抗鸽IgG单克隆抗体的制备及鉴定

鸽卵黄经硫酸铵盐析、酒精沉淀及凝胶 ( Sephadex G- 1 0 0 )柱层析后 ,得到较纯的鸽Ig G。以其免疫 BAL B/C小鼠 ,取其脾细胞与骨髓瘤细胞 ( SP2 /0 )进行细胞融合 ,经过酶联免疫吸附试验 ( ELISA)筛选 ,得到两株能稳定分泌抗鸽 Ig G的单克隆抗体 (以下称单抗 ) ,分别命名为 1 E5和 4C2。经亚类鉴定 ,该单抗均为 Ig G1亚类。在鸽 Ig G包被的 96孔板上用间接 ELISA方法测定单抗腹水的 ELISA效价 ,结果表明 ,单抗 1 E5和 4C2的 ELISA效价分别为 1∶ 1 60 0和 1∶ 640 0。免疫印迹试验结果表明 ,两株单抗均识别 Ig G重链 (分子量约为 66KD)。将单抗分别与鸡、鸭、鹅、鹌鹑和鸽等禽类血清包被的酶标板作间接 ELISA,结果表明单抗只与鸽血清的蛋白发生特异性反应 ,而不与其它禽类血清的蛋白反应。这说明抗鸽 Ig

鉴别鸽新城疫病毒野毒株与疫苗株La Sota的重组酶介导的等温扩增方法的建立

为建立一种能够区分鸽新城疫病毒(NDV)野毒株与常用新城疫疫苗株La Sota的重组酶介导的等温扩增方法(RAA),本研究针对基因Ⅵ型鸽源NDV和La Sota的NP基因设计出1对特异性引物,经过优化引物浓度、反应时间、反应温度,建立了能够区分鸽NDV野毒株与La Sota的RAA检测技术。对其特异性、敏感性和重复性进行测试,并应用建立的方法检测了45份临床样品。结果显示:该技术在15℃~39℃的恒温条件下,可于15 min内完成对目标基因的扩增;对禽支原体、大肠杆菌、沙门氏菌、传染性支气管炎病毒、禽流感病毒和衣原体等常见病原的检测结果均为阴性;重组质粒标准品检测下限为39.5 copies/反应;45份临床病死鸽样品的检测,检出28份阳性,与常规PCR方法的检测结果一致。本研究结果说明建立的RAA方法可应用于临床样品的快速检测。