抑制素免疫技术对反刍动物繁殖影响的研究进展

动物繁殖性能是规模化养殖中经济效益的重要指标,超数排卵和胚胎移植等生物技术已成为家畜繁殖和育种提高效率的重要手段,尤其是抑制素免疫技术在现代化动物繁殖育种体系中发挥重要作用,并取得突破性进展。文章综述了多年来通过抑制素免疫技术提高反刍动物繁殖性能的研究,旨在促进抑制素免疫技术在反刍动物繁殖领域更好地推广应用。

免疫抑制素(INH)试验对湘西黄牛受孕率影响

为了观察免疫抑制素(INH)对湘西黄牛受孕率的影响,试验随机选择60头湘西黄牛能繁母牛分成INH组和对照组,进行同期发情定时输精处理。结果表明:INH组总计怀孕牛为17头,受孕率56.67%,其中性控冻精怀孕6头,受孕率40%,安格斯冻精11头,受孕率73.33%。对照组总计怀孕牛为19头,受孕率63.33%,其中性控冻精怀孕11头,受孕率73.33%,安格斯冻精8头,受孕率53.33%。INH组的湘西黄牛母牛使用性控冻精和非性控冻精的受孕率均低于对照组,说明INH免疫对湘西黄牛的受孕率无显著影响。

猪干扰素β基因的分子克隆与测序

采用 PCR技术扩增和克隆了猪β干扰素 (IFN-β)基因。克隆片段长 6 6 8个核苷酸 ,编码 186个氨基酸 ;其中 ,76～ 6 36位含有 1个 ORF,蛋白分子量 2 1.

激素对家禽卵泡发育的调节

从家禽的生殖生理特点出发 ,根据近年来有关研究资料 ,系统地综述了促性腺激素释放激素、促性腺激素、孕激素、肾上腺皮质激素、性腺激素、细胞因子、褪黑素和前列腺素对家禽卵泡发育和排卵的调节机理 ,对于促进家禽卵泡发育、提高家禽繁殖性能提供了科学的参考。

中药复方“促孕散”中生物碱的提取方法及其促孕活性研究

对中药复方"促孕散"中生物碱的最佳提取方法及其促孕活性进行研究,采用超声提取技术,以盐酸水苏碱的含量为评价指标,通过正交试验确定"促孕散"中生物碱的最佳提取方法,测定"促孕散"中生物碱提取物对21日龄雌性小鼠子宫增重、卵巢卵泡发育的影响。结果表明:以60%乙醇为溶剂、料液比1∶10、超声提取3次、每次20min为最佳提取方法,生物碱提取物对小鼠子宫增重、卵巢卵泡发育的影响极显著高于空白组(P<0.01),"促孕散"生物碱提取物具有较强的促孕活性。

褪黑素对内毒素血症山羊肝功能损伤的影响

4月龄山羊24只,随机分成4组,每组6只,即对照组(生理盐水,NS),内毒素血症组(脂多糖LPS 1 mg/kg),内毒素血症褪黑素组(褪黑素MT 1 mg/kg),褪黑素组。在注射后0.5、1、2、3、4、5、6 h采血,测定不同组别及不同时间段血清中ALT、AST、ALP、CP、TP、ALB值。结果:LPS组血清中的ALT、AST、ALP活性明显高于NS组;LPS+MT组ALT、AST、ALP酶活性也有所升高,但至6 h时基本恢复到NS组的水平,而MT组中的各项指标与NS组差异不显著(P>0.05)。LPS组血清CP、TP、ALB值明显低于NS组;LPS+MT组与NS组无显著差异。结果表明MT可减缓内毒素对肝脏的损伤作用。

两种β_2受体激动剂快速免疫检测方法

分别以偶氮方法和碳化二亚胺（ＥＤＣ）方法将β２受体激动剂克伦特罗（ＣＬ）和塞曼特罗（ＣＩＭ）连接到载体蛋白上，并以连接物免疫家兔，分别制备兔抗ＣＬ和ＣＩＭ抗血清，经间接ＥＬＩＳＡ和间接抑制ＥＬＩＳＡ检测抗血清效价和特异性，并在此基础上建立了ＣＬ和ＣＩＭ快速免疫检测方法。２种抗血清工作浓度分别为１∶１００００和１∶５０００。ＣＬ和ＣＩＭ免疫检测范围分别为１．９ｎｇ～１５．６μｇ和０．４７７ｎｇ～１．８５μｇ。２种β２受体激动剂快速免疫检测方法的建立为监督畜牧生产上滥用ＣＬ和ＣＩＭ，检测肉品ＣＬ和ＣＩＭ残留提供了一种简便、灵敏、特异的手段。

移植源于人单克隆胰腺干细胞的胰岛治疗大鼠糖尿病

将人单克隆胰腺干细胞（1．0×10^4个／孔）接种在铺有明胶的6孔板内，体外定向诱导其分化为包含大量β细胞的类胰岛。双硫腙染色呈阳性。RTPCR检测，转录表达胰岛素。Sprague-Dawley成年大鼠30只，6只腹腔注射缓冲液作正常对照，24只腹腔注射2％链脲菌素制备糖尿病模型。注射后48h及5、8d，断尾采血，测定全血血糖。随机取3次血糖均〉16．65mmol／L的糖尿病大鼠用于移植试验。DMEM稀释每个阳性孔诱导胰岛细胞至100μL，分别移植在12只糖尿病大鼠左侧肾囊内。6只糖尿病模型对照大鼠左侧肾囊内分别注射100μL DMEM。实验大鼠每10d断尾测全血血糖1次。在为期67d的移植试验中，12只诱导胰岛移植大鼠血糖水平从18．93～25．78mmol／L降至6．32～11．47mmol／L。除2只死于移植感染外，其余存活了54～67d。6只糖尿病对照大鼠血糖水平持续在18．73～25．96mmol／L。1只感染死亡，5只存活了16～42d。6只正常对照大鼠血糖基本保持在3．56～5．83mmol／L，死亡率为0。结果表明，人单克隆胰腺干细胞体外定向诱导能分化为包含大量β细胞的功能性胰岛，移植这些诱导胰岛能降低糖尿病大鼠血糖水平，延长其寿命。

蛋白酶解物对仔猪胃窦胃泌素分泌的影响

为研究食物蛋白源活性肽对仔猪胃窦胃泌素分泌的影响,通过模拟猪胃内消化环境,制备了大豆蛋白酶解产物、酪蛋白酶解产物和面筋蛋白酶解产物的溶液和对照液,对 10 日龄仔猪离体胃窦进行体外灌流。结果表明,3 种蛋白的胃蛋白酶解物对 4 头试验仔猪的胃窦黏膜胃泌素的分泌均有促进作用,但以大豆蛋白酶解物的作用最强。其中大豆蛋白酶解物组的 4 头猪胃泌素分泌分别比相应的对照组增高 99.98%、65.12%、30.45%和9.48%,面筋蛋白酶解物组的 4 头猪胃泌素分泌分别比相应的对照组增高34.66%、20.35%、5.56%和3.87%,酪蛋白酶解物组的4头猪胃泌素分泌分别比相应的对照组增高107.12%、56.26%、6.77%和0.72%。

促孕灌注液中总黄酮和总生物碱的含量测定

本文用分光光度法测定促孕灌注液的总黄酮和总生物碱，以控制其质量，经多批重复测试，效果满意。

孕酮对大鼠小肠黏膜结构及其相关细胞的影响

为了研究孕酮对小肠黏膜屏障结构的影响,将24只Wistar健康雌性大鼠进行同期发情处理后,于发情间情期随机分为4组。对照组:只做假手术;OVX组:双侧卵巢摘除;OVX+P1组:双侧卵巢摘除+孕酮2 mg/kg;OVX+P2组:双侧卵巢摘除+孕酮10 mg/kg,连续用药7 d后宰杀,观察小肠黏膜上皮细胞、上皮内淋巴细胞、杯状细胞形态结构和数量的变化。结果表明,和对照组相比,OVX组大鼠的小肠黏膜结构有明显损伤,绒毛萎缩,绒毛高度和隐窝深度的比值(V/C)明显降低,上皮内淋巴细胞数量和杯状细胞的数量减少;补充2种剂量的孕酮后,各项指标比OVX组有不同程度的改善,其中OVX+P1组与OVX组差异显著,且好于OVX+P2组。证实,卵巢摘除对大鼠小肠黏膜屏障结构有严重影响,补充适量孕酮可以在一定程度上减轻对黏膜屏障结构的影响。

不同剂量地塞米松及不同免疫调节剂对鸡免疫功能的影响

本文旨在研究不同剂量地塞米松及不同免疫调节剂对鸡免疫功能的作用,以确定临床上地塞米松的用量上限及寻找一种效果较好的免疫调节剂。将10日龄鸡随机分为对照组、0.1、0.5、1.5 mg/kg●BW地塞米松组,通过饮水添加地塞米松,检测多种免疫指标。结果表明地塞米松可影响正常鸡的免疫功能,0.1、0.5、1.5 mg/kg●BW地塞米松均可极显著抑制鸡外周血T淋巴细胞增殖(P<0.01),但对B淋巴细胞无明显影响;0.5、1.5 mg/kg●BW地塞米松可极显著抑制鸡白细胞介素-2的活性(P<0.01);0.5、1.5 mg/kg●BW地塞米松组的新城疫抗体水平显著低于对照组(P<0.05);0.5、1.5 mg/kg●BW地塞米松组淋巴细胞比率显著低于对照组(P<0.05);地塞米松组的鸡总体重、免疫器官及法氏囊指数显著低于对照组。将10日龄鸡随机分为4组,分别为对照组、干扰素组、干扰肽组和胸腺肽组,试验前5 d所有组饮水中均添加0.5 mg/kg●BW地塞米松,5 d后各组分别在饮水中添加相应的免疫调节剂,试验结束后检测免疫指标。结果表明:干扰素、胸腺肽组的T淋巴细胞转化率极显著高于对照组(P<0.01);胸腺肽组的新城疫抗体水平显著高于对照组(P<0.05),白细胞数、淋巴细胞数极显著高于对照组(P<0.01),总体重显著高于对照组(P<0.05);干扰素组的脾脏指数显著高于对照组(P<0.05)。试验结果说明当地塞米松的用量超过0.5 mg/kg●BW可抑制鸡的免疫功能,而干扰素和胸腺肽对鸡群有免疫调节作用,可在一定程度上提高鸡群的免疫力。

克伦特罗单克隆抗体的研制及初步鉴定

为制备克伦特罗(clenbuterol,CL)单克隆抗体,鉴定其特性,采用重氮化法合成克伦特罗-人血清白蛋白(CL-HSA)作为免疫原免疫小鼠,通过杂交瘤技术建立杂交瘤细胞株,利用体内诱生法制备单克隆抗体,用间接ELISA和间接竞争ELISA分别测定抗体效价和特异性。将细胞反复冻存和传代,考察稳定性。获得细胞株C611,诱生腹水中抗体的效价为1∶64 000,抗体对CL的灵敏度为0.1 ng/mL,IC50约为1 ng/mL,与其他同类药物交叉反应均<7%。细胞冻存、复苏、传代7次后分泌的抗体性质稳定。结果表明,制备的单克隆抗体特异性强,可用于CL快速检测试剂盒的研制。

猪IFN-β的克隆与原核表达

根据已发表的AY687281基因序列,设计1对特异性引物,采用PCR方法从长白猪白细胞基因组中扩增到猪β干扰素基因,将PCR产物克隆到pMD18-T载体,进行序列测定。序列分析表明,获得的猪β干扰素基因全长561bp,编码186个氨基酸,与GenBank中AY687281基因序列同源性达99.2%,在28、34、128位核苷酸发生了点突变,由G变为A,由C变为G,由A变为G,由C变为T,导致10、12、43位氨基酸由A变为T,L变为V,E变为G,而在177位点核苷酸的突变没有改变氨基酸。将该基因克隆到pEGX-4T-1表达载体中,转化宿主菌Rosetta,对猪β干扰素进行原核表达。重组表达菌经IPTG诱导后,得到高效表达,所表达蛋白约为43 000,占总蛋白的39.3%,表达产物主要为包涵体。纯化后的包涵体具有抗病毒的生物学活性,能抑制口蹄疫病毒(FMDV)增殖。

异黄酮植物雌激素——大豆黄酮对雄性动物生长及其有关内分泌的研究

本实验室在异黄酮植物雌激素－大豆黄酮对大鼠、肉用仔鸡、仔猪和反刍动物生长及有关激素水平的影响方面进行了系列研究。结果表明：具有弱的雌激素样活性的大豆黄酮可显著增加雄性动物和公鸡的增重及饲料利用效率，提高血液睾酮、β－内啡肽、生长激素、胰岛素样生长因子一Ⅰ、三碘甲腺原氨酸、甲状腺素和胰岛素水平，但却使血液脲氮和胆固醇浓度降低，从而促进肌肉蛋白质沉积，加速肌肉生长和发育。然而，大豆黄酮对雌性动物生长和代谢激素状态无显著影响。并讨论了有关调控雄性动物肌肉生长的神经内分泌机制。

催乳素及其受体的研究进展

催乳素是影响泌乳的重要激素之一,同时也是影响生育的重要激素,因此对它的研究越来越引起人们的关注。文章依据近几年的研究进展,从催乳素及其受体的结构、调节机制、作用及其检测方法等方面进行了论述,以期为今后的研究工作提供参考。

Ge-132诱导鸡体产生外源性IFN的研究

以Ge - 1 32为诱生剂诱生鸡体产生外源性干扰素。将鸡胚成纤维细胞 -水泡性口炎病毒作为鸡干扰素 (IFN)的检测系统 ,对不同种细胞、不同的细胞浓度、不同的IFN诱生剂等诸因素对IFN产生的影响进行了比较。试验结果表明 :(1 )在Ge- 1 32、鸡新城疫病毒 (NDV -F)、植物血凝素 (PHA)、聚肌胞 (polyI:C)四种诱生剂中 ,诱生能力差异极显著(P <0 .0 1 ) ,且以Ge- 1 32诱生IFN的能力为最强 ,其他依次为NDV -F、PolyI :C、PHA ;(2 )鸡脾细胞和鸡白细胞产生的IFN效价高于鸡胚成纤维细胞 ;(3)IFN诱生剂最佳诱生剂量 :鸡NDV -F为 1 2 8HAU/mL ;Ge - 1 32为 70 μg/mL ;PolyI:C为 5 0 μg/mL ;PHA为 40

IGF-Ⅰ调节机体生长发育的研究进展

动物的生长受基因、内分泌、环境等多种因素的调控,是一个非常复杂的过程,但最终通过生长轴来实现。胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）是生长激素（GH）发挥作用的重要介导者,负反馈调节GH的分泌,对组织器官的生长发育具有重要意义。本文主要综述胰岛素样生长因子对机体生长发育的主要作用。