A型副鸡嗜血杆菌血凝素基因原核表达及间接ELISA方法的建立及应用

原核表达A型副鸡嗜血杆菌(Haemophilus paragallinarum serotype A,Hpgserotype A)的血凝素蛋白HA,并以HA蛋白为包被抗原,建立血清间接ELISA检测方法。克隆Hpg HA基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中进行重组HA蛋白的诱导表达,对表达产物进行纯化,并进行Western blot鉴定;用纯化后的HA蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立血清间接ELISA检测方法,并进行特异性、灵敏度和重复性试验,最后对临床样品进行检测。原核表达获得大小约为37ku的重组HA蛋白;Western blot结果表明重组蛋白具有良好的特异性和抗原反应性。Hpg间接ELISA优化反应条件为:抗原包被量每孔500ng,血清以1∶200倍稀释作用1h,酶标二抗以1∶2 500倍稀释作用1h,TMB显色时间为10min。在该优化条件下,OD_(450)≥0.34为阳性,反之为阴性;特异性试验结果表明对鸡新城疫病毒、禽流感病毒、沙门菌、金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌和大肠埃希菌阳性血清检测均为阴性;对85份阳性血清进行检测,敏感性为98.8%;重复性试验结果表明,批内和批间OD_(450)值的变异系数分别1.5%~3.7%和6.5%~8%。用本试验建立的方法对临床上215份鸡血清样品进行检测,阳性率为25.1%。说明建立的ELISA检测方法可用于Hpgserotype A抗体水平的检测。

当前俄罗斯动物传染病的主要科研方向

俄农业科学院科罗梅斯洛夫院士近年撰文,提出俄罗斯动物传染病当前最主要科研方向是:对动物和人主要共患疫病进行深入地科学基础研究并实现动物流行病学和流行病学的监测;实现对动物、鱼和蜜蜂传播最广、经济上最重要的传染和侵袭之动物流行状态的监督;在分子生物学、遗传工程和细胞生物技术成就的基础上,对用于诊断、防治动物、禽。

我国家畜传染病研究新进展

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六次和兽医生物技术分会第五次学术研讨会,于1995年9月10日至14日在杭州市联合召开。会议收集论文370多篇,这些论文充分反映了近两年来,我国家畜传染病防制和兽医生物技术方面的研究进展、学术水平、丰硕成果和成功经验。主要表现在以下几个方面: