谷氨酰胺对热应激吉林白鹅血液指标及肠黏膜屏障的影响

【目的】探讨谷氨酰胺(Gln)对热应激吉林白鹅血液指标的影响及对肠上皮黏膜屏障系统的保护作用。【方法】将180只1日龄吉林白鹅随机分为3组,分别为适温组(CON)、热应激组(HS)和谷氨酰胺组(GLN),每组6个重复,每个重复10只鹅。第69天CON组和HS组腹腔注射生理盐水[0.75g/kg(bw)],GLN组腹腔注射Gln[0.75g/kg(bw)],注射24h后,HS组与GLN组进行4h热应激处理(41℃±1℃,相对湿度60%),结束后进行屠宰。采集血液测定二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(DLA)、乳酸脱氢酶(LDH)、皮质酮(CORT)、肌酸激酶(CK)、三碘甲状腺原氨酸(T3)和甲状腺素(T4)的活性水平;刮取空肠上皮黏膜测定HSP70、Occludin、Claudin1和ZO-1的mRNA和蛋白质的相对表达量。【结果】(1)与HS组相比,GLN组血液中除T3呈升高趋势外,其他指标均表现为下降趋势。(2)GLN诱导HSP70mRNA的高表达(P<0.01),同时使热应激条件下紧密连接蛋白mRNA的表达情况得到改善(P<0.01)。(3)蛋白质相对表达水平趋势变化与基因相似。【结论】Gln可有效缓减吉林白鹅的热应激状态,肠上皮黏膜屏障破损情况也得到显著改善。

达氟沙星对鸡毒支原体的临床疗效试验

试管内抑菌试验测得达氟沙星、氧氟沙星对鸡毒支原体的最小抑菌浓度(MIC)分别为0.048μg/ml,0.098μg/ml。人工感染鸡毒支原体的鸡24小时后,100、50、25ppm的达氟沙星、50ppm的氧氟沙星连续饮水5天给药,死亡率分别为0、0、3.3％、6.7％,而阳性对照组的死亡率为33％。达氟沙星及对照药物能显著降低鸡的死亡率、气囊损伤率及体内抗体阳性率。

TRAIL和HN基因融合表达重组腺病毒的构建及其对DT40细胞的抑瘤作用

分析携TRAIL和HN基因的重组腺病毒在DT40细胞中的表达规律及杀伤肿瘤细胞的生物学效应。通过RT-PCR分别从鸡外周血淋巴细胞和新城疫病毒(NDV)LaSota株中扩增出TRAIL和HN基因,通过定点突变和重叠延伸拼接法实现TRAIL和HN基因的2A连接,将获得的目的基因克隆到pShuttle-CMV穿梭载体中,与pAdeasy-1载体在BJ5183细菌内同源重组,构建了包含目的基因的重组腺病毒质粒pAd-TRAIL和pAd-TRAIL-2A-HN,将质粒线性化后转染AD293细胞,包装后的重组腺病毒,经RT-PCR检测、荧光显微镜观察和病毒滴度测定后,将获得的重组腺病毒体外转染禽淋巴白血病DT40细胞,通过RT-PCR和Western blotting检测重组腺病毒的感染性和外源基因的表达情况,采用流式细胞仪检测重组腺病毒对DT40细胞生长的影响以及Ad-TRAIL和Ad-TRAIL-2A-HN对DT40细胞的凋亡作用。PacⅠ酶切证实同源重组成功;RT-PCR、荧光显微镜检测证实重组腺病毒质粒成功导入AD293细胞中且具有良好的感染性,滴度为1.9×1010PFU/mL;Western blot检测结果显示,TRAIL-linker-HN基因能够在DT40细胞中稳定表达并对DT40细胞产生细胞毒作用,且诱导细胞的凋亡率为29.52%,表明TRAIL-linker-HN具有双基因抑瘤的协同效应。