新疆维吾尔自治区塔额垦区牛源大肠杆菌耐药性、CTX-M基因携带情况与毒力基因检测

[目的]了解新疆维吾尔自治区塔额垦区牛源大肠杆菌耐药性及CTX-M基因和毒力基因携带情况。[方法]从塔额垦区某牛场采集16份牛腹泻粪样,通过选择性培养、革兰染色镜检、16S rDNA PCR扩增及测序进行大肠杆菌分离鉴定。利用PCR法对牛源大肠杆菌分离株进行分子分型(系统发育群和脂多糖核心型)以及耐药基因、CTX-M基因亚型、毒力基因检测;分别使用K-B纸片法、CTX与TCL双纸片法进行药物敏感性试验和产ESBLs大肠杆菌鉴定;采用结晶紫染色法半定量检测菌株的生物被膜形成能力。[结果]根据菌落生长特征、革兰染色特性及16S rDNA测序结果,从16份牛腹泻粪样中分离鉴定出16株大肠杆菌,分离率为100%;系统发育群主要为B1群(14/16,87.50%),脂多糖核心型多为R1型(15/16,93.75%)。分离菌株对青霉素、利福平、复方新诺明表现出较强耐药性,耐药率分别为100%、68.75%、68.75%;对多黏菌素、替加环素、美罗培南敏感,耐药率均为0;有12株(75.00%)具有多重耐药表型;有11株(68.75%)产ESBLs;有15株(93.75%)可形成生物被膜。16株大肠杆菌中共检出17种耐药基因,CTX-M、ant(6′)、sul1等8种耐药基因的检出率为100%;有14株(87.50%)为CTX-M-1G基因亚型;共检出12种毒力基因,iroN、ompA、yijP等5种毒力基因的检出率为100%。[结论]新疆维吾尔自治区塔额垦区牛源大肠杆菌CTX-M基因检出率较高,携带多种耐药基因和毒力基因,耐药性较强,对该地区牛健康养殖存在潜在威胁,应加强该地区CTX-M型大肠杆菌的流行情况监控。

复合植物提取物对奶牛瘤胃细菌菌群的影响

[目的]研究饲粮中添加蒲公英、益母草、金银花和连翘4种植物的乙醇提取物对泌乳期荷斯坦奶牛瘤胃细菌菌群的影响。[方法]采用完全随机试验设计,将24头泌乳期荷斯坦奶牛随机分为对照组和试验组,每组12头。对照组饲喂基础饲粮,试验组饲喂基础饲粮+0.3%/(头·d)复合植物提取物。试验期共75 d,预试期15 d,正试期60 d。于试验正式期第60天通过口腔采集奶牛瘤胃液,提取瘤胃液样品总DNA,利用16S rDNA序列分析技术研究饲粮中添加复合植物提取物对奶牛瘤胃细菌菌群的影响。[结果]对照组与试验组的瘤胃微生物在OTU水平上可相互分离。试验组奶牛瘤胃细菌的α多样性指数与对照组差异不显著(P>0.05)。添加复合植物提取物改变奶牛瘤胃中17个细菌菌门相对丰度,但试验组与对照组差异不显著(P>0.05);在门水平上,2组的拟杆菌门(Bacteroidetes)和厚壁菌门(Firmicutes)在总菌群中占比最高;在属水平上,试验组瘤胃细菌相对丰度与对照组差异不显著(P>0.05),2组优势菌属均为普雷沃菌属1(Prevotella 1)。通过LEFse分析发现,与对照组相比,试验组奶牛瘤胃中的拟杆菌目(Bacteroidales)相对丰度显著(P<0.05)降低,而双歧杆菌科(Bifidobacteriaceae)的相对丰度显著(P<0.05)增加。[结论]在泌乳期奶牛饲粮中添加0.3%的蒲公英、益母草、金银花和连翘复合提取物具有调节瘤胃菌群的作用。

中药治疗奶牛乳房炎的系统评价与Meta分析

【目的】利用Meta分析方法对已发表的中药治疗奶牛乳房炎临床试验研究进行系统评价,为防治奶牛乳房炎提供更有价值的参考依据。【方法】通过计算机检索中国知网(CNKI)和万方数据库,检索时限均为从建库起至2015年4月,全面收集中药治疗奶牛乳房炎的临床试验研究。按照Cochrane方法纳入文献,采用Rev Man 5.3软件进行Meta分析。【结果】共纳入26篇文献,3419头患病牛,其中试验组2481例,对照组938例,试验组均采用中药治疗,对照组采用青链霉素治疗。复方中药治疗牛乳房炎的总治愈率显著高于青链霉素对照组[OR=2.03,95%CI(1.56,2.63),P<0.05],总有效率显著高于青链霉素对照组[OR=2.25,95%CI(1.57,3.22),P<0.05],乳区总治愈率高于青链霉素对照组[OR=1.54,95%CI(1.43,1.66),P<0.05],乳区总有效率极显著高于青链霉素对照组[OR=1.20,95%CI(1.15,1.26),P<0.01]。发表偏倚分析结果显示,所纳入文献存在一定的发表偏倚性。【结论】复方中药对奶牛乳房炎的疗效显著优于青链霉素,即奶牛乳房炎的中药防治研究存在重要潜力。

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)对牛免疫缺陷病毒(BIV)的激活作用

通过合胞体分析和反转录酶活力测定，首次证明牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）能激活牛免疫缺陷病毒（ＢＩＶ）的复制与表达，并进一步通过转染实验和凝胶电泳漂移分析证明，当ＢＩＶＬＴＲ的ＮＦ－κＢ区缺失时，ＢＶＤＶ则不能实现其激活作用，ＢＶＤＶ直接或间接诱导牛ＮＦ－κＢ因子作用于ＢＩＶＬＴＲ的ＮＦ－κＢ区实现其激活作用。

我国部分地区肉用牛群衣原体病的血清学调查

:19971998年从山东、河北、河南、陕西、宁夏、甘肃、青海和四川等 8省 (区 )部分地区采集肉用牛、肉役兼用黄牛及牦牛血清样品 64 2份 ,用间接血凝试验检测衣原体抗体。结果 :肉用牛平均阳性检出率为 3 2 .6%( 13 .6%72 .7%) ;牦牛为18.7%( 10 .0 %2 5 .6%) ;肉役兼用黄牛为 15 .2 %( 9.5 %16.8%)。

吉林省黄牛“猝死症”的病因学研究

１９９４年以来，对吉林省黄牛“猝死症”的病因进行了多方面的研究，包括细菌学检验、病毒学检验、人工感染试验、毒物检验、牛毛硒元素分析及病尸病理形态学观察。结果表明，Ａ型魏氏梭菌是主要病原菌，其他细菌有协同作用；牛冠状病毒或粘膜病病毒感染。

奶牛隐性乳房炎乳房链球菌巢式PCR检测方法的建立

为研究巢式PCR检测奶牛隐性乳房炎链球菌的灵敏度,以本实验室从新鲜奶样中分离并经过生理生化鉴定的乳房链球菌、无乳链球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌为研究对象,提取细菌DNA,采用巢式PCR技术,根据细菌16S rRNA序列保守区设计通用引物进行第1次PCR扩增,再在乳房链球菌16S rRNA保守区内的可变区设计特异引物对4种病原菌进行第2次PCR检测。结果表明:巢式PCR技术能检测出乳房链球菌16S rRNA保守区的可变区序列,与生理生化鉴定结果一致。该方法能快速有效检测出奶牛隐性乳房炎乳房链球菌。

四川攀西地区牛传染性鼻气管炎血清学调查

牛传染性鼻气管炎（IBR）亦称坏死性鼻炎,是由牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）引起牛的一种热性、急性、接触性传染病,临床主要表现以高热、上呼吸道及气管黏膜炎、呼吸困难、流鼻液等为特征,还可引起传染性外阴阴道炎、龟头炎、乳腺炎、流产、结膜炎、脑膜脑炎等。世界动物卫生组织（OIE）将其列为法定报告传染病,其危害性在于IBRV感染牛体后可侵染多个部位,导致持续性感染、免疫抑制,造成牛群大范围感染,给IBR防控和根除造成极大困难。

不同程度隐性乳房炎奶牛乳清中结合珠蛋白的变化

为研究奶牛隐性乳房炎发病程度与乳清中结合珠蛋白(HP)含量变化的关系,选取6头健康奶牛和18头患轻、中、重度隐性乳房炎奶牛为试验动物,采集乳样、分离乳清,利用HP ELISA检测试剂盒测定样品中HP含量。结果发现,随着隐性乳房炎病情加重、乳汁体细胞数的增加,乳清中HP含量逐渐升高,与健康对照组比较升高极显著(P<0.01)。结果表明,乳清中HP含量变化与隐性乳房炎发病具有一定相关性,乳腺损伤程度和乳汁体细胞数与乳清中HP含量呈正相关。

从乳用犊牛和水牛中分离出伪狂犬病毒

武汉市郊区某奶牛场病死犊牛和我校兽医院住院部一头病死成年水牛,临床症状怀疑为牛伪狂犬病。采取死亡动物的脑组织分离病毒。将病料处理后接种到猪肾传代细胞IBRS—2,出现典型细胞病变,电镜观察到典型的伪狂犬病毒粒子,经抗伪狂犬病毒单克隆抗体免疫荧光染色确定其分离物为伪狂犬病毒。

6株牛传染性鼻气管炎病毒BICP4基因序列的同源性分析

牛传染性鼻气管炎病毒的立即早期启动基因IER4 .2编码感染细胞蛋白BICP4基因。各种疱疹病毒的BICP4基因的Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ区变异性较大 ,并为其特征区。为了比较分离自不同牛种、不同部位的 5种病毒株BICP4蛋白I区基因的差异性 ,本文根据已发表的IBRVK2 2毒株重复序列IRs中BICP4的基因序列设计了一对特异性引物 ,对各毒株进行PCR扩增 ,均得到约 5 4 0bp的片段 ,将其克隆、测序并连同K2 2株进行同源性比较。结果表明 ,6株病毒的核苷酸序列及氨基酸序列同源性均在 98%以上 ,说明这些毒株重复序列中的早期基因高度保守 。

瘤胃微生物区系的研究进展

反刍动物瘤胃是一个生态系统,其中的瘤胃微生物与宿主之间、微生物与微生物之间处于一种既协同又制约的动态平衡关系。笔者对微生物的特点、作用、微生物间的相互作用以及用分子生物学方法对瘤胃微生物的研究进展作一综述。

山东地区牛传染性鼻气管炎病毒的分离鉴定

从山东某地区发生呼吸道症状的奶牛场中采集样品,按常规方法处理后,接种牛肾细胞(MD-BK),分离病毒,盲传3代后,接种病料的MDBK细胞出现细胞圆缩、聚集成葡萄串样群落、在单层细胞上形成空洞等病变,且随着传代次数的增加,细胞病变更加规律。对所分离病毒进行TCID50测定,其TCID50值为108/ml;用IBRV特异性引物对分离病毒进行PCR扩增,获得与设计基因片段大小一致的特异性条带,序列测定分析结果确认所分离病毒为牛传染性鼻气管炎病毒。

壳聚糖对奶牛乳房炎病原菌的体外抑菌试验

将2g壳聚糖加入一定量的蒸溜水和乙酸配成2%(20g/L)的壳聚糖原液,再用蒸馏水稀释至10g/L、5g/L、2.5g/L、1.25g/L和0.625g/L,同时以相应浓度醋酸溶液作为对照,然后用圆纸片扩散试验对奶牛无乳链球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌进行体外抑菌试验。结果表明:壳聚糖对上述4种细菌的生长均有不同程度的抑制作用,且随着壳聚糖浓度的降低,对细菌生长繁殖的抑制作用相应减弱。

南宁市某规模化牛场牛病毒性腹泻病毒、大肠杆菌和志贺氏菌混合感染的诊断

牛病毒性腹泻/黏膜病(BVD/MD)是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)引起,主要表现为腹泻、高热、妊娠母牛流产、死胎及呼吸道等症状,严重者可导致死亡[1~3]。BVDV以腹泻及整个消化道黏膜糜烂、坏死或溃疡为特征性病变,该病又被称为黏膜病[4]。BVDV属于黄病毒科中瘟病毒属,单股正链RNA。该病可引起免疫抑制,降低免疫细胞清除血液中病原体的能力和阻碍机体干扰素的形成,进而有助于牛肠道病毒(BEV)、牛轮状病毒(BRoV)、大肠杆菌、沙门氏菌等嗜肺性病原体和肠道病原体的混合感染,加重病情,死亡率增高[4~5]。BVDV感染率低,死亡率高,死亡率高达90%~100%。

牛传染性鼻气管炎的危害和防检对策

牛传染性鼻气管炎（Infectious Bovine Rhinotracheitis，IBR），是由牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）感染家养牛和野生牛引起的一种病毒性传染病。

朊病毒病及朊病毒的研究进展(一)

简要介绍了朊病毒病的基本特征、疾病谱、新发现的几种朊病毒病（ 致死性家族性失眠症、牛海绵状脑病、新型克雅二氏病等） 及朊病毒病的诊断和防治方法；详细阐述了朊病毒的基本概念、异常特性、支持朊病毒假说的证据及有待研究解决的问题等。

SYBR Green I实时荧光定量PCR检测牛传染性鼻气管炎病毒

本研究根据牛传染性鼻气管炎病毒毒(IBRV)gB基因序列设计合成了引物,PCR扩增得到目的基因片段并克隆到PGM-T载体得到质粒标准品。通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了SYBR Green I荧光定量PCR检测IBRV的方法。该方法的检测敏感性达到360copies/25μL,并具有较好的重复性和特异性。本试验方法的建立对于加强进出口牛IBRV的检验检疫具有十分重要的意义。