新疆维吾尔自治区塔额垦区牛源大肠杆菌耐药性、CTX-M基因携带情况与毒力基因检测

[目的]了解新疆维吾尔自治区塔额垦区牛源大肠杆菌耐药性及CTX-M基因和毒力基因携带情况。[方法]从塔额垦区某牛场采集16份牛腹泻粪样,通过选择性培养、革兰染色镜检、16S rDNA PCR扩增及测序进行大肠杆菌分离鉴定。利用PCR法对牛源大肠杆菌分离株进行分子分型(系统发育群和脂多糖核心型)以及耐药基因、CTX-M基因亚型、毒力基因检测;分别使用K-B纸片法、CTX与TCL双纸片法进行药物敏感性试验和产ESBLs大肠杆菌鉴定;采用结晶紫染色法半定量检测菌株的生物被膜形成能力。[结果]根据菌落生长特征、革兰染色特性及16S rDNA测序结果,从16份牛腹泻粪样中分离鉴定出16株大肠杆菌,分离率为100%;系统发育群主要为B1群(14/16,87.50%),脂多糖核心型多为R1型(15/16,93.75%)。分离菌株对青霉素、利福平、复方新诺明表现出较强耐药性,耐药率分别为100%、68.75%、68.75%;对多黏菌素、替加环素、美罗培南敏感,耐药率均为0;有12株(75.00%)具有多重耐药表型;有11株(68.75%)产ESBLs;有15株(93.75%)可形成生物被膜。16株大肠杆菌中共检出17种耐药基因,CTX-M、ant(6′)、sul1等8种耐药基因的检出率为100%;有14株(87.50%)为CTX-M-1G基因亚型;共检出12种毒力基因,iroN、ompA、yijP等5种毒力基因的检出率为100%。[结论]新疆维吾尔自治区塔额垦区牛源大肠杆菌CTX-M基因检出率较高,携带多种耐药基因和毒力基因,耐药性较强,对该地区牛健康养殖存在潜在威胁,应加强该地区CTX-M型大肠杆菌的流行情况监控。

龙陵县外引能繁母牛布鲁氏菌病的监测与净化

2018-2022年,龙陵县大量引进能繁母牛,导致布鲁氏菌病传入。为了消灭布鲁氏菌病,龙陵县开展了外引能繁母牛布鲁氏菌病监测净化工作,并对检出阳性个体的同群牛进行了跟踪监测。5年来,共采集外引能繁母牛、同群牛血清32890份,用虎红平板凝集试验和试管凝集试验进行了抗体检测,检测结果显示,2018-2022年外引能繁母牛布鲁氏菌病阳性率分别为0、1.31%、0.90%、0.51%、0.41%;2019-2023年同群牛布鲁氏菌病阳性率分别为0.38%、0.32%、0.25%、0.15%、0。通过对检出的阳性个体采取强制扑杀、无害化处理等净化措施,有效控制了布鲁氏菌病的传播和蔓延,为牛布鲁氏菌病的科学防控提供了参考。

南宁市郊奶牛子宫内膜炎病原菌分离鉴定与耐药性分析

为探讨奶牛子宫内膜炎的发病因素以及为实际生产提供适合的预防治疗措施,对南宁市周边地区22头患子宫内膜炎奶牛采集子宫分泌物,对采集的样本进行病原菌的分离鉴定和药物敏感性试验。结果从22份样品中分离出葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌、蜡样芽孢杆菌和酵母样真菌(白色念珠菌)等5类细菌共30个菌株;葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌、蜡样芽孢杆菌对替加环素表现出高度敏感,而对红霉素、万古霉素、苯唑西林等11种抗菌药物表现出不同程度的耐药性;酵母样真菌(白色念珠菌)对两性霉素B、伊曲康唑等5种抗真菌药物高度敏感。

奶牛粪中致病性大肠杆菌的分离鉴定及生物学特性的研究

对呼和浩特市地区不同奶牛场共20头健康荷斯坦奶牛的鲜粪便进行了病原性大肠杆菌的分离提取,共分离到大肠杆菌40株,经鉴定病原性大肠杆菌6株,均为强毒株,占分离菌数的15.0%,而34株为非致病性大肠杆菌,占分离菌数的85.0%。同时对6株病原性大肠杆菌进行了病原性特性的研究,发现病原性菌的生化特性基本一致,与资料报道相符。对6株病原性大肠杆菌进行了抗"O"血清鉴定,除1株有自凝现象,其余5株分属O1、O2、O83个血清型,分别占定型菌株的20%、40%和40%。

猪传染性胃肠炎病毒S基因核酸疫苗免疫小鼠体液免疫功能变化的研究

本实验对TGEV S基因核酸疫苗免疫后体液免疫功能变化进行了研究,同时比较了两种核酸疫苗单独免疫小鼠后体液免疫应答的变化,证明重组核酸疫苗诱导小鼠产生体液免疫应答。

多杀性巴氏杆菌和支原体混合感染导致犊牛肺炎的诊治

犊牛肺炎是犊牛饲养中常见的一种呼吸道疾病,主要原因是饲养管理不当导致病菌感染所致。笔者在四川省凉山州西昌市一奶牛规模化养殖场中发现了一起犊牛肺炎,采病料经四川农业大学动物科技学院实验室分离鉴定,确认是多杀性巴氏杆菌和支原体混合感染导致。

我国牛源金黄色葡萄球菌耐药现状及药敏检测方法探讨

为调查我国牛源金黄色葡萄球菌的临床耐药现状,对2009年以来新疆、浙江、山东、内蒙古和上海五省区不同地方分离的120株金黄色葡萄球菌用纸片扩散法进行临床药敏试验。结果显示,新疆分离株对红霉素、克林霉素、青霉素、复方新诺明、多西环素、四环素耐药,22%的菌株对头孢西丁耐药,43%的对氯霉素耐药,64%的对环丙沙星耐药,58%的对庆大霉素耐药;其它4地区分离株耐药情况更为严重,除头孢西丁以外,对其它9种抗生素均耐药。对菌株的多重耐药情况分析发现,新疆分离株中对5种以上抗生素耐药的占86.1%,对10种抗生素完全耐药的占17.4%;而内地分离株的数据为100%和38.2%。此外,在试验中鉴定出33株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,新疆19株,占新疆菌株的22.1%,内地四地区14株,占内地分离株的41.2%。结合2005~2009年间发表的相关耐药数据的分析结果,研究显示,我国牛源金黄色葡萄球菌呈现多重耐药,且出现了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,并在不同地区分离株中占有一定的比例;研究还发现,新疆分离株与浙江、山东、内蒙古和上海四地分离株的耐药情况有较大差异。此外,在整理药敏试验资料时,发现在金黄色葡萄球菌药敏试验中,药物的选择没有遵循选药规则,试验操作不规范和试验结果的报告不规范等问题,对此提出一些探讨性建议,供试验人员参考。

牛乳腺炎金黄色葡萄球菌肠毒素A基因的克隆及序列分析

根据GenBank上公布的金黄色葡萄球菌肠毒素A(staphylococcus enterotoxin A,SEA)基因的全序列,设计一对特异性引物扩增内蒙古分离株的SEA基因序列。经基因克隆和序列测定,表明扩增的基因片段长度为582 bp,与标准菌株ATCC13565的SEA基因片段序列相似性为100%,与GenBank上公布的金黄色葡萄球菌菌株(EF520720.1)SEA基因相似性达到99.14%。本研究结果为进一步研究建立牛乳中SEA分子检测技术奠定了实验基础。

犊牛源粪肠球菌分离鉴定及药敏试验

从河北省围场县某养殖场患病死亡的犊牛脏器样品中分离到1株优势菌株,对其进行常规形态学观察、生化鉴定、16S r DNA基因序列测定、动物致病性试验及药敏试验。结果显示,分离菌株的生化鉴定特性与粪肠球菌的生化鉴定特性相符;分离菌株16Sr DNA基因序列与粪肠球菌的同源性为96. 2%;在系统发育进化树上分离菌株与粪肠球菌聚为一簇;分离菌株对小白鼠具有一定的致病性,并将其命名为EFC QHD-1;分离菌株EFC QHD-1对替米考星、复方新诺明、卡那霉素等耐药;对环丙沙星、氟苯尼考、阿莫西林等敏感。

牛分枝杆菌外膜蛋白基因ompA的原核表达及免疫活性分析

为验证牛分枝杆菌外膜蛋白A是否具有免疫活性,以牛分枝杆菌ValleeⅢ株基因组DNA为模板扩增牛分枝杆菌外膜蛋白基因ompA,采用DNA重组技术将此基因片段连于表达载体pGEX6p-1,构建重组质粒pGEX6p-1-ompA,并将其转化到大肠杆菌中BL21(DE3)中,IPTG诱导(终浓度为0.1mmol/L),表达产物进行SDS-PAGE分析。用glutathione sepharose4B纯化蛋白和Western blot分析该蛋白的免疫学活性。结果表明:pGEX6p-1-ompA以可溶形式表达,蛋白分子量大小为60kDa,与预计大小相符,纯化的蛋白具有良好的免疫学活性。

牛乳腺炎无乳链球菌Pgk基因抗原优势区原核表达产物的抗原性分析

为了探索牛乳腺炎无乳链球菌磷酸甘油酸激酶(Phosphoglycerate kinase,Pgk)基因编码蛋白的抗原性,根据GenBank公布的牛源无乳链球菌Pgk基因序列,设计并合成一对引物,通过PCR扩增出Pgk蛋白抗原优势区的编码序列,并对其进行克隆、测序、转化、诱导表达及抗原性鉴定。结果显示克隆的Pgk基因序列含有984 bp,编码328个氨基酸残基。临床分离株与GenBank上公布的B群无乳链球菌菌株Pgk基因(AE009948)核苷酸序列同源性为99.09%,氨基酸序列同源性为99.69%。将扩增的Pgk基因片段克隆至原核表达载体pET30a(+)中,构建重组表达载体Pgk-pET30a(+),再将筛选的阳性重组质粒转化至BL21工程菌,经IPTG诱导获得部分可溶性表达Pgk重组蛋白。经Ni2+亲和层析柱纯化得到纯度在90%以上的蛋白,经Western blot分析结果表明,重组蛋白具有良好的抗原性,为进一步探索其对奶牛的免疫原性研究奠定了良好的实验基础。

牛结核病刺激上清液在布病检疫中的应用

牛结核病和布病的检疫常称之为＂两病＂检疫。近年来牛结核病γ-干扰素酶联免疫吸附试验（ELISA）的应用日益增加,为了简化＂两病＂检疫,笔者尝试将牛结核病检测样品即牛型结核菌素（PPD）刺激上清液用于布病检测,用虎红平板凝集试验（RBT）、间接ELISA（i ELISA）试验和试纸条试验同时检测90头牛的血清样品和刺激上清液样品。结果表明：在RBT中,牛型PPD刺激上清液样品均呈非特异性阳性反应;在i ELISA试验中,血清样品的S/P值（样品OD值/阳性对照OD值×100%）平均值（194.84%）显著高于刺激上清液样品的平均值（183.57%,P〈0.05）,调整刺激上清液样品的判定标准后进行卡方检验,两种样品的结果差异不显著（P〉0.05）;在试纸条试验中,刺激上清液样品的阳性率（43.33%）显著大于血清样品的阳性率（28.89%,P〈0.05）。说明牛结核病γ-干扰素ELISA检测样品不能作为布病RBT和试纸条试验的样品,但可以作为布病i ELISA试验的样品。

不同养殖模式奶牛群布鲁氏菌病调查及防控

通过对不同养殖模式奶牛群3 631头奶牛的布鲁氏菌病血清学检测,结果显示,规模场、养殖小区和散养户的布病阳性率分别为:5.3%、4.7%、0,且相同奶牛养殖模式下布病阳性率差异较大。调查表明,消灭传染源、切断传播途径、保护易感奶牛,建立"检、免、杀、消、管"等综合防控措施是本地目前防控布病的重点工作。

布鲁氏菌病检疫监测情况调查与分析

[目的]通过1990～2009年与2010～2012年布鲁氏杆菌的检疫监测结果对比,观察该病的发病趋势。[方法]各年度采集牛、羊、猪血清进行平板凝集(或虎红平板凝集)实验初筛,试管凝集判定结果。[结论]1990～2009年,牛羊猪综合的阳性检出率为)0.068%;2010～2012年,综合阳性率1.635%,而以荷斯坦乳牛阳性检出率上升最为显著,由0.019%上升到2.983%。

牛羊腐蹄病的防治

引起牛羊腐蹄病的病因比较复杂,其主要病因是坏死厌气丝杆菌感染,但脓性棒状杆菌和其他化脓性细菌、结节状拟杆菌等也可以在感染组织涂片中发现,此外还有梭菌、牛足腐蚀螺旋体等。在发病的诱因方面主要有：饲料营养不平衡,饲料结构不合理;牛羊场、牛羊舍环境卫生差;牛羊缺少运动,抵抗力差;季节因素等。在很多地方老式传统厩舍（积粪厩）舍饲的牛羊和雨水季节牛羊腐蹄病的发病率较高。

牛腐蹄病的综合防治措施

腐蹄病又名烂蹄病，也称为蹄间腐烂。牛腐蹄病是因坏死杆菌感染牛蹄部趾间皮肤和深层软组织引起蹄组织化脓坏死、腐败和角质层破坏的一种疾病，在我国很多地方的牛都易发生，特别是海拔1500m以上地区，多阴雨潮湿季节更易发生，给养殖户带来巨大的经济损失。

致犊牛腹泻大肠杆菌云南株的分离鉴定及药敏试验

云南省某规模化肉牛养殖场2～6月龄犊牛持续出现轻度腹泻,粪便呈灰绿色水样。粪便样品经牛腺病毒（BAd V）3、7型、牛呼吸道合胞体病毒（BRSV）、牛疱疹病毒I型（BHV-I）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、牛细小病毒（BPV）、牛冠状病毒（BCV）、牛轮状病毒（BRV）、隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）real-time PCR及常规PCR检测均为阴性,将样品划线接种于血清琼脂、营养琼脂及麦康凯琼脂平板上37℃培养24 h,在血清琼脂及营养琼脂平板上生长出直径2～3 mm、稍突、圆形、湿润、灰白色、边缘整齐、不透明菌落,在麦康凯琼脂平板上菌落呈现粉红色。该分离株细菌经革兰氏染色镜检、细菌生化鉴定为大肠埃希氏菌,昆明小白鼠致病性实验显示致病力较强,实验组20只小白鼠接种后48 h内全部死亡,并从死亡小白鼠肝脏及心血成功分离出该株细菌。药敏试验结果显示该株细菌对环丙沙星、左氧氟沙星、氧氟沙星、头孢噻肟、头孢哌啶、头孢吡啶、头孢曲松钠高度敏感。

一例肉牛气肿疽的诊断

某肉牛养殖场一头肉牛突然死亡,经实验室诊断为牛气肿疽,对发病原因进行了讨论。

一起牛出血性败血症的流行病学调查报告

2019年11月3日某牛场新购进牛中有1头牛出现高热、眼结膜潮红、喉部水肿、反刍停止等症状,之后相继有类似病例出现,并发生死亡,疫情持续9 d,发病率为20.9%,病死率为44.4%。为查明病因,有效控制疫病,对该起疫情进行了流行病学调查。调查显示,此次疫情是由多杀性巴氏杆菌感染引起的牛出血性败血症,外购牛混群饲养是导致本次疫情暴发的主要原因。采取治疗、紧急免疫等综合防治措施后,疫情得到有效控制。