氯化-N-十二烷基吡啶-1-乙酰胺杀灭或抑制病原体的活性研究

季铵盐类表面活性剂是一类低毒、高效的广谱消毒剂,能杀灭多种细菌和病毒,在养殖业和医学等领域的消毒中应用前景广阔。研究旨在明确自主合成的季铵盐类表面活性剂氯化-N-十二烷基吡啶-1-乙酰胺(C12cmpC)对禽源致病菌和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的抗菌抗病毒活性。通过MIC、MBC和时间杀菌试验,明确C12cmpC的体外杀灭、抑制革兰阴性和阳性细菌的效果。通过细胞形态观察、细胞活性检测和BVDV m RNA的qRT-PCR检测,初步明确C12cmpC的抗病毒活性。结果表明,C12cmpC对鹅大肠杆菌(QS195313)的MIC为250 mg·L^(-1),MBC为500 mg·L^(-1)。C12cmpC对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌标准株的MIC为31.25 mg·L^(-1),MBC为62.5 mg·L^(-1)。此外,C12cmpC对MDBK细胞的最大安全浓度为5 mg·L^(-1)。其与BVDV作用1、5、30、60 min后,MDBK细胞中病毒m RNA水平均显著降低。研究表明新型季铵盐类表面活性剂氯化-N-十二烷基吡啶-1-乙酰胺具有较好的抗菌抗病毒活性,研究为新型消毒剂的开发提供了理论依据。

乙酰乙酸通过抑制Nrf2诱导奶牛乳腺上皮细胞线粒体损伤

为探究乙酰乙酸(Acetoacetic acid,ACAC)是否通过抑制核转录因子NF-E2相关因子2(Nuclear factor E2-reate d factor2,Nrf2)导致奶牛乳腺上皮细胞线粒体损伤。在奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)中添加0、0.6、1.2或1.8 mmol·L-1ACAC处理24 h;用10μmol·L-1的萝卜硫素(Sulforaphane,SFN)预处理MAC-T 24 h后,加入1.2 mmol·L-1ACAC处理24 h。流式细胞术检测活性氧(Reactive oxygen species,ROS);采用JC-1染色检测线粒体膜电位变化情况;通过q-PCR测定线粒体氧化磷酸化复合物Ⅰ-Ⅴ(Oxidative phosphorylation complexesⅠ-Ⅴ,COⅠ-Ⅴ)的基因表达情况以及线粒体生物合成调节因子Nrf2、过氧化物酶体增殖体激活受体γ-γ活化剂1-α(Peroxlsome proliferator-activated re ceptor-γ coac tlvator-1α,PGC-1α)、线粒体转录因子A (Mitoc hondrial transcription factor A,TFA M)、核呼吸因子-1 (Nuclear respiratory fac tor-1,Nrf1)、线粒体DNA(Mitochondrial DNA,mt DNA);使用试剂盒检测腺嘌呤核苷三磷酸(A denosine triphosphate,ATP)含量。结果显示,ACAC处理后,ROS的含量显著升高(P<0.05),而线粒体膜电位显著下降(P<0.05),并且COⅠ、COⅡ、COⅢ、COⅣ和COⅤ的m RNA表达水平显著降低(P<0.05),PGC-1α、TFAM、Nrf1以及Nrf2的m RNA表达量显著下降(P<0.05),mtDNA含量显著降低(P<0.05),ATP含量显著降低(P<0.05),而SFN预处理缓解了上述影响。结果表明,ACAC通过抑制Nrf2信号通路诱导了MAC-T细胞线粒体损伤。

高效液相色谱-串联质谱法同时测定动物尿液中48种兴奋剂

建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法同时检测动物尿液中β_(2)-激动剂类、β-阻断剂类、利尿剂类、糖皮质激素类、蛋白同化制剂类等48种兴奋剂的检测方法。样品经1%甲酸乙腈提取,加氯化钠使其分层后,40℃下氮气吹干,乙腈水溶液(V/V,5∶5,含0.1%甲酸)复溶,采用C18色谱柱分离,用电喷雾正(ESI+)负(ESI-)模式扫描,多反应监测模式(MRM)进行检测分析,单点内标或外标法进行定量。克仑特罗等48种兴奋剂能实现很好的分离,重复性良好,加标水平为定量限时,目标化合物的回收率在60%~120%之间,相对标准偏差为1.0%~19.3%。该方法简单、快速、准确,极大地提高了检测效率,已应用于实验室常规兴奋剂检测,为保障体育赛事的顺利进行提供了有力的技术支撑。

氟苯尼考可溶性粉含量测定的不确定度分析

为分析评定氟苯尼考可溶性粉含量测定的不确定度,通过高效液相色谱(HPLC)法进行测定,选用C_(18)色谱柱,乙腈-水-冰醋酸(100∶197∶3)为流动相,224 nm波长下检测,并建立HPLC法测定氟苯尼考可溶性粉含量的数学模型。分析各因素引入的标准不确定度,评定置信概率95%时测定结果的扩展不确定度,给出不确定度评定报告。测定结果表明,含量测定的不确定度主要源于称量、溶液配制及峰面积测定过程。含量测定的标准不确定度为1.16%,扩展不确定度为2.32%。含量测定结果表示为(97.3±2.32)%,包含因子k=2。该方法适用于HPLC法测定氟苯尼考可溶性粉含量的不确定度评定,可为氟苯尼考可溶性粉的质量控制和客观评价提供参考。

超高效液相色谱-串联质谱法测定猪尿中7种α2-受体激动剂残留

建立了检测猪尿中7种α2-受体激动剂残留的超高效液相色谱-串联质谱分析方法。试样经调节pH,乙酸乙酯提取并浓缩、净化后,经超高效液相色谱-串联质谱测定,外标法定量。结果表明,7种α2-受体激动剂在1~80μg/L浓度范围内均呈良好线性关系,相关系数均大于0.99。7种目标化合物检测限为0.1μg/L,定量限为0.3μg/L。在1~20μg/kg添加浓度范围内回收率为60%~110%,相对标准偏差小于15%。该方法方便快捷,定性准确,可为猪尿中该类兽药残留的日常监控提供方便、快捷的检测方法支持。

磺胺二甲嘧啶钠注射液和磺胺间甲氧嘧啶钠注射液细菌内毒素检查方法的改进研究

对磺胺二甲嘧啶钠注射液和磺胺间甲氧嘧啶呐注射液的细菌内毒素检查方法的拟定标准进行了改进,通过固定浓度的盐酸溶液溶解供试品,再使用无热原滤膜过滤的方法排除了干扰。通过上述供试品前处理方法的改进,检验人员无需采用特殊灵敏度的鲎试剂,亦可完全消除干扰作用,增强了标准的可执行性。

UPLC-MS/MS测定牛血浆中加米霉素方法的建立

建立牛血浆中加米霉素含量的UPLC-MS/MS检测方法。血浆样品经甲醇沉淀蛋白,外标法定量,使用Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱,以甲醇:10 mM乙酸铵缓冲液为流动相,流速0.3 mL/min;柱温:50℃;进样量:10μL。三重四级杆质谱仪电喷雾离子源(ESI),正离子扫描、多反应监测(MRM)。考察方法的线性范围、准确度与精密度、稳定性和稀释可靠性。结果显示,加米霉素出峰时间在1 min左右,本方法在1~100 ng/mL浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数r≥0.999,检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别为0.5 ng/mL和1 ng/mL。3个浓度(1、50和100 ng/mL)的空白血浆添加样品批内和批间平均回收率分别在85.23%~95.63%和87.73%~93.97%之间,相对标准偏差(RSD)分别在1.402%~13.92%和2.903%~8.680%之间。准确度和精密度、稳定性及稀释可靠性均符合生物样品分析的相关要求。本方法可用于牛的血浆中加米霉素的浓度测定及药代动力学研究。

三氟氯氰菊酯对鸡胚的发育毒性及雏鸡生长发育的评价

目的:探讨三氟氯氰菊酯(Lambda-cyhalothrin,LCT)对鸡胚的发育毒性及其出壳后21 d内生长发育的影响。方法:选择已孵化7胚龄的草鸡胚蛋160枚,随机分为5组,每组32枚。Ⅰ组(对照组)向每枚鸡胚的卵黄囊注射0.1 mL生理盐水,Ⅱ~Ⅴ组(处理组)分别向每枚鸡胚的卵黄囊注射0.1 mL 2.5、25、250、2500μg/mL LCT,灭菌石蜡封口,继续孵化至雏鸡出壳,期间分别测定孵化第10、18天的死胎数、生存率以及孵化率、弱雏率、出壳重与第18天胚蛋重的比值等指标;雏鸡出壳后饲喂21 d分别测定体质量、胸肌质量、腿肌质量、部分内脏器官指数、血清生化指标及肝肾氧化应激指标。结果:Ⅴ组的死胚数、死胚率、弱雏率明显高于对照组和Ⅱ~Ⅳ组;Ⅱ~Ⅳ组雏鸡21日龄的体质量、胸肌和腿肌质量低于对照组,血清CREA与UREA-N含量、AST和ALT活性,与对照组相比无显著变化;21日龄时,Ⅲ组肝组织和Ⅱ组肾组织的GSH含量明显升高(P<0.01或P<0.05),Ⅲ组肝组织MDA含量显著增加(P<0.05),各试验组肝、肾组织的SOD活性有增加趋势,但与对照组相比无显著变化(P>0.05)。结论:高剂量LCT暴露对鸡胚具有明显的发育毒性,胚胎期中低剂量LCT暴露抑制出壳后雏鸡的早期生长发育,氧化应激损伤是其毒性机制之一。

黔中金荞麦提取物安全性评价及对大鼠肠道菌群的影响

为探讨黔中金荞麦提取物临床使用的安全性及对大鼠肠道菌群的影响,以昆明小鼠和大鼠为研究对象,进行急性毒性和亚慢性毒性试验。急性毒性试验测定黔中金荞麦提取物的半数致死量(LD_(50)),大于5.00 g/kg;亚慢性毒性试验,黔中金荞麦水、醇提取物各剂量组对大鼠体质量无不良影响,醇提物高剂量组可致部分大鼠死亡,其余各组对大鼠外观行为无不良影响。与对照组比较,黔中金荞麦醇提物低剂量组大鼠白细胞(WBC)和淋巴细胞(LYMPH)显著性升高(P<0.05);黔中金荞麦醇提物中剂量组大鼠总蛋白(TP)极显著降低(P<0.01),尿素氮(BUN)和雌性大鼠脾脏系数呈显著降低(P<0.05);黔中金荞麦醇提物高剂量组甘油三酯(TG)无显著性变化(P>0.05),其余血液生化指标均有显著或极显著变化,雌性大鼠脾脏系数呈极显著降低(P<0.01)。黔中金荞麦水提物高剂量组TP极显著降低(P<0.01),TG显著增加(P<0.05)。组织病理学检测表明,高剂量的黔中金荞麦水提物和醇提物对大鼠肝脏和肾脏结构具有一定影响。与对照组比较,黔中金荞麦水提物组大鼠肠道菌群丰度减少,醇提物组丰度增加,饲喂提取物后菌群多样性和物种均匀度均减少。水提物、醇提物及对照组优势菌群门类均为拟杆菌门和厚壁菌门,最优菌属分别为唾液乳酸杆菌属(9.06%)、拟杆菌属(37.67%)和拟普雷沃菌属(5.91%)。线性判别分析效应大小分析(LEfSe)表明,与对照组比较,黔中金荞麦水提物组拟杆菌属、醇提物组乳杆菌属等有益菌相对丰度增加。根据外源性化学物急性毒性分级标准,黔中金荞麦水提物和醇提物为无毒物质;结合亚慢性毒性试验结果和病理组织观察结果,高剂量的黔中金荞麦水提物(40 g/kg)和醇提物(34 g/kg)可影响大鼠肝脏和肾脏结构;黔中金荞麦提取物可改变大鼠肠道菌群结构,调节菌群种类和数量。

HPLC-DAD法测定兽药恩诺沙星注射液中非法添加呋塞米

建立了兽药恩诺沙星注射液中非法添加呋塞米的HPLC-DAD检查方法。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以水-四氢呋喃-冰醋酸(70:30:1)为流动相;柱温30℃;流速1.0mL/min;进样量20μL;二极管阵列检测器检测,采集波长范围为190~400nm,提取波长为272nm。通过液相色谱保留时间、紫外吸收光谱和峰纯度分析对非法添加物进行确认。结果表明,呋塞米与其他组分在色谱条件下分离情况良好。呋塞米在2.0~100.0μg/mL范围内线性关系良好,R^(2)=0.9999。回归方程为:Y=1.0629X+0.0685,R^(2)=1.0000。按高、中、低三个浓度水平添加呋塞米,每个浓度水平各平行配制3份阳性添加样品溶液进行测定,每个平行进样2次,测得平均回收率为100.8%,RSD=1.0%。方法的检测限为1.0μg/mL。方法准确,可靠,可以用于检查兽药恩诺沙星注射液中非法添加呋塞米。

Ames试验与HPRT试验两种方法对6种氧化型染发剂的检测

目的:通过细菌回复突变试验(Ames试验)和体外哺乳动物细胞基因突变试验(HPRT试验)两种方法检测氧化型染发剂,并对其结果进行分析比较,探讨两种方法在检测氧化型染发剂致突变性中的应用。方法:Ames试验采用一组营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌检测6种氧化型染发剂。各受试物分别设4个可供分析的剂量组,剂量范围从312~10 000μg/皿,通过计算受试物回复突变菌落数,判定受试物的致突变性。HPRT试验采用体外培养的V79细胞,各受试物分别设4个可供分析的剂量组,剂量范围从4.88~5 000μg/mL,研究6种氧化型染发剂致细胞HPRT位点突变的频率,通过计算受试物引起的V79细胞的突变频率,判定其致突变性。结果:在Ames试验中,无论加与不加体外代谢活化系统,受试物在2 500~10 000μg/皿剂量范围均存在回变菌落数超过溶剂对照组两倍的情况,并有剂量-反应关系,表明Ames试验检测6种氧化型染发剂均为阳性结果。而在HPRT试验中,无论加与不加体外代谢活化系统,各受试物在>2 500μg/mL时具有明显毒性作用,在9.75~2 500μg/mL剂量范围细胞突变频率与阴性对照组比较,差异均无统计学意义,表明HPRT试验检测6种氧化型染发剂均为阴性结果。结论:由于氧化型染发剂有明显的细胞毒性,导致HPRT试验无法设计更高的剂量,从而无法反映受试物致突变性的真实水平。而Ames试验具有简单、快速、经济等优点,可作为检测氧化型染发剂致突变性的首选方法。

气相和液相色谱法在氟苯尼考残留检测中的应用进展

气相和液相色谱法常用于检测氟苯尼考在动物产品和环境样品中的残留水平。本文比较了气相色谱和液相色谱检测氟苯尼考的优缺点,同时重点对动物产品和养殖场相关环境样品中氟苯尼考的提取和净化方法进行了比较分析。不同类型样品前处理方法有不同,乙腈是良好的蛋白沉淀剂,有助于动物产品的纯化;环境样品的前处理比动物产品更复杂,色谱串联质谱能够有效提高其检测效率。本文旨在归纳氟苯尼考的残留检测的色谱方法,为动物类食品安全和氟苯尼考环境风险评估提供参考。

不同气调包装牛肉贮藏过程中肉质变化规律研究

研究不同气调包装方法对保存期间的牛肉品质的影响,探索适宜新疆地区生鲜冷却牛肉保鲜的包装方法。将宰后的牛肉采用5种不同的气调包装放在4℃条件保存,对牛肉保鲜效果进行研究,测定分析理化、菌落总数、色泽等主要指标。结果表明,在不同气调包装条件下,贮藏过程中牛肉样品的理化指标变化和微生物繁殖情况不同,气调包装C组的牛肉在保持较好肉色的情况下,其挥发性盐基氮(TVB-N)、pH、菌落总数在24 d之内依然能保持较低水平。说明气调包装对冷却牛肉的保鲜效果较好,能够明显延长牛肉的货架期。

人参叶口服液对大鼠的亚慢性毒性试验

将Wistar大鼠随机分为4组,3个剂量组(以人参皂苷计)分别按40、80、160 mg/kg体重给大鼠灌胃,对照组给予同体积生理盐水,1次/d,连续28 d,记录大鼠毒副反应。停药后继续观察14 d,测试大鼠体重、血液学指标、血液生化学指标、脏器指数。结果表明,各剂量组大鼠与对照组比较,给药期与恢复期的体重增长,血液学指标、血清生化指标、脏器指数均无显著性差异(P>0.05)。试验结果表明,人参叶口服液连续给药28 d,大鼠未出现无不良反应,停药14 d后亦未出现迟发性不良反应。

兽药残留及其对生态环境影响的研究进展

兽药及饲料添加剂的大量使用,使动物性食品中药物残留越来越严重,对人类的健康和公共卫生构成威胁;同时也对土壤环境、表层水体等带来不良影响,并通过食物链对生态环境产生毒害作用,影响动植物和微生物的生命活动以及生态系统平衡。对有关兽药残留及其对生态环境影响方面的研究进行了论述。

辛基酚对成年雄性小鼠血浆和脾脏抗氧化功能的影响

为探讨环境雌激素辛基酚对成年雄性小鼠血浆与脾抗氧化功能的影响,将20只成年雄性昆明小鼠随机分为4组,5只/组,即橄榄油溶剂对照组和辛基酚处理组。处理组分别为0、1、10、100mg/kg辛基酚剂量组,采用试剂盒测定血浆和脾组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量。结果表明,辛基酚显著升高血浆和脾组织中NO、MDA含量并降低血浆和脾组织中SOD、GSH-Px活性及T-AOC水平。说明辛基酚造成血浆和脾组织氧化与抗氧化系统的平衡受到破坏,从而降低抗氧化能力,造成氧化损伤。

浅析ELISA的基本原理与注意事项

介绍了酶联免疫吸附测定法(ELISA)的概况与基本原理,分析了在ELISA中需要注意的事项。

SPE-HPLC法测定鸡蛋中灭蝇胺—环丙氨嗪

本试验研究建立了用NH2柱和97%乙腈水溶液做流动相洗脱测定鸡蛋中灭蝇胺-环丙氨嗪残留量的高效液相色谱法,鸡蛋均质后经20%氨水乙腈溶液重复提取2次、浓缩、过C18固相萃取小柱净化等处理后上机检测,环丙氨嗪在0.02～1.0 μg/ml浓度范围内呈线性相关,标准曲线的相关系数(r)为0.9998,在0.02,0.05,0.10 mg/kg添加浓度,回收率为84.5%～95.2%,变异系数为3.9%～6.8%.检测限为0.02 mg/kg,定量限低于0.05 mg/kg.

镉对鸡抗氧化系统功能的影响及硒颉颃的效应

30只 10 0日龄海兰公鸡随机分为对照组、加镉组、加硒镉组 ,对照组饲喂基础日粮 ,加镉组饲喂基础日粮 +Cd Cl215 0 m g/ kg,加硒镉组饲喂基础日粮 +Cd Cl2 15 0 mg/ kg+Se10 m g/ kg,分笼常规饲养 ,试验期为 6 0 d,复制出鸡亚慢性镉中毒及硒颉颃模型。试验结果显示 ,睾丸脏器系数为对照组、加硒镉组至加镉组依次降低 ;血清和睾丸中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH- Px)活性为对照组、加硒镉组至加镉组依次降低 ,变化比较明显 ;血清和睾丸中超氧化物歧化酶 (SOD)活性为对照组、加硒镉组至加镉组依次降低 ,变化比较明显 ;血清和睾丸中丙二醛 (MDA)含量为对照组、加硒镉组至加镉组依次升高。揭示了镉对鸡抗氧化系统功能的影响 ,构成了镉损伤机体的病理学基础。补硒后可降低镉的损伤。

HPLC-MS/MS法测定饲料中甲硝唑和二甲硝咪唑含量

建立了高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)快速测定饲料中甲硝唑和二甲硝咪唑的含量。饲料样品用乙酸乙酯提取后,经PCX固相萃取柱净化处理,过0.22μm滤膜,以乙腈和含0.1%的甲酸水溶液为流动相,经Eclipse Plus C18色谱柱(3.0 mm×100 mm,1.8μm)分离,多级反应监测(MRM)正离子模式下扫描分析。结果表明,甲硝唑和二甲硝咪唑在0.2~50μg/L范围呈良好线性,线性相关系数均大于0.997,检出限均为0.2μg/kg,定量下限均为0.5μg/kg。样品在定量下限1倍、2倍、10倍3个加标水平下的平均回收率为95.3%~103.2%,相对标准偏差(RSD)为4.67%~8.46%。该方法灵敏、简便、准确,可用于饲料中甲硝唑和二甲硝咪唑的检测分析。