芦丁对玉米赤霉烯酮诱导的雌鼠生殖器官损伤的缓解作用

试验旨在研究芦丁对玉米赤霉烯酮诱导的雌鼠生殖器官损伤的缓解作用。采用2×2双因素试验设计,将24只28~34日龄的昆明系雌鼠随机分为4组,即对照组(基础日粮)、芦丁组(基础日粮+500 mg/kg芦丁)、ZEN组(基础日粮+10 mg/kg ZEN)、ZEN+芦丁组(基础日粮+500 mg/kg芦丁+10 mg/kg ZEN),每组6个重复,每个重复1只鼠。预试期7 d,正试期28 d。结果表明:与对照组相比,日粮ZEN可导致小鼠子宫器官指数下降(P<0.05),导致卵巢组织生长卵泡与凋亡卵泡增多,下调血清雌二醇(E2)水平(P<0.01),下调卵巢StAR、CYP11A1基因表达量(P<0.05),上调小鼠卵巢内Caspase 8基因表达水平(P<0.05);日粮中添加芦丁可使卵巢组织中生长卵泡增多,上调血清E2水平(P<0.05);芦丁与ZEN对卵巢器官指数、血清睾酮(T)、促卵泡素(FSH)、黄体生成素(LH)含量及卵巢Caspase 3基因表达水平存在交互效应(P<0.05),芦丁通过抑制卵巢细胞凋亡、调控卵巢生殖与凋亡相关基因表达、调控生殖激素的分泌,从而促进卵泡生长和卵巢发育,缓解ZEN对雌鼠生殖系统的毒性。

柚皮素对LPS诱导的小鼠乳腺组织炎性损伤的保护作用

本研究旨在探讨柚皮素(Naringenin,NAR)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠乳腺炎的保护作用。选取18只近预产期健康ICR小鼠,随机分为NC组、LPS组、NAR+LPS组,NC组注射50μL生理盐水,LPS组注射50μL生理盐水,NAR+LPS组注射10mg/kgNAR,连续给药3d后,将LPS组和NAR+LPS组注射药物换成50μL含50 ng LPS溶液,NC组不变,继续连续给药3 d,第7天检测乳汁中白细胞数量和血液生理指标,观察病理组织的变化。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测炎症因子白细胞介素6(Interleukin 6,IL-6)、白细胞介素8(Interleukin 6,IL-8)、肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)、核因子κB(NuclearFactorKappa-B,NF-κB)的mRNA相对表达量。结果显示:与LPS组相比,NAR+LPS处理组乳汁白细胞数和血液中中性粒细胞降低(P<0.05),血液中淋巴细胞增高(P<0.05)。与NC组相比,LPS组乳腺组织病变严重,NAR预处理组病变程度明显降低。此外,LPS组上调炎症基因IL-6、IL-8、TNF-α和NF-κB的表达量(P<0.01)。结果表明,NAR可以缓解LPS诱导的小鼠乳腺组织炎性损伤,为乳腺炎的防治提供新思路。

中药成分小檗碱对小鼠2-细胞胚胎体外培养及移植效果的研究

以添加抗菌素的mCZB液为对照组,筛选比较了中药有效成分小檗碱不同浓度对小鼠2-细胞胚胎体外培养效果的影响,并计数所培养的孵化胚胎细胞数目,观察中药有效成分对胚胎细胞数目增殖的作用;通过将体外培养发育的囊胚进行移植,进一步验证其对小鼠胚胎移植效果和产仔发育的影响。结果表明:小檗碱最佳浓度为0.10μg/mL,120h孵化胚胎发育率和孵化胚胎细胞数目(89.9%,83.7±9.10)极显著高于对照组(50.7%,69.5±7.14)(P<0.01);小檗碱组培养囊胚移植妊娠率(66.7%)和离窝成活率(55.8%)均显著高于对照组(50.0%,45.2%)(P<0.05),其组间产仔率、初产仔鼠平均体重、离窝小鼠平均体重无显著差异(P>0.05)。其结果说明,小檗碱对体外胚胎生长发育和细胞增殖有促进作用,对胚胎附植及初生仔鼠无不良影响。

氯化镉对小鼠精液品质和仔鼠性比的影响

为了探讨不同剂量氯化镉对小鼠雄性生殖及性别比例的影响,取32只雄性昆明小鼠,分成4组,每组每日每千克体重分别皮下注射CdCl20、0.5、1.02、.0 mg,连续5周,然后检测精液品质。结果发现,各试验组小鼠附睾内精子浓度以及精子活力显著下降,精子畸形率显著升高,并呈剂量依赖关系。将以上处理公鼠按1∶2比例与雌鼠交配,计算配种受胎率、妊娠率、窝产仔数和仔鼠性别比例,发现这些指标随处理剂量的增加呈下降趋势,雌/雄性比则呈升高趋势。以上结果表明,镉对小鼠精子生成及精液品质有明显毒性作用,可在一定程度上提高雌性后代的比例。

小鼠睾丸支持细胞分离培养及生物学特性鉴定

为了揭示睾丸支持细胞在精子发生及睾丸免疫豁免中的生物学作用,采用胰蛋白酶、胶原酶分步消化法和1/3浓度的Hank′s低渗液、50mmol/L Tris-HC(l pH7.1)液分别低渗处理及油红O脂质染色法对16～22d的幼鼠睾丸进行分离、纯化和生物学特性鉴定。结果表明:分离、纯化后的睾丸支持细胞损伤少、活率高、睾丸支持细胞占培养细胞总数的90%以上;根据形态学观察及油红O脂质染色法鉴定,睾丸支持细胞的生长状态良好,细胞突起很多,核仁清晰,胞质中可见大小不等的红色空泡状脂质小滴。

外源褪黑激素对昆明白鼠生长和繁殖性能的影响

研究外源褪黑激素(MT)对昆明白小鼠生长和繁殖性能的影响,为外源MT在畜牧生产上的应用提供依据。将40只昆明白小鼠(公、母各半)随机分成4组,用皮下埋植的方法埋植不同剂量(0、1、4、8mg)的外源MT,每3d称量1次小鼠的体重并记录;MT处理11周后,试验公鼠与正常母鼠交配,记录受精卵的数量;试验母鼠与正常公鼠交配,记录冲出卵的数量,14周后HE染色,制作睾丸和卵巢切片。在体重增长方面,外源MT对昆明白公鼠体重增长有促进作用,皮下埋植8mg组的促进作用显著(P<0.05);对昆明白母鼠体重增长有抑制作用,皮下埋植8mg组的抑制作用显著(P<0.05)。在繁殖性能方面,外源MT对昆明白鼠公鼠繁殖性能抑制作用显著,皮下埋植1mg和4mg组抑制作用显著(P<0.05),但皮下埋植外源MT8mg组和对照组间无统计学差异(P>0.05)。外源MT对昆明白鼠生长和繁殖性能有影响,并存在性别和剂量的依赖性。

肌肉抑制素与“双肌”表型关系的研究进展

肌肉抑制素是特异性表达于骨骼肌的一种细胞因子,属于TGF-β超家族成员,可以抑制骨骼肌的发育,并同多种疾病有关。肌肉抑制素在不同物种间高度保守,其抑制功能的丧失可以导致骨骼肌显著增生,即动物产生"双肌"表型。具有"双肌"表型的动物则表现出肌肉产量显著增加、饲料转化率高、肌肉嫩度增加、脂肪含量少、而脂肪酸组成中不饱和脂肪酸比例显著增加等优秀性状,这些性状是动物育种计划中的理想育种目标。本文从"双肌"表型的起源及特点、肌肉抑制素的发现及功能等方面对肌肉抑制素与"双肌"表型关系的研究进展进行了综述。

小鼠子宫内膜凝集素结合特性的生殖周期改变

用４种酶标植物凝集素（ＣｏｎＡ，ＷＧＡ，ＳＢＡ，ＲＣＡ）作探针，研究了小鼠发情周期、妊娠期和产后子宫内膜上皮、固有膜细胞和腺上皮凝集素结合特性的变化。子宫内膜与这４种凝集素的结合，随发情周期而波动。与间情期相比，妊娠期子宫内膜上皮与ＣｏｎＡ的结合，由阴性转为阳性，并随妊娠的持续逐渐加强，产后又突然转为阴性。子宫内膜上皮与ＷＧＡ的结合，在间情期和妊娠１ｄ均为阳性，妊娠７ｄ减为弱阳性，继之又加强，产后达最强。无论妊娠期还是产后，子宫内膜上皮与ＲＣＡ的结合均为强阳性，与ＳＢＡ的结合均为阴性。结果提示，生殖周期子宫内膜与凝集素结合特性的规律性变化，可能与激素调节。

长途运输应激对孕中期小鼠胚胎发育的影响

为研究运输应激对胚胎发育的影响机制,采用普通公路运输建立小鼠运输应激模型(1 000 km,15 h)。将27只孕中期(怀孕8~10 d)的小鼠随机分为对照组(13只)和应激组(14只),分析运输应激对胎儿发育的影响;之后2组小鼠随机挑选各3只,采用agilent小鼠全基因组表达谱芯片筛选长途运输应激小鼠垂体和子宫中的差异表达基因。选取6个差异表达基因,应用实时荧光定量PCR技术验证芯片结果的可靠性。结果表明:与对照组相比,长途运输导致活胎率下降和死胎率增加(P<0.05);在孕中期垂体中筛选到138个基因差异表达,其中71个基因表达显著上调,67个基因表达显著下调;在孕中期子宫中筛选到392个基因差异表达,其中73个基因表达显著上调,319个基因表达显著下调。对差异显著基因进行IPA分析发现,主要通路和生物功能涉及免疫和炎性疾病、细胞的生长、增殖和细胞间的相互作用、机能失调等;实时荧光定量PCR对akap3、Angptl4、Cartpt、insl6、thy1进行验证结果与芯片结果的表达趋势一致。

生殖周期小鼠子宫内膜上皮淋巴细胞的数量变化

应用甲苯胺蓝染色方法，观察了发情周期、妊娠期和分娩后小鼠子宫粘膜上皮内淋巴细胞的消长情况。与间情期相比，上皮内淋巴细胞的数量在发情前期减少，而发情期和发情后期又增加。妊娠 １ ｄ 数量较少，１４ ｄ 开始回升，１８ ｄ 的数量超过间情期。分娩后 １ ｄ 突然升高，随后又逐渐恢复。这些结果提示，上皮内淋巴细胞可能参与子宫粘膜免疫。

小鼠胚胎母源基因转向合子基因组的转换起始点

为研究母、父源基因以及合子基因在动物胚胎早期发育中发挥功能的重要时间节点,本实验利用转增强型荧光蛋白(EGFP)基因小鼠(♀/♂),分别与野生型小鼠进行交配,收集受精后的胚胎于倒置荧光显微镜下观察,寻找EGFP基因在不同胚胎发育阶段时间节点表达的特征,作为直观判断母源基因向合子基因的转换时间起始点的生物标志。结果发现:从EGFP转基因母鼠获得的5枚卵母细胞/原核胚中表达了EGFP基因,在荧光显微镜下表现出绿色荧光;而从野生型母鼠获得的20枚胚胎到2-细胞(2-cell)期后开始表现出绿色荧光,随着胚胎的发育,出现荧光的胚胎数量逐渐增多,达到5枚。综上,EGFP基因可以作为小鼠胚胎发育过程中合子基因的标志物,小鼠胚胎发育过程中母源基因向合子基因转换的时机在胚胎发育的2-cell期。

MC4R在小鼠下丘脑的定位及其基因在发情周期下丘脑、卵巢中的表达变化

黑素皮质素受体-4(Melanocortin-4 Receptor,MC4R)在参与调节摄食行为和机体能量平衡中发挥重要作用,但其在生殖活动中的作用尚不明确。为此本实验以不同发情周期中的C57小鼠为对象,利用免疫荧光对MC4R神经元在下丘脑的表达进行定位。通过Western Blot确定MC4R在小鼠发情前期、发情期、发情后期和间情期的下丘脑和卵巢中蛋白表达变化。结果表明:MC4R神经元广泛分布于下丘脑第三脑室,发情期下丘脑中MC4R蛋白表达量显著低于其他3个时期(P<0.05);同时期卵巢中MC4R蛋白表达量显著低于发情前期和发情后期(P<0.05),发情后期MC4R蛋白表达量极显著高于其他3个时期(P<0.01)。这一结果阐明了小鼠在发情周期不同阶段下丘脑和卵巢组织中MC4R的表达变化规律,为进一步研究MC4R在小鼠生殖活动中的作用提供理论基础。

重组猪乳铁蛋白N端多肽对环磷酰胺免疫抑制小鼠免疫功能的影响

研究旨在观察重组猪乳铁蛋白N端多肽(rPLFN)对环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠免疫功能的影响。选用体重18～21g的雄性ICR小鼠40只,按试验要求随机分成4组,即12.5mg/kg rPLFN组、25mg/kgrPLFN组、环磷酰胺组和对照组,每组10只;按设计剂量灌胃给药,在第12天时用环磷酰胺50mg/kg腹腔注射建立小鼠免疫低下模型,至第16天检测各组小鼠脾淋巴细胞增殖反应和血清IL-2、TNF-α、IFN-γ含量。结果表明:25mg/kg rPLFN组能拮抗环磷酰胺对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的抑制作用(P<0.05);25mg/kg rPLFN组血清中IL-2、IFN-γ、TNF-α含量显著高于模型组(P<0.05)。结果表明,rPLFN对环磷酰胺免疫抑制小鼠的免疫功能有一定的恢复和增强作用。

体外培养小鼠生精细胞的形态学

利用姬姆萨原液和瑞一姬染色法对30～35日龄小鼠精液和睾丸组织培养后的生精细胞和精子进行形态学鉴定。结果表明，用姬姆萨原液染色鉴定，精子形态清晰，细胞膜边缘清楚，呈紫红色，未成熟精子的染色程度浅于成熟精子；经过培养的睾丸组织用姬姆萨原液染色，生精细胞形态清晰，细胞核呈颗粒状，开始呈现深紫红色，胞质粉红色且带有蓝色背景，颜色较深，一定时间后颜色变浅；瑞一姬染色生精细胞形态完整清晰，细胞核、核仁、胞质分别呈现不同颜色。

排卵不同阶段氯胺酮麻醉对昆明小鼠卵母细胞和早期胚胎的影响

主要研究排卵不同阶段氯胺酮III期麻醉深度对昆明小鼠卵母细胞和早期胚胎的影响。结果表明:排卵前麻醉(150mg/kg体重)造成卵母细胞和早期胚胎数量的极显著下降(P<0.01),而排卵期间麻醉及排卵后麻醉对排卵及早期胚胎数量影响不显著(P>0.05),排卵不同阶段麻醉均造成一定数量异常卵母细胞和非正常胚胎出现。因此,排卵期间麻醉小鼠相比排卵前及排卵后麻醉小鼠对卵母细胞和早期胚胎的影响最小,但仍有可能造成卵母细胞异常、胚胎畸形的发生。

昆明小鼠早期胚胎发育时程

以昆明种小鼠为对象,在严格控光条件下,对交配后阴道栓形成时间、排卵时间、精子入卵与原核形成时间以及2-细胞至囊胚的发育时程等进行了系统研究。结果如下:(1)从注射hCG 当天(0 d)21:00(hCG后6 h)至次日(第1 天)1:00(hCG 后10 h),有84.2% 的超排小鼠形成阴道栓;(2)大部分小鼠(66% ～100% )排卵从hCG后第1 天2:00(hCG 后11 h)开始,至3:00～4:00(hCG后12～13 h)结束;(3)从hCG 后第1 天7:00(hCG后16 h)至11:00(hCG 后20 h),小鼠卵受精率为5.6% ～82.4% ;(4)从hCG后第1 天7:00(hCG 后16 h)至11:00(hCG 后20 h),原核形成率为4.4% ～67.5% ;(5)从hCG 后第1 天21:00(hCG 后30 h)至第2 天1:00(hCG后34 h),2-细胞形成率为14.9% ～83.1% ;hCG后第2 天19:00(hCG后52 h)至23:00(hCG后56 h),4-细胞形成率为12.9% ～85.7% ;hCG 后第3 天6:00(hCG后63 h)至10:00(hCG 后67 h),8-细胞形率为12.8% ～88.2% ;(6)从hCG 后第3 天10:00(hCG 后67 h)至24:00(hCG后81 h),8～16 细胞(早期桑葚胚)形成率由100% 下降到42.9% ;从hCG 后第3 天24:00(hCG 后81 h)至第4 天4:00(hCG后85 h),17～32 细胞(晚期桑葚胚)形成率由57.1% 增加到90.0% ;(7)从hCG 后第4 天6:00(hCG后87 h)至8:00(hCG后89 h),囊胚形成率从11.4% 上升到60.9% 。

温度对体外培养小鼠精原干细胞的影响

将分离纯化的小鼠精原干细胞分别置于 37、34、30℃及 5% CO2 、饱和湿度条件下进行体外培养。结果表明 ,3种温度下的精原干细胞均可以存活并增殖 ,但随着体外培养时间的延长 ,细胞的生长状态、增殖数量和存活时间有明显差异。34℃下细胞平均存活时间最长 ,增殖数量最多。统计分析显示 ,34℃与 30、37℃下细胞平均存活时间有显著差异 ( P<0 .0 5) ,表明

甘氨酸对H_2O_2诱导氧化应激的小鼠胚胎抗氧化能力的影响

本实验旨在探究甘氨酸(Gly)对H_2O_2诱导氧化应激的小鼠胚胎抗氧化能力的影响。实验分为对照组、H_2O_2处理组和H_2O_2+Gly处理组,对照组胚胎不经H_2O_2处理培养于M16培养液中;其他2组胚胎均置于25μmol/L的H_2O_2中孵育30 min,然后,H_2O_2处理组和H_2O_2+Gly处理组分别在M16培养液和最佳浓度Gly的培养液中进行培养。通过2',7'-二氯荧光素二乙酸盐(DCHFDA)法测定胚胎内部的活性氧水平和巢式PCR法检测内源抗氧化酶基因的表达。结果表明:胚胎经不同浓度Gly处理后,4 mmol/L Gly处理组的4-cell发育率(P>0.05)和囊胚发育率(P<0.05)均高于对照组;氧化应激胚胎经4 mmol/L的Gly处理后,胚胎的4-cell发育率(P<0.01)和囊胚发育率(P<0.05)显著高于H_2O_2处理组;H_2O_2+Gly处理组的活性氧水平显著低于H_2O_2处理组(P<0.05);Gly能上调CAT(P<0.05)和SOD1(P<0.01)基因的表达,而对SOD2基因的表达无影响(P>0.05)。综上可知,添加Gly可以有效提高胚胎的抗氧化能力,在胚胎体外培养过程中添加Gly的最适宜浓度为4 mmol/L。

用 H-抗原方法鉴定小鼠胚胎性别的研究

本试验选用纯系 C_(57)BL/6小鼠,将雄鼠脾细胞悬液经腹腔注射免疫同基因型雌鼠。加强免疫后,常规尾静脉采血制备抗 H-Y 抗血清。采用精子微量细胞毒试验和酶联免疫法(ELISA)2种方法进行抗血清检测。将特异性和效价均较好的抗H-Y 抗血清用于间接免疫荧光法鉴定小鼠胚胎性别。共鉴定桑椹胚和早期囊胚462枚,呈荧光阳性(雄性)的占47%(219/462);呈荧光阴性(雌性)的占53%(243/462),经 X^2检验,符合正常性比例(1:1,P>0.05)。将这2类胚胎分别移植给假孕受体进行验证,并对验证结果进行分析。