柞蚕寄生线虫的发生与防治

柞蚕线虫是影响柞蚕放养产量和质量的重要寄生性虫害。本文概述了柞蚕寄生线虫的分布与危害、形态学特征、生活史与习性及三类防治方法,以期为柞蚕生产和产业发展及新型线虫药剂研制提供参考。

柞蚕饰腹寄蝇防治技术研究溯源

柞蚕饰腹寄蝇是辽宁柞蚕区主要寄生性害虫,严重危害柞蚕生产。自20世纪60年代起,科研人员就开展了化学防治、养蚕技术防治及综合防治等防治手段,有效解决了柞蚕饰腹寄蝇危害。因防治药剂“灭蚕蝇一号”长期单一使用,防效逐年降低。2013年科研人员开发出增效药剂与“灭蚕蝇一号”混用的方式来提高防效。

增效灵与灭蚕蝇一号混用对柞蚕饰腹寄蝇的防治效果试验

增效剂与杀虫剂混用是害虫抗药性治理的有效方法。在对柞蚕饰腹寄蝇的抗药性治理研究中,采用不同增效剂与防治药剂灭蚕蝇一号复配使用,筛选出增效作用显著的增效剂增效灵（O,O-二乙基-O-苯基硫代磷酸酯）。对增效灵与灭蚕蝇一号混配液中2种成分的使用浓度进行优化试验,结果表明：分别在50%~60%的柞蚕幼虫4眠眠起及移到窝茧场时,将混配药液（混配液中增效灵与灭蚕蝇的质量浓度分别为1.00、2.00 g/L或同为1.00、1.50、2.00 g/L）喷施柞树叶片后给柞蚕幼虫添食,对柞蚕饰腹寄蝇的校正防治效率分别达到93.47%、90.85%、95.82%、98.09%,与单一使用灭蚕蝇一号的校正防治效率差异极显著（P〈0.01）,而且灭蚕蝇一号与增效灵按照上述配比混配使用对柞蚕的产茧性能和繁育性能均无不良影响。为了减少杀虫剂使用剂量,降低柞蚕生产成本和延缓柞蚕饰腹寄蝇抗药性的发展,建议生产中将灭蚕蝇一号与增效灵混配后质量浓度同为1.50 g/L的药液用于防治柞蚕饰腹寄蝇。

柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi)对柞蚕卵巢初代培养细胞的侵染与增殖

将精制的柞蚕微孢子虫孢子用0.2mol.L-1KOH处理后,接种感染生长状态良好的柞蚕蛹卵巢初代培养细胞,调查其感染增殖规律。接种1h后,孢子的发芽率为53.8%,培养细胞的初期感染率为30%。接种24h后,可观察到裂殖体的数量急速增加,72h达最高峰。接种96h后可观察到短极丝孢子发芽后形成的空孢壳和二次感染体。接种5d后形成成熟孢子,每个细胞平均产100个孢子。在其生活史中,柞蚕微孢子虫呈双核或四偶核,并表现出孢子二型性,具有典型的Nosema属特征。

微孢子虫研究进展

从分类、分子进化、分子生物学、化学治疗等方面综述了微孢子虫研究的进展。认为微孢子虫对宿主显示了机会性病原物的特点 ,就家蚕微粒子病防治而言 。

家蚕微孢子虫与桑尺蠖微孢子虫的研究

研究了家蚕,桑尺蠖微孢子虫的生物学特性和交叉感染。

家蚕微孢子虫（Nosemabombycis）孢子人工发芽的研究

研究表明，目前常用的适合于向昆虫培养细胞接种的Ｎｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓ孢子的几种人工发芽方法的发芽率存在较大差异．同一种方法在不同的发芽培养基中的发芽率也有所不同．并发现在Ｎ．ｂｏｍｂｙｃｉｓ孢子的人工发芽过程中Ｋ＋促进作用比Ｎａ＋明显，而且还证实Ｎ．

从家蚕蛾中分离的微孢子虫MZ_1(Nosema sp.)对家蚕的病原性研究

从养蚕生产的蚕蛾中分离到一种小型微孢子虫 ,暂名MZ1,其形状为卵圆形 ,大小为 2 49± 0 10 μm×1 32± 0 12 μm。寄生家蚕的大多数组织器官 ,在蚕体内的生殖发育圈与N .bombycis相似。对家蚕的致病力弱 ,ID50为每条蚕 172 5 0粒孢子 ,能在蚕体内经胚种传染给下一代。MZ1具有Nosema属的分类特征 ,初步定为Nosemasp .。

家蚕3种微孢子虫孢子表面抗原特性的研究

用０．５％Ｋ２ＣＯ３溶液提取Ｎ·ｂ、ＳＣＭ６、ＳＣＭ７３种家蚕微孢子虫孢子表面抗原蛋白，并用聚丙烯酰胺凝胶电泳研究了三者表面抗原蛋白的差异，查明三者无共同成份存在。用Ｎ·ｂ抗体蛋白致敏炭素制成检液，对Ｎ·ｂ孢子为阳性反应，对ＳＣＭ６、ＳＣＭ７均不出现阳性凝集反应。可用以有效判别三者中的Ｎ·ｂ孢子。

捻转血矛线虫耐药相关基因P450原核表达及其生物信息学分析

为表达捻转血矛线虫P450蛋白并分析其生物信息学特性,本研究利用RT-PCR扩增捻转血矛线虫P450基因,构建重组质粒pET-P450,经双酶切鉴定,将其转化大肠杆菌后,采用SDS-PAGE检测P450蛋白的表达;利用生物信息学软件对P450蛋白的理化性质、结构特点进行分析。结果显示,正确构建了重组质粒pET-P450且P450蛋白以包涵体的形式表达。生物信息学分析结果显示,P450蛋白分子式为C1154H1812N314O330S15,为不稳定蛋白、无跨膜区、无信号肽,是一种含较多抗原表位的亲水性蛋白,有7个B细胞抗原表位和11个T细胞抗原表位,有望用作捻转血矛线虫耐药性的诊断抗原。本研究获得了P450重组蛋白,为捻转血矛线虫耐药性快速检测方法和新药开发奠定物质基础。

“线绞清”残效期研究

以通过自然降雨获取被线虫寄生的柞蚕为试材,进行“线绞清”的残效期试验。结果表明:0 .0 1 %和0 .0 0 6%两种浓度的“线绞清”残效期比较短,喷药2 1 d后的防效为95 .1 4%和98.97% ,而0 .0 3 2 5 %、0 .0 2 1 7%和0 .0 1 62 5 %浓度的“线绞清”残效期可达3 5 d,完全能满足生产的要求。

柞蚕专用灭蚕蝇溶液科学使用方法解析

针对柞蚕生产中应用灭蚕蝇溶液防治柞蚕饰腹寄蝇病出现的各种问题,从药物特性及杀虫机理、施药方案、复配应用和使用注意事项等四个方面详细阐述灭蚕蝇溶液的科学使用方法。

药剂对柞蚕饰腹寄蝇的校正防治效果统计方法改进

柞蚕饰腹寄蝇是严重危害柞蚕的寄生性害虫之一。为准确量化评价药剂对柞蚕饰腹寄蝇的防治效果,对传统校正防治效果的统计方法进行改进。改进后的统计方法将柞蚕生产中影响蛆茧率的重要产量指标试蚕结茧率作为变量之一,以传统方法统计结果与试蚕结茧率乘积的平方根数据作为校正防治效果。模拟试验数据分析中,传统方法获得的校正防治效果与试蚕结茧率呈中度相关,改进方法获得的校正防治效果与试蚕结茧率呈高度相关。在用化学药剂灭蚕蝇1号防治柞蚕饰腹寄蝇的3组试验数据中,采用传统方法统计分析仅有1组试验数据的校正防治效果与试蚕结茧率呈高度相关,而采用改进方法统计分析3组试验数据的校正防治效果均与试蚕结茧率呈高度相关。改进的校正防治效果统计方法充分考虑了尽可能多地获得蛹茧这一防治目的,有利于合理评价与筛选柞蚕饰腹寄蝇防治药剂。

柞蚕饰腹寄蝇发生规律及防治策略研究

研究柞蚕饰腹寄蝇病发生规律,有助于指导柞蚕生产上更合理的对该病害进行化学防治。在辽东地区,通过对柞蚕饰腹寄蝇羽化时期调查发现,该虫羽化时间主要集中在5月10日至5月15日之间,占比达到59.7%;通过柞蚕饰腹寄蝇寄生柞蚕时期调查发现,该虫对柞蚕的寄生时期主要集中在5月下旬到6月上中旬,占比达到87.46%。柞蚕饰腹防寄蝇化学防治试验,柞蚕老眠起约50%左右及进营茧场后2次施药的校正防效为91.7%±0.60%;分别在柞蚕三眠起约50%、老眠起约50%以及进营茧场后3次施药的校正防效为93.22%±0.64%;2次施药与3次施药差异不显著(P<0.05),结果表明通过2次施药即可有效防治柞蚕饰腹寄蝇病。

裳卷蛾变形孢虫(Vairimorpha ceraces sp.nov.)对家蚕、鱼类的感染性试验

裳卷蛾变形抱虫（Vairimorpha ceraces sp．nov．）对家蚕为敏感性感染，感染中量（IC50）为1．2×10^4，可广泛寄生各种组织，其中丝腺与马氏管被严重寄生，病蛾胚传率为2．69％，孢子发育形态明显偏向二孢子母细胞（disporous）发育。以2×10^7-4×10^7粒孢子／mL对每尾红鲤（redcarp）添食0．5mL，饲养40d后解剖全部鱼体，约有10％-20％的试验鱼出现了明显的组织病变，在寄生组织中观察到大量的梨形未成熟孢子和少量的成熟孢子，但未观察到八孢子囊（octosporous）形态，病变组织疑似孢子免疫荧光检测为阳性，3次独立重复试验均得到了同样的结果，表明高浓度裳卷蛾变形孢虫可能对红鲤发生了机会性感染。试验结果对探讨微孢子虫的感染与感染适应性机制具有重要意义。

线虫寄生对柞蚕幼虫生长发育和营养物质代谢的影响

研究寄生线虫对柞蚕幼虫生长发育和营养物质代谢的影响,可以从生理生化角度揭示柞蚕寄生线虫的致病机制,明确线虫在柞蚕体内完成寄生生活史的生理生化调控机制。检测柞蚕5龄幼虫被线虫寄生后其生长发育速度、血淋巴营养物质含量和中肠蛋白酶活性,结果表明,柞蚕幼虫被线虫寄生6～11 d,其摄食量和体质量变化不明显,血淋巴总糖、海藻糖含量短暂性升高,随后便急剧下降,血淋巴蛋白质含量和酯酶活性升高,甘油酯含量降低,中肠蛋白酶活性极显著低于对照组;被寄生12～15 d,柞蚕摄食量升高、体质量增加,中肠蛋白酶活性升高,而血淋巴中总糖含量、海藻糖含量、海藻糖酶活性、甘油酯含量极显著低于对照组,说明此时是线虫迅速生长的时期,蚕体营养物质被线虫大量消耗;被寄生15 d后摄食量急剧下降,血淋巴中能源物质含量极显著降低,中肠蛋白酶活性极显著低于对照组。线虫寄生柞蚕幼虫后与寄主形成营养竞争关系,造成蚕体营养物质严重缺乏、消化能力减弱、生长发育迟缓。研究结果可为揭示线虫对柞蚕的致病机制以及利用索科线虫进行农林害虫的生物防治提供参考。

家蚕追寄蝇寄生蚕体的血液蛋白质差异表达分析及质谱鉴定

由家蚕追寄蝇(Exorista sorbillans)寄生于家蚕幼虫体壁与肌肉间引起的多化性蚕蛆病对蚕业生产危害极大。基于家蚕血液在蚕体基础代谢、生长发育及先天免疫中的重要功能,采用双向电泳(2-DE)技术检测被家蚕追寄蝇寄生的家蚕5龄幼虫至蛹期第2天的血液蛋白质表达变化,并对表达水平具有显著差异的蛋白点进行质谱鉴定,明确家蚕在受到追寄蝇感染时与免疫应答以及生理、病理变化过程有关的血液蛋白质。在被追寄蝇寄生的蚕体血液中共检测到24个具有显著表达差异的蛋白点,表达上调的蛋白点有17个,包括在家蚕先天免疫系统中发挥重要作用的肽聚糖识别蛋白-S1、C-型凝集素-10和酚氧化酶-2等;表达下调的蛋白点有7个,包括与家蚕生长发育、体内物质代谢等生物学过程相关的蛋白质。血液蛋白质的表达变化提示,当蚕体受到追寄蝇感染时其先天免疫系统被激活,生长发育和体内物质代谢等也受到影响。

家蚕微孢子虫的一个Dicer相似蛋白基因的鉴定及系统进化和转录活性分析

Dicer是一种具有RNaseⅢ酶活性的蛋白质,参与RNAi起始阶段siRNA和miRNA的形成,为RNA诱导沉默复合物（RISC）形成的关键因子之一,在基因的转录后调控中扮演重要角色。采用生物信息学方法从家蚕微孢子虫（Nosema bombycis）全基因组数据中鉴定到一个Dicer相似蛋白（Dicer-like）基因,命名为Nb DCL（Gen Bank登录号：EOB15391）。预测Nb DCL的二级结构中含有RNaseⅢ结构域和dsRNA结合结构域。基于Dicer-like基因的系统进化分析显示,家蚕微孢子虫与柞蚕微孢子虫（Nosema pernyi）的亲缘关系最近,并与真菌形成姊妹枝,说明微孢子虫Dicer-like与真菌的同源基因来自共同的祖先。基因组共线性分析显示,Dicer-like基因及其两侧基因在微孢子虫基因组中的排列顺序具有显著的保守性,但兔脑炎微孢子虫（Encephalitozoon cuniculi）和比氏肠道微孢子虫（Enterocytozoon bieneusi）基因组中的Dicer-like基因在物种分化过程中发生了丢失。对Dicer-like基因和Agronaute相似蛋白基因、转座子的共存分析表明,家蚕微孢子虫等Nosema属微孢子虫均保留了古老的RNAi作用机制。RT-PCR检测被家蚕微孢子虫感染48-240 h的家蚕幼虫中肠中Nb DCL基因均有转录。研究结果为进一步探究家蚕微孢子虫RNAi的调控机制提供了有益线索。