm,长宽比为2;体呈纺锤形,前尖后钝;第3胸节至第6腹节各体节前缘有单列黄色棘刺,刺强大,呈纵向扁形.自第4腹节起,背面中央的刺开始不全,直至第7腹节背面刺全部缺失.

驯鹿狂蝇幼虫感染情况调查

20 0 3年 3～ 9月 ,以内蒙古自治区根河市敖鲁古雅鄂温克民族乡作为试验基地 ,对 82 9只驯鹿进行了鹿狂蝇幼虫感染率、感染强度和寄生部位的调查。结果表明 ,当地驯鹿狂蝇幼虫感染率为 92 .0 % ,平均感染强度为 16 .2条 ;驯鹿狂蝇幼虫主要寄生于驯鹿的鼻腔鼻甲部、咽喉部及鼻、咽的交接部。

伊维菌素和阿维菌素对驯鹿狂蝇蛆Ⅱ期与Ⅲ期幼虫的驱杀试验

随机选取自然感染驯鹿狂蝇蛆Ⅱ、Ⅲ期幼虫的驯鹿60只(雌、雄各30只),将其分为3 组,分别为伊维菌素组、阿维菌素组和空白对照组,每组20只(雌、雄各10只),进行驱杀驯鹿狂蝇蛆试验。结果表明,伊维菌素和阿维菌素对驯鹿狂蝇蛆Ⅱ期幼虫的驱杀率均为100％,而对Ⅲ期幼虫的驱杀率分别为99．7％和96．6％。

新疆青河县羊蜱(虱)蝇病的诊治报告

2014年12月,我们接诊了青河县查干郭勒乡兽医站送检的数十只羊体不明黑褐色寄生虫,经形态学鉴定,该寄生虫为羊蜱（虱）蝇,根据兽医技术人员反映,羊只感染数量大,感染虫体数量多,危害严重,且为该地区首次发生。我们立即前往该地区对发病情况进行了调查,并采取了综合的防控措施,报告如下。

驯鹿狂蝇生活习性的观察

对感染驯鹿狂蝇幼虫驯鹿进行了剖检观察,证实狂蝇幼虫主要寄生于驯鹿鼻腔及咽喉黏膜,在当年的7月到翌年1月主要以一期幼虫为主,从翌年2～3月开始快速生长发育,在4～6月多为二、三期幼虫。从翌年5月开始,成熟的三期幼虫随驯鹿打喷嚏排出体外羽化为成蝇。通过对驯鹿狂蝇生活史的观察,表明在大兴安岭地区,驯鹿狂蝇三期幼虫在50％～70％的湿度、21．5℃的平均温度及21．5℃下的451．5～666．5℃总积温下,经21-31 d羽化为成蝇,羽化率为59．6％。成蝇出现于6-9月份,在7～8月份达高峰期。驯鹿狂蝇1年发生一个世代,在驯鹿体内的寄生生活长达9-10个月;雌性成蝇每次产胎蚴30-80条,一生共产800-1000条;雌蝇寿命比雄蝇长,约为1-3周。

感染高原鼠兔的皮蝇蛆线粒体CO1基因序列分析

为分析感染高原鼠兔的皮蝇蛆分子分类地位，通过聚合酶链反应（PCR）对6株感染高原鼠兔的皮蝇蛆的线粒体CO1基因片段进行扩增、克隆和测序，并将其序列与 GenBank中的皮蝇科、胃蝇科、狂蝇科的序列进行了比对分析，构建了遗传进化树。结果显示，扩增出的CO1基因片段为688 bp，感染高原鼠兔的皮蝇蛆与皮蝇科的皮蝇蛆遗传距离更近，位于一个大的进化树分支上，其基因片段同源性为81．2％～86．6％；与胃蝇科的蝇蛆基因片段同源性为77．8％～80．4％，与羊狂蝇基因片段同源性为79．4％～79．8％。结果表明，试验中的6株感染高原鼠兔的皮蝇蛆之间的基因片段同源性98．1％～100％，为皮蝇科的皮蝇蛆。

四种胃蝇三期幼虫的扫描电镜观察

为准确掌握伊犁马四种胃蝇属三期幼虫的鉴别特征,本文以伊犁地区采集的马胃蝇蛆(n=200)为试验材料,借助体视显微镜、扫描电子显微镜对其进行形态学鉴定,并以各属蝇蛆每节排列刺的差异、形状、口钩及气门板等结构作为鉴定依据。结果显示,本次试验共鉴定出四种马胃蝇三期幼虫:兽胃蝇蛆、鼻胃蝇蛆、红尾胃蝇蛆、肠胃蝇蛆。超微观察可见鼻胃蝇三期幼虫第一胸段出现"隔板状"突出物、其刺列为单排刺列且胸部第一刺列为双排刺,此外鼻胃蝇三期幼虫口钩表面纹路差异较大且表面沟壑中有类似"纤毛状物"的存在;兽胃蝇三期幼虫背侧下颌骨部分扩展成叶且叶部的顶部为平滑状,其他三种胃蝇属三期幼虫叶部的顶端部位为锯齿状;红尾胃蝇形态学特征与肠胃蝇差异不显著,但其寄生部位与刺带特征可作为其鉴定依据。胃蝇属常见四种三期幼虫体表刺列、头部下颌骨叶部、口钩表面沟壑等均可作为其鉴别要点,为马胃蝇三期幼虫的鉴定提供参考依据。

狂蝇蛆病对驯鹿体内抗氧化系统的影响

为探讨驯鹿狂蝇蛆病与机体氧自由基代谢的关系,分别对感染驯鹿和健康驯鹿血清中的微量元素硒(Se)、锌(Zn)、铜(Cu)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)、过氧化氢酶(CAT)和脂质过氧化终末产物丙二醛(MDA)的含量进行了测定。结果表明,感染组驯鹿血清Se含量极显著低于对照组(P<0.01),而血清Zn、Cu含量差异不显著;感染组驯鹿血清GSH-Px活性极显著低于对照组(P<0.01);SOD活性显著低于对照组(P<0.05),CuZn-SOD显著低于对照组(P<0.05);CAT活性差异不显著;MDA含量显著高于对照组(P<0.05)。表明机体患病后产生大量氧自由基,导致抗氧化能力降低,引发脂质过氧化损伤。

准噶尔盆地南缘区域羊鼻蝇的发生世代调查

以新疆准噶尔盆地南缘区域为调查点，应用昆虫系统调查法进行羊鼻蝇生活史调查，并对其各虫态期进行了测算和分析。结果发现：羊鼻蝇幼虫的百分比曲线呈不等称双峰型，发育速率时快时慢，冬季有滞育现象；该地区羊鼻蝇的发生世代为１ ａ ２ 代，２ 代所用时间不等。

皮蝇Hypodermin C基因的克隆及重组表达载体的构建

参照牛皮蝇HypoderminC(HC)基因的核苷酸序列 ,设计了 1对引物 ,以牛皮蝇总RNA为模板 ,用RT PCR扩增了牛皮蝇HC基因 ,将扩增基因进行克隆测序。测序结果表明 ,所获得基因与已知序列同源性达 99.4 5 %。同时 ,将该基因与表达载体 pGEX 4T 1连接 ,构建并获得阳性重组表达载体。

牛皮蝇幼虫蛋白表达谱及一种高表达蛋白的分离纯化

研究分析了牦牛皮蝇幼虫蛋白表达谱,为牛皮蝇的基础研究和蛆病防控提供数据。试验提取了从牦牛皮下采集的中华皮蝇(H.sinense)幼虫总蛋白,SDS-PAGE分析幼虫蛋白表达谱,用分子筛和离子交换层析对一种高表达蛋白进行纯化,并对表达谱中差异极大的两个样品进行双向电泳和质谱分析。结果显示,幼虫个体间蛋白表达谱存在不同程度差异,约23%的个体中含有一种分子质量约为78ku的高表达蛋白,纯化并获得了该蛋白质;双向电泳分别获得了312±24和284±13个蛋白点,但对其中的4个蛋白点进行质谱分析,未得到分数高的匹配结果。研究获得了牛皮蝇幼虫蛋白表达谱和纯化的蛋白质,为进一步研究牛皮蝇幼虫的基因表达特征、蛋白质功能等奠定了基础。

溴氰菊酯在家蝇体内诱导蛋白的二维电泳分析

家蝇经过溴氰菊酯１２代的筛选，抗性品系的ＬＤ５０是敏感品系的１７．５倍，且与有机磷类杀虫剂无交互抗性。进一步对成虫的双向电泳结果显示，抗性品系中至少有３个多肽点在敏感品系中未出现，这些点很可能就是由抗药性基因诱导产生的抗性蛋白质。而由敏感品系表达的一些蛋白却在抗性品系中缺失，可能是抗药性基因的被诱导而抑制了另外一些基因的表达。

影响伊犁昭苏地区肠胃蝇产卵因素的研究

为了解影响伊犁昭苏地区肠胃蝇(Gastrophilus intestinalis,G. intestinalis)产卵因素,采集3个马场的伊犁马体表附着的虫卵,进行形态学鉴定,并采用SPSS19.0统计软件分析产卵量与马匹体表部位、被毛颜色、年龄、海拔之间的关系。结果显示,虫卵前端具有斜的卵盖,末端黏附于马毛上,平均大小为131.8μm×38.5μm,形状指数3.42,鉴定为肠胃蝇虫卵;以鬃毛、肩胛部、前腿部位,黑骝和红骝颜色的被毛,中年期的马匹,海拔最高的马场中的肠胃蝇产卵量最多。本研究结果表明马匹体表部位、被毛颜色、年龄、海拔对肠胃蝇的产卵有一定的影响,该结果为今后探讨马胃蝇产卵与其流行病学之间的关系提供了前提和基础。

家蝇幼虫双翅肽MdDpt I成熟肽基因的克隆与原核表达

对鸡沙门氏菌诱导家蝇幼虫构建的抑制性消减文库(SSH)中筛选得到的家蝇双翅肽I(Musca domesticaDiptericin I,MdDptI)基因进行克隆、表达,并对表达产物的抑菌活性进行初步研究。以沙门氏菌诱导家蝇幼虫cDNA为模板,采用cDNA末端快速扩增技术(RACE),对MdDptI基因进行扩增,并对扩增产物进行测序和生物信息学分析,进一步去掉信号肽并构建重组表达质粒pET-28a-MdDptI,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析。借助亲和纯化获得目的蛋白,并验证目的蛋白的生物活性。MdDptI基因全长为419 bp,包含一个300 bp的完整开放阅读框(ORF),编码99个氨基酸,其cDNA序列与GenBank中登录号为FJ794602.1的家蝇双翅肽基因同源性为95%。构建了家蝇MdDptI基因的成熟肽原核表达质粒pET-28a-MdDpt-I,并获得成功表达,表达产物约为12 ku,与预期结果一致。纯化后的目的蛋白表现出一定的抑菌活性。本试验获得了MdDptI基因的全长序列,构建了原核表达载体,并成功获得表达纯化。

埃普利诺菌素浇泼剂对牦牛皮蝇幼虫驱除效果试验

应用埃普利诺菌素浇泼剂驱除牦牛皮蝇幼虫,并设埃普利诺菌素注射剂药物对照组和阳性对照组。结果:剖检埃普利诺菌素浇泼剂300μg/kg,400μg/kg,500μg/kg剂量组牦牛与药物对照埃普利诺菌素注射剂组及伊维菌素浇泼剂组牦牛,均未检出皮蝇1期幼虫,而阳性对照组牦牛皮蝇1期幼虫感染率35.0%,平均感染强度29.4(9～53)条。翌年3、5月份两次触摸检查牛背部皮下瘤疤和皮肤虫孔,4个药物试验组牦牛均未检出,而阳性对照组牦牛两次检查平均感染率45.16%,平均感染强度6.45个。试验证明埃普利诺菌素浇泼剂低、中、高3个剂量对寄生于牦牛的皮蝇幼虫驱净率、驱虫率均达100.0%,高效安全。

家蝇幼虫血淋巴粗提物的抑菌活性分析

试验对家蝇幼虫血淋巴的抑菌活性进行了测定。结果显示,家蝇幼虫血淋巴对革兰阴性菌大肠杆菌、沙门菌和革兰阳性菌金黄色葡萄球菌均有抑杀作用,对于革兰阴性菌的抑杀作用大于革兰阳性菌,0.8mg/mL的血淋巴粗提物可达到约50%的抑杀率。