鹅圆环病毒竞争PCR检测方法的建立

建立了基层临床定量检测鹅圆环病毒DNA的竞争PCR方法。以含有鹅圆环病毒(GoCV)全长基因组的pMDT-GoCV-yk01质粒为模板,PCR扩增出长度为625 bp的片段,克隆到pGEM-T Easy载体,获得目标模板,命名为pGoCV625-T;同时,构建与目标模板DNA有相同引物结合区、扩增片段长度为300 bp的竞争模板,克隆于pMD18-T,获得竞争模板,命名为pGoCV300-T。用定量竞争模板pGoCV300-T与系列倍比稀释的定量目标模板pGoCV625-T进行竞争PCR扩增,利用二者PCR产物的荧光强度(IOD)比值与目标模板浓度对数值间的关联性建立标准竞争曲线,推算出直线回归方程,建立GoCV竞争PCR方法。结果表明,竞争模板与目标模板共扩增的最低检测限为1.0μl1.0×104拷贝。初步应用试验结果表明,该方法可定量检测GoCV阳性鹅法氏囊组织中的GoCV DNA。