“芪优能”对感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)仔猪免疫功能及病理损伤的影响

[目的]研究黄芪全成分提取物“芪优能”对感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)断奶仔猪免疫功能和病理损伤的影响。[方法]选取呈PRRSV阳性的28日龄断奶仔猪32头,随机分为组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ、组Ⅳ,每组8只。试验周期42 d,在试验第1周和第5周,组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ、组Ⅳ基础日粮中分别添加0、200、500、1000 g/t的“芪优能”。试验结束后第1天,前腔静脉采血,采用实时荧光定量RT-PCR测定各组仔猪血清中PRRSV的病毒载量,应用ELISA法检测血清中免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)和细胞因子(IL-2、TNF-α、IFN-γ)含量;每组剖杀3头仔猪,采集肺脏、肺门淋巴结和脾脏组织样本,制备石蜡切片,利用HE染色法、Masson三色染色法和免疫荧光双重标记染色法观察病理组织学变化。[结果]与组Ⅰ相比,组Ⅱ、组Ⅲ、组Ⅳ仔猪血清中的PRRSV拷贝数均极显著(P<0.01)降低,组Ⅲ和组Ⅳ仔猪血清中IL-2、IFN-γ含量极显著(P<0.01)升高,组Ⅱ、组Ⅲ、组Ⅳ仔猪血清中IgG含量均极显著(P<0.01)升高,组Ⅲ和组Ⅳ仔猪血清中IgA含量分别显著(P<0.05)和极显著(P<0.01)升高。病理组织学分析显示,与组Ⅰ相比,组Ⅲ、组Ⅳ仔猪的肺脏、肺门淋巴结和脾脏损伤程度明显减弱;组Ⅱ仔猪肺脏组织的CD68阳性巨噬细胞占比显著(P<0.05)升高,组Ⅲ、组Ⅳ仔猪肺脏组织的CD68阳性巨噬细胞占比均极显著(P<0.01)升高,组Ⅲ和组Ⅳ仔猪肺脏组织的CD163阳性巨噬细胞占比极显著(P<0.01)升高,组Ⅲ、组Ⅳ仔猪肺脏组织的CD163/CD68比值极显著(P<0.01)升高。[结论]在PRRSV感染仔猪基础日粮中添加黄芪全成分提取物“芪优能”,具有降低病毒载量、增强免疫功能及减轻肺脏、脾脏、肺门淋巴结病理损伤的作用,以添加水平为1000 g/t的效果最明显。

新疆维吾尔自治区阿拉尔市某规模化养殖场猪乳源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及其毒力、耐药性分析

[目的]分离鉴定新疆维吾尔自治区阿拉尔市猪乳源金黄色葡萄球菌,了解其致病性和耐药性。[方法]从阿拉尔市某规模化养殖场收集6份新鲜猪乳样本,采用甘露醇高盐琼脂(MSA)培养基分离乳样中的金黄色葡萄球菌,利用表型鉴定方法及细菌16S rDNA序列分析法对分离到的菌株进行鉴定,检测分离菌株的生物被膜形成能力,利用K-B纸片扩散法进行药物敏感性试验,利用PCR法检测毒力基因和耐药基因。[结果]经分离培养及分子生物学鉴定,从6份乳样中获得2株金黄色葡萄球菌,分离率为33.33%(2/6);2株金黄色葡萄球菌均具有强生物被膜形成能力(+++);2株金黄色葡萄球菌均对利福平敏感,均对青霉素、头孢西丁、四环素、红霉素、替米考星、克林霉素和磺胺甲噁唑耐药;在检测的5种耐药基因中,2株金黄色葡萄球菌均携带ant(4)基因和mecA基因;在检测的20种毒力基因中,共检测到6种毒力基因,其中,2株金黄色葡萄球菌均携带seg、sei、hlb、fnbA、clfA基因,有1株携带hla基因。[结论]该养殖场猪乳源金黄色葡萄球菌生物被膜形成能力强,携带多种毒力基因和耐药基因,表现为多重耐药性。

我国猪群隐孢子虫感染情况及人兽共患风险分析

隐孢子虫(Cryptosporidium)是一种重要的人兽共患寄生原虫,是引起隐孢子虫病(cryptosporidiosis)的病原。隐孢子虫可以通过水和食物感染包括人和家畜、家禽在内的多种宿主,引起宿主出现腹泻等症状,严重时可导致死亡,这不仅给畜禽养殖业造成巨大的经济损失,而且对公共卫生安全造成严重威胁。目前尚未见针对隐孢子虫病的有效疫苗或特效药物,因此,隐孢子虫病的流行病学调查显得尤为重要。对我国猪群隐孢子虫感染率、感染虫种分布、感染风险因素方面的研究进展进行综述,并对其人兽共患风险进行分析,以期为我国猪隐孢子虫病的综合防控提供参考。

广西某猪场7种主要病毒性疫病的抗体检测与分析

为了解广西某猪场猪瘟(CSF)、口蹄疫(FMD)、猪伪狂犬病(PR)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)、猪细小病毒病(PPI)及猪乙型脑炎(JE)7种主要病毒性疫病的抗体水平及感染情况,本研究采集155份商品猪和种猪的血清,利用阻断ELISA和间接ELISA方法进行抗体水平检测。结果显示:猪群猪瘟病毒(CSFV)、O型口蹄疫病毒(FMDV-O)、猪伪狂犬病病毒gB蛋白(PRV-gB)、猪伪狂犬病病毒gE蛋白(PRV-gE)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)的平均抗体阳性率分别为90.3%、81.3%、96.8%、0%、52.3%、76.1%、84.5%、69.7%,表明该猪场CSFV、FMDV-O、PRV、PCV2、PPV免疫效果较好,达到了农业农村部规定的标准(70%);PRV-gE抗体阳性个体总数为0,表明无伪狂犬野毒感染。从各阶段猪群的抗体阳性率分析,商品猪存在PRRSV、PPV、JEV野毒感染,其中PPV野毒感染较为严重,提示该猪场应加强商品猪PRRSV、PPV和JEV的疫苗免疫。

非洲猪瘟病毒pI215L蛋白结构与功能的生物信息学分析

[目的]研究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)pI215L蛋白的结构与功能。[方法]从ASFV数据库(The African Swine Fever Virus Database,ASFVdb)下载29个不同ASFV毒株的pI215L基因序列,利用生物信息学工具分析不同毒株pI215L基因的同源性及遗传进化关系,预测pI215L蛋白的理化性质、二级结构、线性表位及三维空间位置。[结果]不同ASFV毒株的pI215L基因核苷酸序列同源性较高;pI215L蛋白性质不稳定,亲水性较高,二级结构主要含有α-螺旋、延伸链、β-转角、无规卷曲4种形式,含有1个E2泛素化结合酶结构域;共有16处肽段是潜在的线性表位;使用SWISS-MODEL对pI215L蛋白的三级结构完成同源建模,在PDB数据库中与6NYO.1(ubiquitin-conjugating enzyme E2 R2和ubiquitin)的同源性达46.06%;再使用PyMOL软件对pI215L蛋白进行构象表位预测,准确定位预测的表位三维空间位置在模型中的分布。[结论]该研究结果为解析pI215L蛋白的结构和功能以及研制ASFV疫苗和抗ASFV药物提供了参考。

非洲猪瘟病毒pS273R蛋白的生物信息学分析

[目的]对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的pS273R蛋白进行生物信息学分析。[方法]采用生物信息学工具分析43株ASFV的pS273R基因序列同源性以及遗传进化关系,预测pS273R蛋白的理化性质、二级结构、磷酸化位点、糖基化修饰、亚细胞定位、三级结构。[结果]不同ASFV毒株的pS273R基因同源性较高,分离自中国的5个毒株的pS273R基因序列同源性为100%,与分离自其他国家的38个毒株的pS273R基因序列同源性在93.60%~100%;系统进化分析表明,中国毒株与欧洲分支的亲缘关系较近。pS273R蛋白由273个氨基酸组成,预测大小为31.58 kDa,是亲水性蛋白;二级结构以α-螺旋(Hh)、延伸链(Ee)、β-转角(Tt)、无规卷曲(Cc)4种形式为主,含28个磷酸化位点和2个潜在的N-糖基化位点,在宿主细胞的胞质中存在的可能性最高(P=47.8%);三级结构是由二级结构α-螺旋、β-转角、β-折叠以及无规卷曲等经过旋转、折叠与卷曲等生物过程而形成。[结论]研究结果为p S273R蛋白结构和功能的深入解析以及ASFV抑制剂的研制提供了参考。

规模化种猪场猪流行性腹泻监测及防控

猪流行性腹泻(PED)是一种以呕吐、脱水以及初生仔猪高死亡率为特征的急性肠道传染病,严重损害猪场的经济效益。广西某规模化种猪场在2021年底暴发猪流行性腹泻后,通过完善生物安全体系、使用自家组织灭活苗和对后备母猪反饲驯化,疫情得到了初步控制。为掌握PED的流行规律以及疫病防控方法,对该猪场2021—2022年产房仔猪死亡率进行了统计,并对PED病原和抗体进行了持续监测。产房仔猪死亡率结果显示,暴发PED期间全场产房仔猪死亡率达20.79%,部分栋舍仔猪死亡率高达71.63%。病原抗体监测结果显示,2021年第四季度场内PEDV阳性样品的Ct值均值最低,且此季度猪群的抗体水平最低。本研究为猪场防控PED提供依据,具有一定的参考意义。

养殖场苍蝇防控方法探讨

苍蝇喜在粪便和腐烂物中产卵,雌蝇常爬入人畜粪便等孳生缝隙中,伸出产卵管在孳生物深处产卵,以利卵粒得到充分保护。苍蝇属于杂食性蝇类,主要采食人和畜禽的分泌物、排泄物等。由于它吐泄、排粪频繁,“边吃边吐”的习性,在畜禽场里,饲料、饮水器等常被它污染。1生活史成蝇→蝇卵→一龄幼虫→二龄幼虫→三龄幼虫→蝇蛹→成蝇1.1卵期的发育时间一般为8~24 h,与环境温度、湿度有关(见表1、表2)。

猪伪狂犬病油乳剂灭活疫苗的制备及安全性与免疫性试验

用本室分离鉴定的猪伪狂犬病毒鄂A强毒株接种仓鼠肾细胞 (BHK 2 1) ,制备病毒抗原液 ,毒价不低于 10 6TCID50 / 0 1ml。经一定浓度的甲醛溶液灭活后与油相佐剂乳化研制成油乳剂灭活油疫苗 4批。本研究对该制品的安全性、免疫性进行了测定。对 18g左右小白鼠接种 0 3ml,初生仔猪、断奶仔猪及妊娠母猪加倍剂量注射 ,均未出现不良反应 ,安全性良好。对母猪的繁殖性能不产生影响。后备母猪及妊娠母猪血清中和抗体指数于免疫后 2 1d达到 316以上 ,间隔 35d加强免疫一次后 ,中和抗体指数可达 10 0 0以上。断奶仔猪及初生仔猪免疫后对强毒的攻击 ,保护率分别为 10 0 %及 90 62 %。

口服甘露寡糖(MOS)对哺乳仔猪免疫功能和血液GSH-Px、SOD的影响

在 6窝仔猪中每窝选择 4只 ,共 2 4只仔猪随机分成对照组 ( 1 2只 )和试验组 ( 1 2只 )。仔猪出生次日开始灌服甘露寡糖 (试验组 )和生理盐水 (对照组 ) ,以后每 2 d灌服 1次 ,直至断奶 ( 2 8日龄 ) ,3 0日龄采血检测。研究结果表明 :( 1 )甘露寡糖能极显著提高哺乳仔猪血清 Ig A( 2 .1 0 1 g/ L)水平 ( P <0 .0 1 ) ,显著提高Ig G( 6.77g/ L)水平 ( P <0 .0 5) ,但对 Ig M( 1 .3 96g/ L)、C3( 0 .2 1 4g/ L)、C4( 0 .1 49g/ L)没有明显影响 ( P >0 .0 5) ;( 2 )甘露寡糖能极显著提高哺乳仔猪 PHA淋巴细胞转化率 ( 47.75%,P <0 .0 1 )、白细胞吞噬能力( 3 4 .3 8%,P <0 .0 1 )和 T-淋巴细胞总数 ( 61 .75%,P <0 .0 1 ) ;( 3 )甘露寡糖能极显著地提高血液 GSH-Px( 41 .3 3 U/ L)和 SOD( 1 49.83 U/ L)水平 ( P <0 .0 1 )。结论 :甘露寡糖通过显著增加哺乳仔猪血液 T-淋巴细胞总数达到同步提高体液免疫和细胞免疫功能 ;能显著提高哺乳仔猪血液 GSH-Px和 SOD活性 ,可能与甘露寡糖改善肠道微生态环境 ,促进某些营养物质 ,如 Se、Cu。

猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗的研制

本研究选用国内分离的猪繁殖与呼吸综合征病毒CH_1a株作为疫苗用毒株。利用转瓶细胞培养技术 ,在Marc_145细胞上大量增殖了较高滴度的猪繁殖与呼吸综合征病毒。该病毒经甲醛灭活后 ,用等量的油佐剂乳化制成安全性好、保护率高的猪繁殖与呼吸综合征油佐剂灭活疫苗。经实验室试验和区域性跟踪试验证明 ,该疫苗具有免疫保护期长 ,保护率高、安全稳定等优点。

猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗的研究——菌种选择、疫苗制备及安全性试验

以国内多发的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 (APP) 1、3、7血清型强毒株作为制苗菌株 ,制成油佐剂三价灭活苗。经效力试验 ,对上述 3种血清型强毒攻击的保护率分别为 88.8%、88.8%和 10 0 % ;试验动物安全性检验及田间安全检验 ,除个别猪出现轻微体温反应及暂时减食外 ,无其他异常反应。

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染仔猪淋巴细胞亚群的动态

目的 :研究SPF仔猪感染猪繁殖与呼吸综合征病毒后对猪瘟疫苗的免疫应答受到抑制的机理。方法 :利用流式细胞术检测了SPF仔猪感染PRRS病毒BJ 4后外周血淋巴细胞亚群的动态。结果 :外周血CD3+ 、CD4+ 、CD8+ 和SLA DR+ 表达细胞在感染早期比例下降 ;感染猪扁桃体的CD3+ 和CD4+ CD8+ 细胞亚群比例下降 ;肠系膜淋巴结的CD3+ 细胞亚群在感染后下降 ,但是SLA DR+ 细胞亚群有逐渐升高的趋势。结论 :仔猪感染PRRS病毒后淋巴细胞各亚群的比例下降可能会抑制机体对其它病原体的免疫反应 ,扁桃体的细胞比例变化有利于其它呼吸道病原体的混合感染或继发感染。

鸡抗猪大肠杆菌卵黄抗体的研制与应用

用猪致病性大肠杆菌 K88、K99、987P、F4 1 标准菌株制成的灭活油佐剂作为免疫原 ,待产蛋鸡免疫后收集高免卵黄 ,然后提取、纯化 ,精制成鸡抗猪大肠杆菌特异性高免卵黄抗体并用于临床 .结果表明该制剂安全性好 ,每头仔猪注射或口服 2-4m L剂量预防仔猪大肠杆菌性腹泻 。

湖北省仔猪致病性大肠杆菌血清型鉴定

从湖北省 2 7个猪场典型病例中采集了1 52份病料 ,分离并鉴定其中 1 3 2份病料的病原为致病性大肠杆菌。通过 2 2种主要致病性大肠埃希氏菌 O抗原的血清型鉴定 ,1 3 2株致病性大肠杆菌中定型了 1 2 0种 ,共有 1 5种血清型 ,其中 O10 7、O10 1、O93、O9、O139、O14 1和 O157为优势血清型。O10 7、O93作为猪致病性大肠杆菌优势血清型在我国少见报道。尚有 1

豚鼠对猪细小病毒弱毒苗抗体反应的研究

用不同批次、不同剂量、不同保存时间的猪细小病毒N株弱毒苗接种豚鼠 ,观察豚鼠对PPVN株弱毒苗的抗体反应。结果 4种不同剂量和 3个不同批次的PPVN株弱毒苗接种豚鼠后第 14天均产生抗体反应 ,其PPVHI效价在 1∶16～ 1∶6 4之间 ,0 .1ml和 1ml剂量接种豚鼠产生的PPVHI抗体水平相近 ,抗体持续长达 12个月以上。在 4℃保存 0天、12个月和 - 2 0℃保存 2年、3年的PPVN株弱毒苗接种豚鼠 ,其PPVHI价在 1∶16～ 1∶32之间 ,说明该苗在 4℃至少能保存 12个月 ,- 2 0℃能保存 3年以上。比较了不同批次疫苗接种猪和豚鼠所产生的抗体反应 ,结果两者相似。用 3批引起豚鼠产生抗体反应的PPVN株弱毒苗接种 76 8头后备母猪 ,共产仔 7136头 ,其中健活仔 6 5 75头 ,平均每窝产健活仔 8.5 6头 ,产死仔仅 0 .73头。证明豚鼠是监测PPV弱毒苗抗体的首选实验动物。

河南地区鸡猪源大肠杆菌的耐药性监测

从河南中北部地区多个规模化鸡场和猪场采集病料，经大肠杆菌显色培养基鉴定，共分离保存157株鸡源大肠杆菌和92株猪源大肠杆菌，采用二倍肉汤稀释法对23种抗菌药物进行了药物敏感性测定。耐药性监测结果表明，鸡源大肠杆菌对阿莫西林／克拉维酸、头孢噻呋和阿米卡星相对较为敏感，耐药率分别为40．8％、59．9％和56．7％，对氨苄西林、卡那霉素、四环素、磺胺异恶唑、磺胺甲恶唑、环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、洛美沙星、达氟沙星、多粘菌素E等高度耐药；猪源大肠杆菌对阿米卡星最为敏感，耐药率仅为2．0％，其次是阿莫西林／克拉维酸、头孢噻呋和安普霉素，耐药率分别为56．5％、60．9％和65．2％，对氨苄西林、头孢唑啉、链霉素、卡那霉素、大观霉素、四环素、氯霉素、环丙沙星、达氟沙星等则高度耐药。多数菌株普遍呈多重耐药，以17～23耐药株为主。这些数据为本地区的用药提供了参考，同时也显示本地区鸡、猪源大肠杆菌的耐药性极其严重，有必要对本地区进行细菌耐药性的跟踪监测。

中国猪瘟兔化弱毒株(C-株)兔脾组织毒主要保护性抗原E2(gp55)基因序列分析

利用反转录 (RT)及套式PCR(N PCR)方法扩增了中国猪瘟兔化弱毒株 (C 株 )兔脾组织毒主要保护性抗原E2 (gp55)基因 ,成功地将其克隆并测定了核苷酸序列 ,与国内外已发表的猪瘟病毒 (HCV)E2基因序列比较的结果是 :C 株兔脾毒与C 株细胞 (SK6)毒、C 株疫苗 (犊牛睾丸细胞 ,HCLV C)毒、HCV SM株 (石门 )毒、Brescia株 (荷兰 )毒、Alfort株 (德国 )毒的E2核苷酸序列同源性分别为 98 87%、98 34 %、94 58%、91 0 0 %、80 78% ;氨基酸同源性分别为 98 95%、97 37%、94 2 2 %、91 60 %、89 2 3%。对C 株兔脾毒与C 株细胞毒、经典强毒及国内流行野毒E2上的A、B、C三个中和性抗原区的氨基酸组成进行了比较 ,其结果为 :C 株兔脾毒与C 株细胞毒的差异很小甚至没有差异 ,而与流行野毒及经典强毒在B、C区有较大的差异。我国经典强毒石门毒与国内80年代和 90年代流行毒之间有明显的差异 ,表明我国猪瘟流行毒株发生了变化。

猪外周血单个核细胞增殖反应影响条件的探讨

应用 Ｌ１６ （４５） 正交试验， 对影响猪 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 增殖反应的几个因素， 包括培养时间、 Ｐ Ｈ Ａ 浓度、细胞浓度等三个因素四个水平进行了比较和探索。试验表明几个因素对 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 的增殖反应均有显著的影响（ Ｐ＜ ００５） ， Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 增殖反应的 Ｍ Ｔ Ｔ 比色法的最佳反应条件组合为 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 浓度为１ ×１０６／ｍｌ， 植物血凝素 Ｐ Ｈ Ａ 的浓度为１２５μｇ／ ｍｌ， 细胞培养时间为２４ 小时； 影响增殖反应的先后顺序为 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 浓度、 Ｐ Ｈ Ａｐ 浓度及细胞培养时间。同时确定了最有利于 Ｐ Ｂ Ｍ Ｃ 增殖的犊牛血清浓度为１０ ％ 。

中草药复方对猪常见致病菌的体外抑菌试验

将黄芪、黄芩、麦芽、甘草、党参、茯苓、白术7种单味中药按2∶1∶1∶1∶2∶2∶2比例混合后,经水煎煮制成浓度为1 g/mL的溶液,分别采用平板打孔法和平皿二倍稀释法对猪致病性大肠杆菌、巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌进行体外抑菌试验,考察抑菌效果。结果表明:该复方中草药水煎剂对巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌抑菌效果为低敏,对大肠杆菌无抑菌作用;对猪致病性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌的最低抑菌浓度(MIC)分别为0.10、0.05、0.10 g/mL,对大肠杆菌最低抑菌浓度(MIC)>0.10 g/mL。由此可知,该复方中草药水煎剂对巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌有不同程度的抑菌作用,且对金黄色葡萄球菌的抑菌效果优于对巴氏杆菌和沙门氏菌的,而对大肠杆菌的抑菌作用甚微。