H9N2禽流感病毒陕西分离株HA基因的遗传变异分析

【目的】对H9N2禽流感病毒HA基因全序列进行分析,了解H9N2禽流感分离毒株HA基因的遗传变异情况。【方法】根据GenBank已发表的H9N2毒株的基因序列,设计了2对H9N2禽流感病毒HA基因特异性引物,运用RT-PCR方法对XL、LF和WN分离株进行了扩增,然后将PCR产物送出进行测序,用DNAstar 5.0软件对测序结果进行了分析。【结果】XL、LF和WN 3株H9N2分离株间HA基因的核苷酸同源性为99.7%-99.9%,推导氨基酸的同源性为99.1%-99.6%;分离株与参考毒株HA基因核苷酸的同源性为96.2%-99.0%,推导氨基酸的同源性为96.2%-98.6%。通过对3个H9N2分离株间HA基因核苷酸序列的比较,发现共有5个位点的核苷酸发生突变,其中4个位点核苷酸的改变导致相应的氨基酸发生突变。HA蛋白的7个受体结合位点比较保守,但是其在551-553位缺失了潜在的糖基化位点。【结论】3株H9N2分离株裂解位点氨基酸序列完全符合低致病性禽流感的特征RSSR↓G,但是LF裂解位点附近333位脯氨酸（Pro）突变为组氨酸（His）,即非极性氨基酸向极性带正电氨基酸（碱性氨基酸）转变,裂解位点的变化可能是H9N2禽流感病毒生物学特性改变的分子基础。

H9N2亚型禽流感病毒河南株NP基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

【目的】克隆H9N2亚型禽流感病毒(AIV)河南株核蛋白(NP)基因,并将NP主要抗原表位区在大肠杆菌中进行表达,为禽流感基因工程诊断抗原的制备和开发奠定基础。【方法】根据GenBank公布的禽流感病毒NP基因序列设计引物,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从H9N2亚型AIV河南株感染的鸡胚尿囊液RNA中扩增AIV河南株NP全基因,将扩增的PCR产物克隆到pGEM-T easy载体并进行测序。通过PCR和酶切方法将NP主要抗原表位区亚克隆到原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28NP,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达重组蛋白。【结果】测序结果表明,克隆的H9N2亚型AIV河南株NP基因全长为1497bp,包含1个完整读码框,编码498个氨基酸,与GenBank中不同来源、不同亚型的其他7株禽流感病毒NP基因的核苷酸同源性达到95%以上,氨基酸同源性达到98%以上。SDS-PAGE可检测到相对分子质量约为42 ku的重组蛋白。经1.0 mmol/L IPTG诱导5 h时,重组蛋白的表达量最高。Western blot分析表明,重组蛋白能够与H9亚型AIV阳性血清发生特异反应。【结论】NP基因非常保守,建立的表达系统能够表达NP蛋白且表达蛋白具有良好的免疫原性。

禽结核病的诊断与防控

禽结核病(tuberculosis)是由禽结核分支杆菌(Mycobacterium avium)引起禽类的一种慢性传染病。以渐进性消瘦、贫血、产蛋减少或不产蛋为特征。剖检可见各脏器有结核结节。从病原、流行病学特点、诊断与防控等方面进行阐述,以期为该病的防控提供参考依据。

家禽饮水免疫的影响因素及注意事项

饮水免疫简单易操作,可减少免疫接种工作量,降低生产成本和应激,是鸡场常用的免疫接种方法之一。通常采用饮水免疫的鸡病包括鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病、脑脊髓炎等。饮水免疫的操作细节往往决定了免疫成败。1影响饮水免疫的因素通过饮水接种疫苗的原则是向所有的家禽至少提供最小保护剂量的活疫苗,同时防止现场野毒在家禽中扩散。