新疆维吾尔自治区阿拉尔市某规模化养殖场猪乳源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及其毒力、耐药性分析

[目的]分离鉴定新疆维吾尔自治区阿拉尔市猪乳源金黄色葡萄球菌,了解其致病性和耐药性。[方法]从阿拉尔市某规模化养殖场收集6份新鲜猪乳样本,采用甘露醇高盐琼脂(MSA)培养基分离乳样中的金黄色葡萄球菌,利用表型鉴定方法及细菌16S rDNA序列分析法对分离到的菌株进行鉴定,检测分离菌株的生物被膜形成能力,利用K-B纸片扩散法进行药物敏感性试验,利用PCR法检测毒力基因和耐药基因。[结果]经分离培养及分子生物学鉴定,从6份乳样中获得2株金黄色葡萄球菌,分离率为33.33%(2/6);2株金黄色葡萄球菌均具有强生物被膜形成能力(+++);2株金黄色葡萄球菌均对利福平敏感,均对青霉素、头孢西丁、四环素、红霉素、替米考星、克林霉素和磺胺甲噁唑耐药;在检测的5种耐药基因中,2株金黄色葡萄球菌均携带ant(4)基因和mecA基因;在检测的20种毒力基因中,共检测到6种毒力基因,其中,2株金黄色葡萄球菌均携带seg、sei、hlb、fnbA、clfA基因,有1株携带hla基因。[结论]该养殖场猪乳源金黄色葡萄球菌生物被膜形成能力强,携带多种毒力基因和耐药基因,表现为多重耐药性。

非洲猪瘟病毒pI215L蛋白结构与功能的生物信息学分析

[目的]研究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)pI215L蛋白的结构与功能。[方法]从ASFV数据库(The African Swine Fever Virus Database,ASFVdb)下载29个不同ASFV毒株的pI215L基因序列,利用生物信息学工具分析不同毒株pI215L基因的同源性及遗传进化关系,预测pI215L蛋白的理化性质、二级结构、线性表位及三维空间位置。[结果]不同ASFV毒株的pI215L基因核苷酸序列同源性较高;pI215L蛋白性质不稳定,亲水性较高,二级结构主要含有α-螺旋、延伸链、β-转角、无规卷曲4种形式,含有1个E2泛素化结合酶结构域;共有16处肽段是潜在的线性表位;使用SWISS-MODEL对pI215L蛋白的三级结构完成同源建模,在PDB数据库中与6NYO.1(ubiquitin-conjugating enzyme E2 R2和ubiquitin)的同源性达46.06%;再使用PyMOL软件对pI215L蛋白进行构象表位预测,准确定位预测的表位三维空间位置在模型中的分布。[结论]该研究结果为解析pI215L蛋白的结构和功能以及研制ASFV疫苗和抗ASFV药物提供了参考。

非洲猪瘟病毒pS273R蛋白的生物信息学分析

[目的]对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的pS273R蛋白进行生物信息学分析。[方法]采用生物信息学工具分析43株ASFV的pS273R基因序列同源性以及遗传进化关系,预测pS273R蛋白的理化性质、二级结构、磷酸化位点、糖基化修饰、亚细胞定位、三级结构。[结果]不同ASFV毒株的pS273R基因同源性较高,分离自中国的5个毒株的pS273R基因序列同源性为100%,与分离自其他国家的38个毒株的pS273R基因序列同源性在93.60%~100%;系统进化分析表明,中国毒株与欧洲分支的亲缘关系较近。pS273R蛋白由273个氨基酸组成,预测大小为31.58 kDa,是亲水性蛋白;二级结构以α-螺旋(Hh)、延伸链(Ee)、β-转角(Tt)、无规卷曲(Cc)4种形式为主,含28个磷酸化位点和2个潜在的N-糖基化位点,在宿主细胞的胞质中存在的可能性最高(P=47.8%);三级结构是由二级结构α-螺旋、β-转角、β-折叠以及无规卷曲等经过旋转、折叠与卷曲等生物过程而形成。[结论]研究结果为p S273R蛋白结构和功能的深入解析以及ASFV抑制剂的研制提供了参考。

规模化种猪场猪流行性腹泻监测及防控

猪流行性腹泻(PED)是一种以呕吐、脱水以及初生仔猪高死亡率为特征的急性肠道传染病,严重损害猪场的经济效益。广西某规模化种猪场在2021年底暴发猪流行性腹泻后,通过完善生物安全体系、使用自家组织灭活苗和对后备母猪反饲驯化,疫情得到了初步控制。为掌握PED的流行规律以及疫病防控方法,对该猪场2021—2022年产房仔猪死亡率进行了统计,并对PED病原和抗体进行了持续监测。产房仔猪死亡率结果显示,暴发PED期间全场产房仔猪死亡率达20.79%,部分栋舍仔猪死亡率高达71.63%。病原抗体监测结果显示,2021年第四季度场内PEDV阳性样品的Ct值均值最低,且此季度猪群的抗体水平最低。本研究为猪场防控PED提供依据,具有一定的参考意义。

新生仔猪致病性大肠埃希菌的分离鉴定

从湖北某猪场发生典型黄痢的新生仔猪无菌采集粪便 ,上清接种小白鼠 ,取粪便和死亡小白鼠的心血接种麦康凯琼脂培养基 ,挑红色菌落 ,革兰氏染色镜检为革兰氏阴性杆菌。用法国BioMerieuxATB全自动细菌鉴定及药敏仪ID 32E肠杆菌鉴定条鉴定 ,得到大肠埃希菌的极好鉴定结果。不同剂量接种小白鼠 ,证明其毒力。用 16 3种O抗原标准血清玻板凝集试验定型为O1 0 1 型。用ATBVET药敏试条进行药敏试验结果显示对 7种抗生素敏感。

猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸在仔猪呼吸及繁殖系统动态分布的研究

应用针对 PRRSV ATCC VR- 2 332株基因组 ORF6片段的 4 6 3bp的 c DNA探针 ,对 4 5日龄 SPF仔猪分别人工感染 ATCC VR- 2 332株及北京分离株 B96 - 4后不同时间呼吸系统及繁殖系统组织中病毒核酸的分布进行了研究。结果显示 ,在感染后 30 h,即可在鼻黏膜、气管、肺脏、睾丸、附睾、精囊、前列腺、子宫、扁桃体等组织中检出阳性杂交信号 ,且一直持续到感染后 2 8天。其中扁桃体中病毒的数目远多于呼吸系统及繁殖系统组织中的数目 。

猪胸膜肺炎放线杆菌、肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌联合检测芯片的研制及应用

本研究旨在建立联合检测胸膜肺炎放线杆菌、猪肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌的DNA芯片。用7个从3种病菌基因组中扩增出的不同特异性靶DNA制作基因芯片,并对芯片的靶DNA和探针浓度、杂交温度、重复性、特异性和灵敏度进行了研究。结果表明,检测芯片的特异性强,能与测试的李氏放线杆菌、猪鼻支原体和副猪嗜血杆菌等9种病原区分;灵敏度高,在50μL标记反应体系中,能检测到10~50 pg基组DNA,芯片可重复利用。用芯片对44株目标菌的不同型标准菌株、分离株和疫苗株进行了检测,其信号值≥1 000,信号噪音比（SNR）≥6。用芯片对45头病猪和97头健康猪的临床样品选择培养物进行了检测,其检出率分别为多杀性巴氏杆菌71.1%和49.5%、胸膜肺炎放线杆菌42.2%和26.8%、猪肺炎支原体20%和22.7%,混合感染率分别为42.2%和24.7%。在检测临床样品时,芯片法与PCR的符合率为97.8%~100%,与分离鉴定法的符合率为87.6%~95.6%。研究表明,研制的芯片特异性强、敏感性高、可重复使用,是一种能有效用于胸膜肺炎放线杆菌、猪多杀性巴氏杆菌和猪肺炎支原体鉴定和联合检测的新工具。

猪链球菌2型国内分离株毒力相关蛋白的分析

提纯猪链球菌 2型江苏分离株HA980 1的毒力相关蛋白溶菌酶释放蛋白 (muramini dase releasedprotein ,MRP)和胞外因子 (extracellularfacter,EF) ,制备其抗体供免疫转印之用。另提取猪源链球菌 1 7株国内分离株、1株德国分离株及 1株猪链球菌 2型人分离株的胞壁和胞外蛋白 ,经SDS PAGE ,与HA980 1株的MRP和EF的抗体作免疫转印。 1 1株MRP阳性 ,1 0株EF及EF 阳性 ,MRP及EF的分布存在 4种表型 :MPR+ EF+ (8 1 9) ,MRP+ EF (1 1 9) ,MRP+ EF- (1 1 9) ,MRP- EF- (1 0 1 9)。

大肠杆菌F107菌毛A亚单位基因的克隆与鉴定

用 PCR技术 ,从水肿病大肠杆菌临床分离株中扩增出 F1 0 7A亚单位基因 ( fed A)的 51 0 bp的全序列 .将该 PCR扩增产物在 Bam H 和 Eco R 位点克隆进 p UC1 8质粒载体 ,并转化大肠杆菌 TG1,再根据限制性内切酶酶切分析筛选出含有 fed A的重组质粒 pf1 0 7G.将重组质粒进行序列测定 ,结果表明 :此重组质粒中的插入序列与发表的 fed A是一致的 ,证明该重组质粒就是含有 fed

从母猪爆发产死胎中分离出伪狂犬病毒

从武汉市青山良种场猪场1990年秋季母猪爆发产死胎病例中的4头死胎猪取脑和内脏组织进行病毒分离,均出现典型细胞病变,经电镜形态学观察和抗伪狂犬病毒单克隆抗体免疫荧光技术确定为伪狂犬病毒.

小型猪肠道正常菌群的研究

本实验用稀释滴种的细菌定量方法对饲养在相同环境中的三种猪(小型猪、北京黑猪、两者杂交一代猪)四个年龄(2、4、6、8月龄)、四个部位(空脑中部、回肠、盲肠、结肠中部)和九种细菌(大肠杆菌、肠球菌、真杆菌、拟杆茵、分叉杆菌、小棱菌、韦荣氏小球菌、消化球菌、乳酸杆菌)进行了定量分析。对结果进行了统计学处理,得到了小型猪正常肠菌群的一些生理值;并认为2月龄后猪肠道乳酸杆菌、消化球菌、韦荣氏小球菌占优势;三种猪2、4、6、8月龄间正常肠菌群无显著性差异;种群间肠菌群无差异。

硝酸银对常见呼吸道病原体的抑制作用

目的 证实硝酸银对常见呼吸道病原体具有抑制作用。方法 采用血凝试验和鸡胚培养法观察硝酸银对副流感病毒的抑制作用;采用细胞培养法观察硝酸银对腺病毒的抑制作用;采用细菌培养法观察硝酸银对肺炎链球菌和乙型溶血型链球菌的抑制作用。结果 硝酸银对副流感病毒和腺病毒有明显的抑制作用,对肺炎链球菌和乙型溶血型链球菌有极强的杀菌作用。

仔猪猪瘟免疫程序的研究

应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对不同日龄仔猪的猪瘟母源抗体进行检测，结果表明，仔猪在１５、２５、３５和４５日龄母源抗体阳性率分别为９８．１５％、７８．５０％、７０．４１％和２２．２２％。根据母源抗体检测结果，对各日龄仔猪免疫不同头剂猪瘟疫苗，免疫持续至１５０和２１０日龄时，对其免疫抗体进行检测，结果显示，仔猪在４５日龄接种猪瘟疫苗４头剂；３５和２５日龄接种疫苗４或６头剂；新生仔猪乳前注苗２头剂，７０日龄注苗４头剂，其阳性率均达９０％以上。

鸡致病性大肠杆菌的分离鉴定和自场灭活疫苗的研制

近年来，集约化养鸡场在主要传染病得到控制后，大肠杆菌病有明显上升的趋势，已成为鸡群重要的细菌性疾病之一，引起普遍重视，国内不少省份和地区都报道该病［１］［２］［３］。本病在肉鸡和蛋鸡群中，发病率均很高，不少肉鸡场几乎每批发生。大肠杆菌易产生耐药性，在...

猪链球菌2型与麦氏弧菌的分离鉴定及动物致病性试验

从 1 999年夏江苏省某地暴发的猪急性败血型病死猪脏器中 ,分离到RGR990 1、RGR990 2、RGM990 3、RGM990 4 4株细菌。经病原学鉴定 ,RGR990 1、RGR990 2为猪链球菌 2型 ,RGM990 3、RGM990 4为麦氏弧菌。对其进行致病性研究发现 ,所分离的 2株猪链球菌 2型在实验室条件下对猪仅产生一过性体温升高 ,不致死 ;麦氏弧菌对猪无致病性。将二株猪链球菌 2型及麦氏弧菌混合培养物分别同时接种猪 ,则可使猪体温迅速升高 ,并于 2 3h内死亡 。

猪细小病毒N株耐热性研究

观察不同温度对猪细小病毒N株血凝活性的影响。结果表明,猪细小病毒N株在37℃条件下十分稳定,作用28d血凝滴度变化不大,只下降1～3个滴度;在60℃恒温水浴下的血凝滴度变化缓慢,血凝滴度在前7d一直稳定;随着温度的升高,病毒血凝的稳定性迅速降低,短时间内即可失去血凝活性,在75℃1h、80℃10min、85℃5min,检测不出病毒血凝活性。由此证明,猪细小病毒N株在37、60℃时血凝活性十分稳定,对热有很强的抵抗力,为将该弱毒株开发成方便运输、保存和使用的疫苗提供了依据。

猪源性大肠埃希氏菌血清型及热敏肠毒素的研究

业已确诊，甘肃省许多地区未断奶仔猪腹泻的主要病原是大肠埃希氏菌。由于大肠埃希氏菌血清型繁多，使本病的防制受到一定的区域性限制，亦由于该菌产生的热敏肠毒素（ＬＴ）在致腹泻中起重要作用，具有抗原性，因此进一步研究大肠埃希氏菌的血清型和ＬＴ，筛选强致病性的...

Ⅱ型猪链球菌的致病因子研究进展

Ⅱ型猪链球菌的致病因子研究进展杜文金孙融冰黄引贤①（农业部动物检疫所青岛２６６０３２）Ｆｉｅｌｄ（１９５４）在英国从暴发败血症、脑膜炎和多发性关节炎的乳猪中分离出一株α－溶血猪链球菌，可是却不能归属于现今所认识的１９个Ｌａｎｃｅ－ｆｉｅｌｄ群，ＤｅＭ...

猪源性大肠埃希氏菌对抗菌药物的敏感性测定

从甘肃省13 个地区( 州、市) 规模化猪场和专业户猪场分离出大肠埃希氏菌118 株,按世界卫生组织( W HO) 推荐的RirbyBauer 氏方法,用18 种抗菌药物对其敏感性进行了测定。结果:抑菌作用最强为诺氟沙星,高敏菌株占89 .0 % ;抑菌作用最差为四环素,耐药菌株占100 % 。

戊二醛复合消毒剂对猪病病毒杀灭效果的研究

目的 研究戊二醛复合消毒剂对猪病病毒的杀灭效果。方法 将猪细小病毒 (porcinepavrovirusvirus ,PPV)、猪繁殖呼吸综合征病毒 (porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)和猪伪狂犬病病毒(porcinepseudorabiesvirus,PRV)分别与不同浓度的戊二醛复合消毒剂作用后 ,接种于长满细胞单层的细胞培养板中 ,根据细胞是否产生病变情况 ,确定消毒剂杀灭病毒的最佳浓度 ;同时 ,还将不同浓度的消毒剂与猪瘟病毒 (hogchloeravirus,HCV)作用后 ,对兔进行静脉注射 ,根据兔的体温变化情况 ,判断消毒剂杀灭病毒的最佳浓度。结果 1%浓度的消毒剂 ,可在 2 0min之内有效杀灭PPV、PRRSV和PRV ;0 5 %浓度的消毒剂 ,可在 10min之内有效杀灭HCV。结论 戊二醛复合消毒剂具有高效杀灭病毒的作用 ,适用于养殖场、医疗卫生行业及传染病流行地区的消毒灭菌 ;