鸡传染性支气管炎病毒遗传演化最新研究进展

鸡传染性支气管炎(Avian infectious bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus,IBV)引起的一种分布范围广泛、传染性较强,能对家禽养殖业造成重大经济损害的二类动物疫病。同其他RNA病毒一样,遗传变异方面为独特的套式转录方式,在复制过程中病毒基因组的不连续性和RNA聚合酶校对不完全性,致使碱基在复制过程中易发生替换、缺失和插入,进一步造成了该病毒高突变性的特征。近年来多个研究表明,IBV产生变异株的主要原因并不是点突变,而是滥用疫苗、盲目免疫所造成的基因重组,在自然选择以及外部高强度免疫压力的双重影响下,促使IBV不断演化变异产生新的强毒株。着重论述了近年来IBV在全球各地的流行状况,深入分析了IBV遗传演化发生原因,为该病的疫苗防控提供可靠的数据支撑。

鸭肝炎病毒Ⅰ型的RT—PCR诊断方法的建立

根据Genebank上发表的鸭肝炎病毒Ⅰ型(DHV-1)的部分序列设计了1对引物D1/D2,通过对反应条件的优化,建立起了有效的鸭肝炎病毒Ⅰ型的RT-PCR诊断方法。并应用此方法对近年在上海及周遍地区分离到的2株DHV-1分离毒进行了检测和测序鉴定,结果证实此株分离毒为DHV-1病毒。结果显示建立的DHV-1的PCR诊断方法具有快速、准确的优点。

鸽Ⅰ型副粘病毒F基因序列的扩增、序列测定及同源性分析

目的根据NDV的F基因保守区设计1对引物,用RT-PCR方法扩增出鸽型副粘病毒JS株融合蛋白基因(F基因)的部分片段,并测序。结果表明,JS株与现今国际上已发表的NDV的LaSota株F基因的同源性为96.6%,与F48E9株F基因的同源性为94.0%。

禽类的副粘病毒

本文对禽副粘病毒的血清型、分布与流行情况,致病性、诊断与检疫作简要的综述,并对我国禽副粘病毒的检疫及研究提出某些意见。 副粘病毒引起家禽重要的疾病,特别是新城疫(ND),是鸡最重要的世界性传染病,引起巨大的经济损失。自1956年以来。

禽I型副粘病毒广西分离株F基因序列及毒力的研究

对源于鸡、鹅、鸽的 9株APMV_1广西分离株及我国常用的中发型疫苗毒株I系 (Mukteswar株 )的F基因N_端前段进行了RT_PCR扩增 ,产物进行核苷酸序列测定 ,用基因分析软件DNAStar进行分析并与已发表的其它参考毒株进行比较。结果发现 ,广西分离株在裂解位点的氨基酸组成和排列均符合强毒株的特征 ;根据F基因绘制的系谱树来看 ,广西鸡和鹅分离株都归属于基因型VII,证实近年来广西流行的基因型与国内其他地区的相同 ;并发现中发型疫苗毒株I系 (Mukteswar株 )也属于基因型VII。研究还对分离株进行了常规的毒力和致病性测定试验 ,并与根据F基因序列特征判定的结果相比较 ,结果发现其中一株鸽源和两株鹅源分离株根据常规方法判定的结果与毒株在临床上的致病性不相符 。

2010～2011年中国部分地区禽坦布苏病毒感染调查及分子变异分析

为了解中国目前禽坦布苏病毒在家禽中的流行状况及病毒分子演化特征,对2010～2011年采集自中国沿海及周边的9个省的439份疑似家禽坦布苏病毒感染的临床样品进行了鉴定,并进行了分离毒株NS5基因的分子遗传进化分析。结果表明,2010年采集的187份家禽病料中检测出42份阳性样品,阳性率为21.6%,而2011年采集的252份样品中检测出37份阳性样品,阳性率为13.9%。对部分毒株的NS5基因测序表明,本研究分离的禽坦布苏病毒与已发布的同时期分离的禽坦布苏病毒NS5基因同源性在98%以上,与2010年前分离的鸡源及蚊媒坦布苏病毒的同源性介于83.8%～85.8%之间;所有2010年后分离的禽坦布苏病毒毒株在系统进化上共同构成了一个进化分支。结果表明,2011年禽坦布苏病毒仍在中国沿海及周边的9个省的家禽中流行,病毒NS5基因的测序分析表明,到目前为止在家禽中流行的禽坦布苏病毒未出现明显的分子变异。

鸭维生素D缺乏症

病因 (1)饲料中缺乏维生素D，或维生素D制剂添加量不足；(2)日粮钙、磷配合比例失调；(3)长时间阴雨，鸭缺乏运动或缺乏阳光照射，使自身皮肤中的维生素D原不能转化为维生素D；(4)肝脏疾病，或药物、霉菌、化学药品、重金属中毒，致使维生素D合成发生障碍。

禽痘病毒活疫苗中网状内皮组织增生病病毒的分离鉴定及其序列比较

为了从怀疑污染禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)的禽痘病毒(Fowlpoxvirus,FPV)活疫苗中分离病毒,将市场上购买的某些厂家的禽痘弱毒疫苗接种7日龄SPF雏鸡。在5d后采其抗凝血浆接种鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast,CEF),在连续传2代后,用REV特异性单抗做间接免疫荧光试验,确认REV感染,命名为JS0809。提取感染细胞的DNA,采用PCR扩增env基因。测序分析表明,该毒株的env基因开放阅读框同大部分REV毒株一致,为1 761 bp。JS0809的囊膜蛋白基因(envelope protein gene,env)与国内已发表株的同源性高达96.0%～99.%。相对而言,它与早年分离到的毒株的同源性只有96%～97.3%,但与近几年的分离珠的同源性则均高达99.5%～99.8%。它与整合进FPV野毒株中的全基因组REV的env基因同源性很高为99.8%,而与整合进FPV疫苗株中全基因组REV的env基因同源性较低仅为97.3%。本研究证实了在我国生产的某些FPV疫苗中存在REV污染,所污染的REV的env基因更接近最近的流行野毒,这是国内第一次报道从禽痘弱毒疫苗中分离到REV活毒。

蛋鸭痛风病的诊治

禽痛风病的特征，是血液中蓄积大量的尿酸。在正常情况下，由肾脏通过输尿管从总泄殖腔排出到体外，当肾脏或输尿管发生障碍时，导致血液中尿酸盐浓度升高，在肾脏、肝脏、心脏、肠、腹膜等浆膜面及关节内沉积，引起消瘦、衰弱、腹泻、排白色稀粪等症状，致使呈现致死的转归。病理剖检看到关节表面和内脏表面有大量白色尿酸盐沉积。禽痛风病的报道多以鸡常见，鸭痛风病例报道较少。笔者现将临床上发生鸭痛风病例介绍如下。

浅议肉禽无禽流感生物安全隔离区国家评估机制

生物安全隔离区国家评估工作,既是我国《动物防疫法》等法律法规的要求,也是当前动物和动物产品国际贸易中进口方对出口方生物安全隔离区实施无疫认可的前提条件。生物安全隔离区是我国无规定动物疫病区的一种重要类型。本文在《无规定动物疫病区评估管理办法》基础上,结合肉禽无禽流感生物安全隔离区有关标准的相关技术要求,研究构建了我国肉禽无禽流感生物安全隔离区国家评估机制,明确了生物安全隔离区国家评估的评估管理、评估程序和方法、评估结果发布以及评估后管理等方面的要求,为我国下一步开展肉禽无禽流感生物安全隔离区国家评估工作提供借鉴和参考。

华东地区健康水禽携带新城疫病毒情况调查

近年来,新城疫逐渐成为了一种严重的家养水禽疾病。尽管如此,目前对于我国水禽新城疫的流行和分布情况依然知之甚少。本研究采集了2011～2012年中国华东6省1市的部分活禽市场和养殖场表观健康家鸭和家鹅泄殖腔棉拭样品,进行新城疫病毒的分离和毒力检测工作。通过测定分离株F基因高变区nt47～420,对其进行遗传进化分析。结果显示,在1200份样品中,检测到阳性样品23份,分离率为1.92%,表明眼观健康家鸭和家鹅中携带新城疫病毒。对比寒冷的春冬两季和炎热的夏季,新城疫病毒的分离率存在明显的差别。在中国家鸭和鹅中流行的新城疫毒株依然对温度敏感,高温天气不利于新城疫疫情蔓延。对分离株的鸡胚平均死亡时间和脑内接种指数进行了测定。参考76株GenBank中已发表并鉴定基因型毒株的F基因高变区nt 47～420,对23株家养水禽分离株进行了遗传进化分析,结果发现分离株与流行的强毒株和疫苗株遗传距离较远。其中,13株与Class II基因Ib亚型遗传距离最近;3株属于Class I基因2型;7株与Class I基因3b亚型遗传距离最近。

鸭感染禽坦布苏病毒血清学的检测与分析

为了解中国鸭群感染禽坦布苏病毒流行病学的情况,采用建立的间接酶联免疫吸附试验(间接ELISA)对于2010年6月—2013年9月三年内采自福建、江西、浙江、广东、广西五省(区)发生产蛋异常鸭场的各品种开产种(蛋)鸭、后备种(蛋)鸭及肉鸭血样共6854份进行禽坦布苏病毒抗体的检测,并对结果进行了分析。结果表明:开产种(蛋)鸭、后备种(蛋)鸭及肉鸭中除肉用番鸭血清中未检出禽坦布苏病毒抗体外,其他品种鸭血清中禽坦布苏病毒抗体阳性率高低不一,揭示存在不同程度的禽坦布苏病毒感染,且感染谱扩大到肉鸭,为以上省(区)乃至中国鸭群需做好禽坦布苏病毒感染的预防提供了科学依据。

禽网状内皮组织增生病病毒的分离鉴定及其体外复制研究

禽网状内皮组织增生病是一种重要的肿瘤病和免疫抑制病。本研究从黑龙江省某鸡场分离到一株禽网状内皮组织增生病病毒,经间接免疫荧光、PCR和电镜鉴定,将该株病毒命名为HLJR0901。克隆HLJR0901主要保护性抗原的基因gp90,并进行了序列分析。HLJR0901与我国早期分离的南方毒株HA9901亲缘关系较远,而与美国和台湾的某些毒株同源性较高。HLJR0901的TCID_(50)为10^(5.2)/mL。通过绘制复制动力学曲线对HLJR0901在CEF细胞上的增殖动态规律进行了研究,发现d6和d7 REV增殖的滴度最高。该研究丰富了REV流行病学调查,为后续研究REV致病机制、免疫抑制机制等奠定基础。本研究不仅丰富了我国REV流行病学资料,也为深入研究REV致病机制、免疫抑制机制等奠定了基础。

2012-2021年文山州禽新城疫病原监测及免疫效果评估

为了解文山州禽新城疫病毒的流行情况,评估其免疫抗体水平及免疫效果,2012—2021年持续在文山州13个交易市场采集鸡、鸭喉气管样品2805份(鸡1485份、鸭1320份),采用新城疫RT-PCR方法对抗原进行检测;采集10411个养殖场(户)的80366份血清样品,采用血凝及血凝抑制试验测定新城疫免疫抗体效价,并对结果进行时间、群间和空间分布分析。结果显示:2012年新城疫病毒阳性率为8.33%,显著高于其他年份(P<0.05);2012—2021年鸭新城疫病毒综合阳性率为1.14%,较鸡新城疫病毒综合阳性率高了0.8个百分点,鸭的阳性率显著高于鸡的阳性率(P<0.05);规模场与散养户的新城疫免疫抗体水平差异显著(P<0.05)。结果表明:文山州2012—2021年新城疫整体免疫效果较好,达到了国家要求的70%以上标准,但2021年文山州新城疫免疫抗体水平有所下降,且存在一定的地区和场群差异,散养户和部分乡(镇)免疫水平偏低,存在发生疫情的风险。结果提示,文山州可依据地区和场群不均衡的抗体水平分布特点,制定有针对性的免疫措施,分类指导推进全州家禽新城疫防控工作。

禽流感病毒最新研究进展

本文针对2004年爆发的禽流感疫病,回顾了2004年至2005年期间禽流感病毒的研究进展。逆转录聚合酶链式反应技术为禽流感病毒的分型提供了一种快速、可靠、准确的方法。对H5N1禽流感病毒致病机制的研究发现,其强致病性在于它可以躲避人类抗病毒细胞因子的作用,NS1基因编码蛋白的92位谷氨酸在其中发挥了关键作用。由于禽流感疾病多引起结膜炎,并与病毒细胞受体的研究结果相结合,有科学家认为眼部特异性是禽流感病毒的一个总体特征。社会普遍关注禽流感疫苗的研制,人类和禽类流感A型病毒M2蛋白胞外区域的序列比对工作为疫苗研制提供了一条新的思路,依据神经氨酸酶抑制剂抑制病毒的出芽繁殖原理的疫苗正在研制过程中,而利用siRNA预防和治疗禽流感也是很有潜力的一种方法。禽流感病毒研究的另一个热点是病毒基因节段的重配问题。

上海地区禽与马血清中西尼罗病毒抗体的调查

西尼罗病毒病是一种以鸟类为中间宿主、以马为终末宿主的人兽共患病,给全球公共卫生带来严重威胁。本文用ELISA方法对上海地区禽和马中西尼罗病毒的血清学进行了调查,结果显示,在所调查的2005年到2009年14类95份禽血清和7个区341份马血清中,禽和马的抗体阳性率分别为5.26%和0%。结果表明,该病在上海已通过禽类开始广泛传播,虽尚未发现终末宿主感染,但已存在一定隐患。因此,应进一步监测该病的流行与传播情况。

禽主要病毒感染的比较蛋白质组学研究进展

比较蛋白质组学是蛋白质组学的一个重要分支,现已广泛应用于生命科学和医药学的各个领域,尤其在重大疾病研究、治疗和靶向药物的筛选方面得到了更为广泛的应用。比较蛋白质组学在兽医学领域研究的重点在于揭示病毒与宿主细胞的相互作用机制和病毒的分子致病机制,为动物病毒病的诊断、防控和新型疫苗的开发提供新的思路。本文从比较蛋白质组学的研究内容和主要研究技术、在兽医学研究中的应用以及在禽主要病毒感染中的研究进展进行综述。

禽流感病毒核酸疫苗脂质体的研究

:用逆相法、脂膜法制得了禽流感病毒血凝素 (HA)基因重组质粒pSVH7DNA(核酸疫苗 )脂质体 ;用荧光法测定了质粒DNA脂质体的包封率 ,两种方法所得脂质体的包封率分别为 15 .5 8± 1.5 5 % ,6.0 8±0 .3 5 % ,当在磷脂成份中加入阳离子十八胺时 ,脂质体的包封率分别为 70 .4 1± 6.4 9% ,4 6.5 6± 1.92 % 磷脂浓度和离子强度均能影响脂质体的包封率 ,前者能增加包封率 ,而后者使其减少 电镜结果表明 ,两种方法所得的脂质体为单室或多室球形脂质体混合物 ,其粒径大小分别为 163nm和 2 3

重组H8N4亚型禽流感病毒的拯救

将H8N4亚型流感病毒的HA和NA基因插入双向转录/表达载体pHW2000中,并与本实验室保留的适应毒株A/PR/8/34(H1N1)的6个质粒pHW2000-PB2、pHW2000-PB1、pHW2000-PA、pHW2000-NP、pHW2000-M、pHW2000-NS共转染293T和MDCK混养细胞,在细胞内部完成病毒粒子的组装,然后接种SPF鸡胚,经3代扩毒后,成功拯救了H8N4亚型重组流感病毒,并对其进行鉴定及生物学特性分析。本研究结果为该亚型禽流感病毒变异机理研究及疫苗的研制等奠定了基础。