两株兔源多杀性巴氏杆菌分离鉴定及荚膜血清分型

为探明浙江省规模兔场主要传染病流行现状,明确其致病菌及血清型,开展了家兔流行病学调查与病原分离鉴定。调研发现,不少兔场存在以打喷嚏和鼻腔流出浆液性、黏液性或脓性分泌物为主要临床特征的呼吸道传染病,进而对浙江省家兔主产区发病严重兔场进行采样,从嵊州、宁波三家患病兔鼻腔中分离到两株病原菌,进行了病原分离鉴定、荚膜血清分型及药敏试验。根据分离菌的菌落形态、革兰氏染色特征、特异性PCR以及荚膜血清分型PCR鉴定结果,确定两株致病菌均为荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌,分别命名为ZJNB0321和ZJSZ0322。构建系统发育树,结果表明,两分离株属于同一分支,且与多杀性巴氏杆菌处于同一分支,并拥有独立的分支。药敏试验结果表明,不同地区分离株药敏特性不尽相同。研究结果为兔场合理用药及有效防控提供了科学依据。

布鲁氏菌病合并脊柱炎疗效影响关键因素的研究

探讨布鲁氏菌病合并脊柱炎疗效影响的关键因素,为临床标准化治疗及个体化治疗提供参考和指导,以利于缩短患者疗程,提高治愈率。方法 收集2015年1月1日~2019年12月31日我院收治的208名患者年龄、职业、菌种、合并其它并发症、临床分期、脊柱炎分型、依从性、疗程、布鲁氏菌核酸滴度、及治疗4周、6周、8周、12周、24周后各项实验室检查结果及临床恢复情况记录数据,进行分析,采用单因素和多因素logistic回归分析筛选出影响疗效的关键因素。结果 手术治疗中43例疼痛无缓解,神经功能损伤加重12例,炎症因子下降缓慢14例,椎管内脓肿无吸收8例,椎体破坏加重3例,持续发热3例。保守治疗中12例疼痛无缓解,神经功能损伤加重3例,炎症因子下降缓慢5例,椎管内脓肿无吸收3例,椎体破坏加重无,持续发热3例。糖尿病、关节炎、神经功能损伤、椎管内脓肿和白蛋白是布鲁氏菌病脊柱炎治疗效果不满意的危险因素。其他因素如年龄、性别、饮酒、吸烟、BMI、高血压、心血管疾病、肝功能损伤、椎旁脓肿、多节段感染、脊柱不稳、白细胞和血红蛋白对治疗效果影响不大。年龄对治疗效果的影响是显著的(P<0.05),表现为年龄每增加一单位,治疗成功的概率增加1.341倍。性别(男性)、饮酒、吸烟、BMI异常、患有糖尿病、高血压、心血管疾病、肝功能损伤、关节炎、病程超过2个月、神经功能损伤、椎管内脓肿、椎旁脓肿、多节段感染、脊柱不稳以及白细胞、血红蛋白、白蛋白异常都与治疗效果显著相关(P<0.05)。BMI异常的患者治疗成功的概率是正常BMI患者的4.951倍,患有糖尿病、高血压等病症的患者治疗成功的概率都显著增加。结论 患者的以上因素均会给治疗带来影响,但患者感染的临床分期、脊柱炎分型、依从性、疗程、布鲁氏菌核酸滴度为影响疗效的关键因素。

复方蒲公英乳房灌注剂对奶牛临床型乳房炎的防治效果试验

本研究通过测定乳样体细胞数和血清淀粉样蛋白A,结合临床观察研究复方蒲公英乳房灌注剂对奶牛临床型乳房炎的防治效果。结果显示,复方蒲公英奶牛乳房灌注剂能显著降低临床型乳房炎奶牛乳样中体细胞数和血清淀粉样蛋白A含量,治愈率和有效率分别为69.2%、23.1%,总有效率92.3%,治疗效果显著,与市售商品复方阿莫西林乳房注入剂相比无显著差异。本研究为中草药制剂对奶牛临床型乳房炎的治疗提供了参考。

温岭草鸡体尺和屠宰性能测定及相关性分析

温岭草鸡是浙江省优质地方品种,具有肉质好、口感佳等特点。本研究随机选择300日龄温岭草鸡公母各15只,进行体尺和屠宰性能测定并作相关性分析。结果显示,温岭草鸡胸深较大,体形紧凑,屠宰性能较好。胫围与屠宰指标相关程度高,除腹脂质量外,体尺与屠宰指标间均存在显著相关。

紫花地丁对热应激下肉鸡生长性能、肉品质和肠道菌群的改善作用

旨在评估紫花地丁(Viola yedoensis Makino,VYM)对热应激下AA肉鸡生长性能、肉品质和肠道菌群的改善作用。将60只1日龄雄性AA肉鸡随机分为6个组,分别为:对照组(NT组),高剂量紫花地丁组(NT+VYM-H组);热应激组(HS组),低、中、高剂量紫花地丁热应激组(HS+VYM-L、HS+VYM-M和HS+VYM-H组,紫花地丁添加量分别为0.5%、1.5%、4.5%),2~42 d,热应激组肉鸡暴露于高温中,紫花地丁组全程饲喂添加相应剂量紫花地丁的日粮。所有肉鸡均在42日龄时屠宰,对生长性能、血清生化指标、肉品质、十二指肠形态、酶活性相关基因表达水平以及肠道菌群组成等进行检测。结果显示,在热应激条件下,与热应激组相比,1.5%紫花地丁组肉鸡29~42 d平均日增重显著升高,料重比显著降低(P<0.05);热应激条件下,添加紫花地丁显著降低肉鸡35 d血清HSP70水平(P<0.05),添加0.5%紫花地丁显著提高十二指肠脂肪酶活性(P<0.05),与肉鸡胸肌生肌因子相关的Pax3、Pax7、Myog、Myod、Myf5 mRNA表达显著上调(P<0.05),与十二指肠消化吸收功能相关的Pparα、Fatp1、B^(0)at1、Pept1、Cat1、Eaat3 mRNA表达显著上调(P<0.05);在热应激条件下,添加1.5%的紫花地丁显著降低了肉鸡的肌肉剪切力、肉色(P<0.05);盲肠中,紫花地丁显著提高了肠道菌群的丰富度和多样性(P<0.05),在门水平上,增加了拟杆菌门的丰度,且与肌肉pH(45 min)呈显著正相关;属水平上,降低了Subdoligranulum属丰度,且与十二指肠淀粉酶活性呈显著负相关。综上,在本试验条件下,日粮中补充1.5%和4.5%紫花地丁可有效减轻热应激导致的肉鸡生长性能和肉品质的降低,并能够调节其肠道菌群的平衡。本研究为紫花地丁在肉鸡生产中的应用提供了科学依据,对家禽养殖临床中热应激的防治具有参考意义。

高职教育《宠物内科病》模块化教学实践应用研究

模块化教学以能力培养为目标,是目前职业教育普遍采用的教学方法,对促进高等职业教育高质量发展有深远的意义。《宠物内科病》是宠物养护与驯导专业的核心课程,通过对宠物内科病的模块化教学的实践性应用探索,依托国家级教学资源库、一体化教学平台、教学宠物医院,提升学生疾病诊治能力,强化岗位素养,模块化教学实施后取得良好的效果,为后续宠物专业相关课程教学改革提供支撑。

猪肺炎支原体通过抑制SPLUNC1功能破坏呼吸道炎性反应平衡

【背景】猪肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae,Mhp)通过定植猪呼吸道黏膜层,破坏呼吸道炎性反应平衡,引起炎性损伤和持续性感染。短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1蛋白(short palate lung and nasal epithelial clone1,SPLUNC1)是呼吸道黏膜分泌的具有重要抗菌和抗炎功能的蛋白,被认为是呼吸道黏膜面对危险信号时的“信号传感器”。【目的】从Mhp和SPLUNC1相互作用入手,分析Mhp感染对SPLUNC1表达的影响以及SPLUNC1对Mhp引起的炎性反应的调控作用,揭示Mhp引起炎性损伤的新机制,为解决Mhp持续性感染问题提供参考。【方法】利用猪肺炎支原体对猪支气管上皮细胞(porcine bronchial epithelial cells,PBECs)感染模型和猪体感染模型,通过荧光定量PCR、间接免疫荧光和Western-blotting等方法,分别检测Mhp感染后对肺脏中SPLUNC1以及体外PBECs中SPLUNC1转录和表达的影响。克隆并扩增猪源SPLUNC1基因通过酶切鉴定,构建成功SPLUNC1真核和原核表达重组质粒pCDNA3.1-SPLUNC1以及pET28a-SPLUNC1。与此同时,设计靶向SPLUNC1的siRNA干扰片段。利用体外SPLUNC1蛋白孵育、体内呼吸道黏膜SPLUNC1抗体封闭,通过Mhp CCU50检测明确SPLUNC1对Mhp体内外生长的影响。在猪支气管上皮细胞中,通过过表达或siRNA干扰SPLUNC1基因,后感染Mhp,利用Western-blotting、间接免疫荧光以及酶联免疫吸附方法,明确SPLUNC1对Mhp的黏附作用、诱导炎性因子表达以及MAPK信号通路活化的影响。【结果】Mhp感染猪后可引起肺脏实变,主要组织病理表现为肺脏炎性损伤,同时显著上调肺泡灌洗液中趋化因子CXCL8和炎性因子TNFα和IL-1β分泌。Mhp体内外感染后,体内肺脏和体外猪支气管上皮细胞中SPLUNC1的转录和表达均显著下调。以上研究表明,Mhp可诱导肺脏炎性反应,抑制SPLUNC1表达。另一方面,体外PBECs中过表达SPLUNC1后,Mhp感染引起的CXCL8表达显著减少;siRNA干扰SPLUNC1后,Mhp感染引起的CXCL8表达显著增加,表明SPLUNC1负调控Mhp感染引起的CXCL8表达。基于Mhp感染入侵呼吸道过程,本研究进一步解析SPLUNC1负调控CXCL8表达的机制。结果表明:无论是SPLUNC1和Mhp体外孵育,还是SPLUNC1抗体体内封闭,Mhp的体内外生长均未受影响;SPLUNC1的过表达或siRNA干扰对Mhp体外黏附PBECs的能力也无显著影响;过表达SPLUNC1可抑制pERK和IκBα的激活,相反SPLUNC1 siRNA干扰后,可促进pERK和IκBα的激活。以上研究证明SPLUNC1不是通过调控Mhp的生长和黏附,而是通过负调控MAPK-ERK通路的活化来调控CXCL8的表达。【结论】SPLUNC1可通过MAPK-ERK信号通路来调控炎性因子的过度表达,维护宿主炎性平衡;与此同时,Mhp感染后可通过抑制SPLUNC1的表达来破坏宿主炎性反应的平衡调控,进而引起炎性损伤。本研究为解析Mhp感染损伤机制提供依据。

柔嫩艾美耳球虫感染鸡盲肠内容物非靶向代谢组学分析

【目的】基于非靶向代谢组学探究感染柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)后鸡盲肠内容物中代谢物的变化差异,为识别和鉴定鸡球虫病潜在的生物标志物及治疗靶点提供参考依据。【方法】将60羽健康罗曼粉鸡随机分为正常组和模型组,每组30羽,模型组经口灌服柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊(1×104个/羽),正常组经口灌服等体积生理盐水,连续灌服5 d,然后解剖试验鸡,无菌采集鸡盲肠内容物,基于非靶向代谢组学分析正常组和模型组鸡盲肠内容物,筛选出显著差异代谢物进行KEEG代谢通路富集分析。【结果】从模型组与正常组的鸡盲肠内容物中共筛选到253种显著差异代谢物,其中,上调表达的显著差异代谢物有184种,包含L-酪氨酸、L-蛋氨酸、L-谷氨酰胺、牛磺酸、花生四烯酸、二十二碳六烯酸乙酯、胆碱和磷酸胆碱等;下调表达的显著差异代谢物有69种,包括脱氧腺苷、L-缬氨酸、N-(5-氨基戊基)乙酰胺和N-乙酰-L-谷氨酸等。正离子模式下,主要有牛磺酸、磷酸胆碱、甜菜碱、L-亮氨酸、L-谷氨酰胺、胆碱、神经鞘氨醇和L-色氨酸等20种代谢物上调表达;负离子模式下,主要有花生四烯酸、牛磺酸、L-苯丙氨酸、L-亮氨酸、琥珀酸、黄嘌呤、尿嘧啶和L-谷氨酰胺等20种代谢物上调表达。鸡盲肠内容物显著差异代谢物主要被富集到ABC转运蛋白、氨酰tRNA生物合成、赖氨酸降解、嘧啶代谢、嘌呤代谢、不饱和脂肪酸生物合成等20条KEEG代谢通路上。【结论】柔嫩艾美耳球虫感染后鸡盲肠代谢物发生显著变化,主要影响ABC转运蛋白、氨酰tRNA生物合成、氨基酸代谢、嘧啶代谢和嘌呤代谢等代谢通路。因此,牛磺酸、磷酸胆碱、L-谷氨酰胺、花生四烯酸等显著差异代谢物可作为潜在的生物标志物,用于鸡球虫病诊断检测。

我国猪瘟流行现状及净化之路

猪瘟(Classical swine fever,CSF)在全球多个地区仍在流行,对养猪业带来巨大打击和经济损失。当前我国猪瘟防控程度较好,疫情态势平稳,偶有散发,但猪瘟的存在不利于健康养殖,影响猪肉市场及品质,因此有必要开展猪瘟净化工作。随着养猪产业不断升级,小散户逐渐退出市场,猪瘟监测技术成熟完善以及政府大力推动动物疫病净化,开展猪瘟净化时机日趋成熟,但猪瘟净化面临着非典型猪瘟、混合感染、免疫失败、动物移动等问题和挑战。本文将从我国猪瘟流行态势与防控现状,猪瘟净化的必要性与策略、面临的问题与挑战以及借鉴欧美猪瘟净化经验,采取猪瘟净化措施手段等方面进行阐述,以期为我国猪瘟净化提供理论帮助。

湖羊感染羊源性伪狂犬病病毒致病特征的研究

为探讨羊源性伪狂犬病病毒分离株SH1407对湖羊的致病性。将7只健康湖羊随机分成试验组和对照组,其中试验组5只,对照组2只。用分离株SH1407对试验组湖羊进行人工攻毒,取发病死亡羊内脏组织用于组织病理学检查和免疫组化分析。湖羊在攻毒后3 d开始出现症状,第4 d症状进一步加剧,表现为局部奇痒、体温升高、精神沉郁、食欲废绝等症状,4只发病死亡,存活1只,死亡率达到80%。剖检主要表现为脑膜充血,肺淤血,轻度实变。病理组织学检查:大脑、延髓神经元变性,细胞核溶解、消失,呈病理性细胞凋亡;肺脏呈间质性肺炎病变;脾脏、肾脏出血。免疫组化染色显示,PRV在肝脏、肺脏、大脑、脾脏等组织器官广泛存在,病毒在肝脏中主要存在于库弗氏细胞中,在肺脏中主要存在于Ⅱ型肺泡细胞中,在脾脏中主要存在于巨噬细胞、单核细胞中,而在脑组织中,神经元呈现较强的信号,说明病毒主要存在于神经细胞中。实时荧光定量PCR测定内脏器官病毒载量,肝脏、脾脏、肺脏和脑组织中PRV大量增值,其中PRV在脑组织中大量增值导致中枢神经严重的病理改变。

1株鸡源坦布苏病毒的分离鉴定及致病性研究

为了查明湖北省某种鸡场发病鸡的病原并了解其遗传进化特征及致病性,试验首先提取发病鸡的卵泡和脾脏组织样本核酸,分别对坦布苏病毒、鸡传染性支气管炎病毒、新城疫病毒、禽流感病毒、减蛋综合征病毒和滑液囊支原体6种病原体进行检测,然后对检出的病原体进行分离培养、效价测定、遗传进化分析、中和试验和致病性试验(产蛋鸡、鸭胚和产蛋鸭)。结果表明:病料中仅坦布苏病毒核酸检测结果为阳性,新城疫病毒、禽流感病毒、减蛋综合征病毒、鸡传染性支气管炎病毒和滑液囊支原体5种病原核酸检测结果均为阴性,确定病原为坦布苏病毒。经病毒的分离培养与RT-PCR扩增后确定分离到1株坦布苏病毒,将该毒株命名为坦布苏病毒HuB株,连续传代3次获得的病毒液效价为1×10^(7.0)TCID_(50)/mL。坦布苏病毒HuB株E基因与近年来流行的坦布苏病毒参考株E基因的序列相似性为86.5%~99.8%,其中与中国鸡源参考株(GX2021和CTLN)、中国蚊源参考株(YN2020)和泰国鸭源参考株(CU56)的亲缘关系较近。坦布苏病毒HuB株能被坦布苏病毒阳性血清完全中和。接种坦布苏病毒HuB株的产蛋鸡主要表现为采食量、产蛋量明显下降,卵泡变性、液化和出血,部分鸡只表现为卵泡萎缩、腹腔中有少量干酪样物;接种坦布苏病毒HuB株的鸭胚于攻毒后96小时内全部死亡(10/10),死亡鸭胚主要表现为体表发红、出血,羽毛发育迟缓,肝脏出血、呈斑驳样;接种坦布苏病毒HuB株的产蛋鸭主要表现为停止产蛋,卵泡出血、变性、萎缩。说明成功从该种鸡场发病鸡病料中分离到1株坦布苏病毒,该毒株可能由泰国鸭源毒株变异而来,且该毒株对鸭胚有致死性,对产蛋鸭的致病性较产蛋鸡更高。

猪肺炎支原体LAP的结构预测及其抑制剂Bestatin对支原体生长的影响

本研究旨在以猪肺炎支原体为代表,研究支原体LAP酶活中心的高级结构及其被抑制后对支原生长的影响。亮氨酸氨肽酶(LAP)是一类广泛存在于各类生物的氨基酸代谢酶,有研究表明病原微生物的LAP酶活中心被抑制后可以直接影响微生物的代谢和生长。本研究拟以猪肺炎支原体(Mhp)LAP为模型,研究其理化特性和高级结构,探索LAP抑制剂乌苯美司(Bestatin)对支原体生长的影响。本研究首先用Clustal Omega进行序列同源性比较,分析LAP活性位点在不同支原体中的保守情况。然后采用GST融合标签表达猪肺炎支原体LAP蛋白,通过GST亲和层析和分子筛层析纯化蛋白,圆二色谱测定LAP的二级结构,用Alpha fold 2预测三级结构。最后用Bestatin与猪、鸡、羊等不同种属的支原体共培养来观察其影响。结果表明虽然总体序列同源性不高,但是LAP酶活中心的关键位点在常见支原体相对保守。猪肺炎支原体LAP可以通过GST标签进行可溶性表达。酶切GST标签后,分子筛层析显示LAP是六聚体,圆二色谱表明LAP具有正确的二级结构。预测的LAP三级结构显示其具有保守的底物结合关键位点。Bestatin对不同种属支原体的生长均产生抑制,且呈现剂量依赖性,但在不同菌株间存在差异,最低在6μg/mL的浓度可通过抑制氨肽酶的活性抑制猪肺炎支原体的生长。该研究为新一代抗菌药物的研发提供了新的思路。

鸭疫里默氏菌噬菌体宿主谱的拓宽

为建立一种拓宽鸭疫里默氏菌噬菌体噬菌谱的方法,将6株噬菌体混合液分别与6株宿主菌、18株多重耐药鸭疫里默氏菌(不能被6株噬菌体中的任何1株裂解)培养,收获培养液中的噬菌体,混合后同样进行30次传代。噬斑分析法测定30代混合液及混合液中单一噬菌体的噬菌谱。结果表明,30代噬菌体混合液可裂解79.2%(19/24)的鸭疫里默氏菌试验菌株;30代噬菌体混合液中分离出的单一噬菌体能裂解的试验菌株数量为2~9株;裂解数最多的5株单一噬菌体,以各自宿主菌传代10次,噬菌谱没有发生变化;将裂解谱互补的单一噬菌体混合,4株噬菌体即可裂解19株试验菌株,与30代噬菌体混合液相同。说明建立的方法可以拓宽噬菌体混合液、单一噬菌体的噬菌谱,为噬菌体鸡尾酒制剂的毒株选择奠定了基础。

5种猪源消化道传播病原体荧光定量PCR检测方法的建立

猪源人兽共患病不仅威胁公共卫生安全,还威胁生猪养殖业的健康发展;其中消化道传播是其主要的传播途径。为及时鉴定出经消化道传播的病原体,本试验建立了猪源大肠杆菌、沙门菌、单增李斯特菌和志贺菌的四重荧光定量PCR和戊型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法,并优化反应体系和条件,实现5种病原体的同时检测;并利用荧光定量PCR与普通PCR对117份猪临床样品(病变组织、粪便和肌肉等)进行对比检测。结果显示,建立的荧光定量PCR能够在1.5 h内完成对大肠杆菌、沙门菌、单增李斯特菌、志贺菌和戊型肝炎病毒5种病原体的特异性检测,与其他常见细菌和病毒无交叉反应,检测极限值可达5个拷贝,标准曲线相关系数均不低于0.997,线性范围涵盖1×10^(1)~1×10^(9),批内和批间变异系数(CV)均低于3.16%。建立的荧光定量PCR与普通PCR方法检测结果的符合率达到95.73%~100%,具有较好的一致性。117份临床样品中大肠杆菌、沙门菌、单增李斯特菌、志贺菌和戊型肝炎病毒各自的阳性率分别为31.62%、17.95%、6.84%、5.13%和11.11%。结果表明,本试验所建立的荧光定量PCR方法灵敏、特异、稳定,能够同时、快速区分检测上述5种猪源消化道传播病原体,可为猪肉制品从产地到餐桌全环节样品的监测提供有力的技术支持。

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的真核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

为建立检测牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体的间接ELISA方法,利用昆虫细胞真核表达系统成功表达E2蛋白,将纯化后的E2蛋白作为包被抗原,用方阵滴定方法对影响ELISA的各个因素进行优化,并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果表明,在昆虫细胞中表达了BVDV E2蛋白,Western blot证实目的蛋白可与BVDV阳性血清发生特异性反应。ELISA优化结果显示,E2蛋白最佳包被浓度为0.5μg/mL,最佳封闭液为1%明胶,最佳血清稀释度为1∶400,最佳血清作用方式为37℃作用30 min,酶标抗体的最佳作用方式为1∶2000稀释、37℃作用30 min,最佳底物作用时间为室温20 min,阳性临界值为OD 450≥0.423。与血清中和试验法进行比较,总符合率为97.8%,板内和板间重复性试验的变异系数均小于10%。该方法与牛常见病毒阳性血清均无交叉反应。说明建立的间接ELISA抗体检测方法特异性、敏感性和重复性良好,可用于大批量样本的临床检测和流行病学研究。

鸡产蛋下降综合征病毒间接免疫荧光检测方法的建立及应用

为建立检测鸡产蛋下降综合征病毒(EDSV)的间接免疫荧光方法,并对该检测方法的各个步骤进行优化,以鸡产蛋下降综合征病毒多抗血清和FITC标记的兔抗鸡IgG为组合,对一抗和二抗的最适工作浓度和孵育时间进行了优化,对IFA方法进行了敏感性、特异性和重复性试验。结果表明,检测接种EDSV的96孔细胞培养板时,多抗血清的最适工作浓度为1∶320,孵育时间为45 min;FITC标记的兔抗鸡IgG的最适工作浓度为1∶200,孵育时间为30 min;病毒敏感性试验表明,该方法可以检测到10-2 TCID 50/mL的病毒;多抗血清敏感度试验表明,当多抗血清稀释到1∶1280时仍可见较明显的特异性荧光;特异性试验表明,该方法只针对EDSV,而不与禽副流感病毒4型、鸡新城疫病毒等其他病原反应;批内重复性试验和批间重复性试验结果表明,该方法具有较好的重复性和可靠性。结果表明,建立的间接免疫荧光方法具有较高的灵敏度和较好的稳定性,可为我国禽源性生物材料EDSV的检测提供技术支持,有巨大的市场需求。

mdv1-miR-M4-5p对MDCC-MSB1细胞增殖和凋亡的影响

旨在研究马立克病病毒(Marek′s disease virus,MDV)编码的mdv1-miR-M4-5p对MDCC-MSB1细胞增殖和凋亡的影响,将mdv1-miR-M4-5p模拟物、抑制物及其阴性对照转染MDCC-MSB1细胞后48 h,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中mdv1-miR-M4-5p、TGF-β1、Smad2以及caspase-9、caspase-3、cyt-c、cyclinD1、Bcl-2等增殖和凋亡相关分子的转录;CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果显示:与对照组相比,mdv1-miR-M4-5p模拟物转染显著上调MDCC-MSB1细胞中mdv1-miR-M4-5p、cyclinD1、Bcl-2的转录水平,下调TGF-β1、Smad2、cyt-c、caspase-9和caspase-3的表达转录,促进细胞的增殖,减少G1期细胞,增加S和G2细胞,降低细胞凋亡率。与对照组相比,mdv1-miR-M4-5p抑制物转染后MDCC-MSB1细胞的增殖、凋亡及其相关分子转录的结果与mdv1-miR-M4-5p模拟物转染后的结果相反。综上,Mdv1-miR-M4-5p可促进MDCC-MSB1细胞增殖,抑制其凋亡,这可能是通过抑制TGF-β1/Smad2信号通路来实现的。

应用mNGS技术快速检测小熊猫感染病原体

为了明确杭州某动物园内1只小熊猫伤口感染原因,本试验采用基于下一代测序技术的宏基因组测序(mNGS)技术对伤口分泌物进行检测,并同步进行常规微生物培养和药物敏感性试验。结果显示,mNGS检测出肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌等细菌以及真菌石膏样奈尼兹皮菌,同时还检测到头孢菌素耐药基因blaOXA和blaCTX-M。根据mNGS检测结果更改抗生素用药方案,用阿米卡星和氟康唑代替之前的头孢曲松进行治疗。调整用药后,小熊猫伤口愈合,细菌和真菌感染状况得到控制。相比之下,常规微生物培养分别于第3天和第7天得出细菌(肺炎克雷伯菌)和真菌(石膏样奈尼兹皮菌)培养结果,药物敏感性试验结果显示,分离的肺炎克雷伯菌对头孢菌素类耐药。2种方法检测结果基本一致。结果表明,mNGS技术可快速实现感染病原体的诊断,在野生动物感染的诊断和治疗中有较为广阔的应用前景。

2013-2020年广西重点种鸡场禽白血病净化效果分析

按照检测-淘汰-分群-再检测-再淘汰的原则,建立“生物安全+病原监测+淘汰”模式对2013—2020年广西11家重点种鸡场的种公鸡、种母鸡、育成鸡和雏鸡采集精液、蛋清、泄殖腔拭子、胎粪等样品进行禽白血病病原检测;公鸡和母鸡同时采集血浆蛋白进行禽白血病病毒(ALV)分离。通过多方式联合净化禽白血病,ALV阳性率逐年下降,净化效果非常显著。其中公鸡精液中ALV阳性率由2013年的7.45%下降到2020年的0.14%,母鸡蛋清样本ALV阳性率由2013年12.32%下降到2020年0.23%,雏鸡胎粪ALV阳性率由2018年3.60%下降到2020年0.47%。公鸡血浆蛋白病毒检出率由2013年的3.46%下降到2020年的0.78%,母鸡血浆蛋白病毒检出率由2013年的2.22%下降到2020年的0.20%。可以看出ALV净化效果非常显著,说明所建立的禽白血病净化方法在广西行之有效。

参姜止痢合剂治疗仔猪黄痢的临床疗效评价

为验证参姜止痢合剂治疗仔猪黄痢的临床疗效,从兰州周边养猪场搜集疑似病例,经流行病学调查、临床症状观察作出初步诊断,通过实验室细菌学检查进行确诊后,采用参姜止痢合剂进行治疗,观察给药后病猪精神状态、饮食和腹泻情况,采用普通血平板培养基和大肠杆菌显色培养基测定给药前后仔猪粪便中大肠杆菌的数量。结果显示,用药治疗后的仔猪精神状态明显好转或恢复正常,病猪粪便中大肠杆菌数量明显减少,3个养猪场(景泰县王德香养猪场、甘肃蟾慕农业科技有限责任公司和永登县苗中俊养猪场)的黄痢治愈率分别为87.6%、89.1%和84.1%。结果提示,参姜止痢合剂治疗仔猪黄痢效果较好,为今后研发新药提供了试验依据。