非洲猪瘟病毒pI215L蛋白结构与功能的生物信息学分析

[目的]研究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)pI215L蛋白的结构与功能。[方法]从ASFV数据库(The African Swine Fever Virus Database,ASFVdb)下载29个不同ASFV毒株的pI215L基因序列,利用生物信息学工具分析不同毒株pI215L基因的同源性及遗传进化关系,预测pI215L蛋白的理化性质、二级结构、线性表位及三维空间位置。[结果]不同ASFV毒株的pI215L基因核苷酸序列同源性较高;pI215L蛋白性质不稳定,亲水性较高,二级结构主要含有α-螺旋、延伸链、β-转角、无规卷曲4种形式,含有1个E2泛素化结合酶结构域;共有16处肽段是潜在的线性表位;使用SWISS-MODEL对pI215L蛋白的三级结构完成同源建模,在PDB数据库中与6NYO.1(ubiquitin-conjugating enzyme E2 R2和ubiquitin)的同源性达46.06%;再使用PyMOL软件对pI215L蛋白进行构象表位预测,准确定位预测的表位三维空间位置在模型中的分布。[结论]该研究结果为解析pI215L蛋白的结构和功能以及研制ASFV疫苗和抗ASFV药物提供了参考。

非洲猪瘟病毒pS273R蛋白的生物信息学分析

[目的]对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的pS273R蛋白进行生物信息学分析。[方法]采用生物信息学工具分析43株ASFV的pS273R基因序列同源性以及遗传进化关系,预测pS273R蛋白的理化性质、二级结构、磷酸化位点、糖基化修饰、亚细胞定位、三级结构。[结果]不同ASFV毒株的pS273R基因同源性较高,分离自中国的5个毒株的pS273R基因序列同源性为100%,与分离自其他国家的38个毒株的pS273R基因序列同源性在93.60%~100%;系统进化分析表明,中国毒株与欧洲分支的亲缘关系较近。pS273R蛋白由273个氨基酸组成,预测大小为31.58 kDa,是亲水性蛋白;二级结构以α-螺旋(Hh)、延伸链(Ee)、β-转角(Tt)、无规卷曲(Cc)4种形式为主,含28个磷酸化位点和2个潜在的N-糖基化位点,在宿主细胞的胞质中存在的可能性最高(P=47.8%);三级结构是由二级结构α-螺旋、β-转角、β-折叠以及无规卷曲等经过旋转、折叠与卷曲等生物过程而形成。[结论]研究结果为p S273R蛋白结构和功能的深入解析以及ASFV抑制剂的研制提供了参考。

近年来上海地区病死猪主要病毒病感染状况调查

为掌握动物疫情动态,消除疫情隐患,及时了解上海及周边地区猪主要病毒病的流行趋势,采用实时荧光RT-PCR方法对2006～2009年上海地区规模猪场和养猪散户送检的门诊收集的临床病例样本进行主要病毒病的病原学检测,主要包括猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2,PCV2),通过临床检测,结果表明这些病原在上海及周边地区是普遍存在的,给猪病防疫带来了重大隐患。

从母猪白细胞检出猪瘟病毒

本研究应用RT-PCR对广西不同地区的老母猪白细胞172份、猪流产胎儿与死胎162份、新生仔猪33份和120份健康猪扁桃体进行猪瘟病毒检测。检出母猪白细胞阳性2份、流产胎儿与死胎阳性12份,健康猪扁桃体阳性1份和新生仔猪阳性3份。对其中1份母猪白细胞阳性材料、1份健康猪扁桃体阳性材料和4份流产胎儿材料进行猪瘟病毒E2基因的测序分析。结果显示,来自母猪白细胞的GXXJB1与HCLV、Shi-men株的核苷酸同源性分别为96.9%和94.0%,推导的氨基酸同源性分别为95.9%和94.2%;与其他的广西毒株的核苷酸同源性为81.1%～99.5%,推导的氨基酸同源性为89.6%～99.2%。根据遗传进化树分析,样品GXXJB1属于基因Ⅰ群。

猪瘟病毒E2基因的克隆及原核表达

利用RT-PCR技术扩增出不含信号肽的猪瘟病毒石门株的E2基因,将其克隆到PGEX-T-Easy 载体上,用BamH Ⅰ和HindⅢ进行双酶切,回收目的基因。将目的基因克隆到表达载体质粒pPROEX-HTb中,获得 重组质粒PPRO,EXE2,用pPROEXE2转化大肠杆菌,诱导含重组质粒PPROEXE2的大肠杆菌BL21表达E2基因蛋 白,研究E2蛋白与猪瘟阳性血清反应的特异性。结果表明,受体菌诱导后能表达E2基因蛋白,所表达的E2蛋白能 与猪瘟阳性血清发生特异性很强的反应。

6株猪流行性腹泻病毒N基因的克隆与分析

为了解安徽省猪流行性腹泻病毒(PEDV)的遗传变异情况,采用胶体金试纸条检测安徽省境内发生疑似猪流行性腹泻病的病猪粪便(2013—2017年);对PEDV抗原阳性猪样品,利用RT-PCR方法扩增其PEDV N基因,并进行测序和序列分析。结果发现,经胶体金试纸条检测确认了6个猪流行性腹泻发病猪场;对来自该6个猪场的病料样品或病毒传代培养物进行RT-PCR扩增和测序,共获得6株PEDV流行毒株的N基因序列,其序列全长均为1 326 bp,将其分别命名为N12、N22、N32、N42、N52和N62。核苷酸同源性分析显示,6株PEDV分离株N基因之间序列同源性为94.8%~99.8%。其中,5株PEDV分离株(N12、N22、N32、N52和N62)与PEDV疫苗株、经典毒株、2011年之前的我国分离株(LZC、CHS)的同源性较低(94.1%~96.3%),亲缘关系较远;与2011年后国内外PEDV分离株存在较高同源性(96.9%~99.2%),亲缘关系较近;而N42正好相反。该研究表明,近年来安徽各地猪场以PEDV新变异毒株的流行为主。

猪传染性胃肠炎病毒诱导ST细胞凋亡的初步研究

【目的】探讨猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染猪睾丸细胞(ST细胞)后是否可诱导细胞发生凋亡,并对凋亡的信号通路进行初步探究,为进一步揭示TGEV的致病机制提供理论基础。【方法】用TGEV感染对数生长期的ST细胞,同时设立对照组,在感染后不同时间取细胞样品,通过细胞形态观察、细胞活性检测、细胞凋亡率检测和细胞内Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活性检测及Western blot分析等方法,研究TGEV感染对ST细胞的影响。【结果】TGEV感染可抑制ST细胞生长,并且呈现病毒感染剂量和感染时间的依赖性。倒置显微镜和荧光显微镜观察结果显示,10MOI(感染复数)的TGEV感染24h后,ST细胞出现典型的凋亡特征,细胞皱缩变圆、聚堆,细胞核内染色质固缩。流式细胞仪检测及Caspases活性检测表明,感染TGEV的ST细胞凋亡比例随感染时间的延长而逐渐增加,细胞内Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9活性逐渐升高。Western blot分析表明,Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9无活性的酶原形式随着TGEV感染时间的延长逐渐降解,同时Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的活化片段逐渐增加。TGEV感染能够促进FasL和Bax的表达而下调Bcl-2的表达。【结论】TGEV感染能够诱导ST细胞凋亡,Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9及FasL介导的死亡受体通路和Bcl-2家族调控的线粒体凋亡通路,在调控TGEV感染诱导的细胞凋亡过程中可能起着非常重要的作用。

一起典型猪瘟病毒感染病例的诊断与分析

2015年6月湖北某农户饲养的150头的育肥猪,先后出现了弓背喜卧、粪便干结、全身皮肤出血等症状。病理剖检可见全身皮肤及心、肝、脾、肺、肾、胃、膀胱等多脏器广泛出血斑;采集病猪病变组织,提取RNA,用猪瘟病毒基因特异性引物进行RT-PCR检测,琼脂糖凝胶电泳结果显示,病料呈猪瘟病毒核酸阳性,确诊病猪为猪瘟病毒感染。

非洲猪瘟的诊断方法及防控措施

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fevervirus,ASFV)引起家猪或野猪的一种急性、烈性、高度接触性传染病。临床上以不明原因死亡、高热、网状内皮系统出血及脾肿大且质脆为主要特征。该病的致死率最高可达100%,是一种传播速度极快、危害性极强的传染病。就非洲猪瘟的流行病学、实验室诊断方法及防控措施进行综述,以期为非洲猪瘟综合防控提供参考。

1例猪瘟的诊断与防控

分析了某猪场猪只死亡病例的临床症状和剖检变化,并进行了实验室诊断,经确诊为猪瘟。同时,提出了相应的防控措施,以期为养殖者和兽医工作人员提供参考。

猪瘟与猪链球菌病的鉴别诊断

猪瘟与猪链球菌病症状相似,在生产中常常会因为误诊而延误最佳防治时机,给养猪业造成一定的经济损失。主要对如何鉴别猪瘟与猪链球菌病作一介绍,以期为临床正确诊断该2种猪常见病提供参考。

生猪规模场猪瘟的净化策略

猪瘟是由猪瘟病毒引起猪的一种高度接触性、出血性和致死性传染病。它和2018年传入我国的非洲猪瘟相似,发病率和死亡率高,国际动物卫生组织(OIE)将其定为A类传染病(16种法定报告传染病),我国列为一类动物疫病。猪瘟没有特效药物治疗,只能靠疫苗预防控制。根据农业农村部要求,到2020年底全国所有种猪场和部分区域(以县为单元申报)应达到猪瘟净化标准,生猪规模场(主要是自繁自养的场)也应对标种猪场,搞好猪瘟疫病的综合防控,逐步实现净化目标。

勐腊县猪瘟流行现状与防制对策

猪瘟是世界范围内感染率和发病率最高的一种疾病，当前勐腊县的猪瘟发病状况呈多样性，流行呈典型猪瘟和非典型猪瘟，持续感染与隐性感染共存，发病日龄的范围明显地拓宽，防疫的方式也多种多样。本文根据笔者的生产防制经验对猪瘟的流行现状和综合防制措施进行了综述。

生猪检疫中猪瘟的鉴别诊断和无害化处理

猪瘟是生猪养殖中的常见病,对于我国生猪养殖业发展造成了严重威胁。在生猪检疫过程中,需要及时、准确地判断动物否患有猪瘟,并采取相应措施进行处置。笔者对生猪检疫中猪瘟鉴别诊断展开分析,并对无害化处理展开探讨,供参考。

组合免疫在非洲猪瘟复养猪场上的应用

从2018年我国确诊第一例非洲猪瘟病例开始,该病在国内快速传播,给养猪行业造成了毁灭性的打击。为防控非洲猪瘟疫情,部分养殖场选择减少种猪的疫苗免疫,甚至静默生产,但对猪场的生产成绩造成了很大影响。应非洲猪瘟复养猪场客户的需求,笔者对种猪常用的猪口蹄疫、猪瘟及猪伪狂犬三种疫苗采用2种不同的免疫方式,即组合免疫与单独免疫,通过对比来验证免疫效果。抗体检测结果显示,组合免疫与单独免疫在口蹄疫及猪瘟疫苗免疫方面效果相当,在猪伪狂犬疫苗免疫方面,组合免疫要显著优于单独免疫。考虑到组合免疫能够减少免疫次数,降低劳动成本;因此,该方法在养殖场种猪上有广阔的应用前景。

2016-2020年新疆生产建设兵团猪瘟监测分析

为了解新疆生产建设兵团2016-2020年猪瘟流行情况、预判流行趋势、评估疫情发生风险,笔者采用猪瘟病毒阻断抗体检测ELISA及猪瘟病毒实时荧光RT-PCR方法,开展了猪瘟免疫抗体及病原监测工作。2016-2020年,兵团累计检测猪血清样品72823份,免疫抗体阳性65926份,抗体阳性率达90.53%(65926/72823);累计检测猪扁桃体样品17905份,猪瘟病毒荧光RT-PCR检测结果均为阴性。当地连续5年的猪瘟抗体合格率均达到合格标准,但今后还需根据兵团猪瘟相关防控措施,进一步提高猪瘟免疫合格率。