大菱鲆出血症病原菌的分离和鉴定

从患病大菱鲆体内分离到一株病原菌SMP1，经人工感染试验计算出SMP1的半致死量LD50=1．94×10^6。药敏实验表明氟哌酸、丙氟哌酸、复合磺胺、氯霉素、四环素对SMP1有较强的抑制作用。BIOLOG细菌鉴定系统不能对SMP1鉴定。综合形态观察、生理生化特征、16S rDNA、溶血素基因保守区分析等实验结果，可将SMP1鉴定为鳗弧菌。

两株草鱼呼肠孤病毒江西株的分离与鉴定

对从江西省南昌县莲塘镇的患病草鱼鱼种池塘采集到草鱼出血病疑似病样材料分离出的两株病毒株进行了鉴定。结果显示:用除菌过滤后的患病鱼肝脏、脾脏、肾脏组织浆滤液腹腔注射感染8～10 cm健康草鱼鱼种,5 d后试验鱼发病,可复制出自然发病症状,死亡率达50%以上,对照组未有死亡。用病样滤液接种草鱼肾细胞系(CIK),可产生细胞病变效应(CPE),病毒的TCID50分别为10-8.3/0.1 mL和10-8.0/0.1 mL。理化特性研究结果显示:氯仿、乙醚处理组病毒的感染力和对照组相比变化不显著。病毒基因组RT-PCR反应可扩增出目的片段,序列测定与分析结果表明,其与GenBank中GCRV(登录号为AF403392,AF239175)相应序列的同源性达99%以上。

鱼类培养细胞干扰素的诱导

对紫外线灭活的草鱼出血病病毒（ＧＣＨＶ）Ｆ９株，在几种鲤科鱼类培养细胞中诱导产生干扰素的能力及影响干扰素产量的各因素进行了研究。纯化的ＧＣＨＶ在紫外线照射５分钟丧失感染性，但获得了在ＣＡＢ等５种鲤科鱼类培养细胞中高效诱导产生干扰素的能力。干扰素的诱导需要病毒高复数感染细胞。干扰素主要在诱导后１４小时内产生。培养上清中的新生牛血清对干扰素的产量有抑制作用，而在ｐＨ６．２～７．８范围内对干扰素产量无明显影响。诱导温度和细胞年龄对诱导产量有明显的影响。用紫外线灭活的ＧＣＨＶ在鱼类培养细胞中诱导干扰素时，放线菌素Ｄ具有超诱导作用，同种干扰素具有启动效应。本研究为鱼类干扰素的进一步研究及其基因克隆奠定了基础。

应用Dot－ELISA技术检测草鱼出血病病毒的研究

报道了斑点免疫吸附ＥＬＩＳＡ（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）快速检测草鱼出血病病毒（ＧＣＨＶ）的方法以及对提纯病毒、染毒细胞内病毒和病鱼组织的检测结果，并对该方法的灵敏度与ＳＰＡ－ＣｏＡ和常规ＥＬＩＳＡ法进行了系统的比较。结果表明，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检出ＧＣＨＶ的最低含量为３ｐｇ，该灵敏度比ＳＰＡ－ＣｏＡ和常规ＥＬＩＳＡ法分别提高１０倍和２０倍，而且快速易行，是目前检测ＧＣＨＶ最为有效的方法，并可在草鱼出血病临床诊断和病毒疫苗质量鉴定等方面得到应用。

稀有鮈鲫对草鱼出血病病毒敏感性的初步研究

本文报道稀有鲫对草鱼出血病病毒（ＧＣＨＶ）的敏感性。ＧＣＨＶ是草鱼出血病的病原，用ＧＣＨＶ人工感好１－６月龄的稀有鲫，在水温２２－３２℃时能导致稀有鲫出现出血病症状。在水温２８℃时，病鱼在ｌｄ内死亡，潜伏期为５ｄ，发病高峰期在感染后第６－８ｄ。ＧＣＨＶ能在稀有鲫体内传代，并诱导８０％以上的稀行鲫患病死亡。将人工感染ＧＣＨＶ的稀有鲫病鱼组织超薄切片，电镜观察，发现在肠道、脾脏、肾脏等组织中存在大小与形态和ＧＣＨＶ相似的病毒颗粒。从稀有鲫出血病病鱼组织中纯化病毒，免疫电镜观察，发现病毒颗粒能被ＧＣＨＶ的特异性抗体聚集成团。由上可知，稀有鲫出血病是由ＧＣＨＶ感染所致，稀有鲫对ＧＣＨＶ是敏感的，可以作为草鱼抗出血病育种的模型。

嗜水气单胞菌源黄鳝出血病的组织病理学研究

应用组织学方法研究了分离自患出血病黄鳝（Monopterus albus）体内的嗜水气单胞菌（Aermonas hydrophila）人工感染健康黄鳝后引起的组织病理学变化。结果显示：健康黄鳝感染嗜水气单胞菌后发病呈急性过程,感染后15~33 h为发病死亡高峰期。黄鳝人工感染后出现的临床症状与自然发病病例相似,主要表现：体表出现出血斑、肛门红肿、腹腔充血以及各实质性器官出血、充血。人工感染黄鳝的肝脏、脾脏和肾脏的病理变化明显：肝脏出现广泛的充血、出血,肝细胞出现空泡变性、坏死;肾脏肾小管上皮的肿胀、结构的消失,肾小球出血、变性坏死;脾脏充血、出血;肠粘膜上皮脱落,基底膜排列紊乱,大量出血。结果表明,嗜水气单胞菌感染黄鳝后的病理变化主要表现为肝脏、肾脏等实质性器官充血、出血,及广泛的组织细胞变性和坏死。

干扰素防治草鱼出血病的效果初探

对人工诱导的鲫鱼干扰素防治草鱼出血病的效果进行了初步探讨。结果表明 ,人工诱导的鲫鱼干扰素确能有效防治草鱼出血病 ,腹腔注射和药浴浸泡两种途径均有一定效果。在病毒感染前使用干扰素处理的效果好于在病毒感染后使用干扰素处理。

草鱼出血病病毒人工感染稀有(鱼句)鲫出血病鱼主要器官组织的超薄切片观察

用电子显微镜观察了稀有(鱼句)鲫出血病(Hemorrhage of Gobiocypris rarus)鱼的病理切片及对照鱼的超薄切片。在对照鱼的鳃、肠道、肾脏、脾脏、肌肉和肝脏中没有见到任何病毒颗粒。在病鱼鳃血管内皮细胞质中观察到聚集的直径70nm左右的GCHV颗粒,说明鳃是GCHV侵袭的主要器官之一,并讨论了鳃对GCHV敏感在GCHV传播中的意义。还在病鱼肠道,肾脏中观察到成片的病毒颗粒,它们也是GCHV侵袭的主要组织。在病鱼脾脏的电子密度低的细胞质中观察到散在的病毒颗粒。很少见到病毒聚集体,脾脏中的病毒可能是脾脏的吞噬细胞吞噬而来。作者认为在病鱼组织中观察到的大小不同的病毒颗粒是处于不同成熟阶段的GCHV。

应用逆转录聚合酶链反应直接检测草鱼出血病病鱼组织的研究

人工感染GCHV－861后，对处于潜伏期、发病期和恢复期等不同时期的草鱼内脏组织匀浆上清液进行逆转录聚合酶链式反应（RT－PCR）扩增，除恢复期的1条草鱼外，其余样品均得到特异扩增带，而对照组都没有，预示着RT－RCR技术对于草鱼出血病的早期诊断、防治及抗病有种具有重要意义。另外，对于显症出血病草鱼的肝、肾、脾、鳃、肌肉和肠道等组织器官进行检测，结果都为阳性，首次证实了GCHV存在于肝脏中，并对此作了进一步的讨论。

草鱼出血病病毒多肽及其基因组的体外翻译

纯化的草鱼出血病病毒经SDS-PAGE分析,有11条多肽,即Vp1～Vp11,分子量为27×10~8～130×10~3。完整病毒颗粒与缺失核酸的病毒空壳均由相同的多肽组成。其中Vp1、Vp2、Vp7、Vp10和Vp11是主要的5个多肽,Vp1、Vp2、Vp3、Vp4、Vp5和Vp10属病毒核心成分。用90％DMSO变性的病毒基因组在兔网织红细胞裂解物翻译系统中进行体外翻译,其翻译产物经SDS-PAGE和放射自显影检查,在X感光片上有11条与病毒多肽一致的片段。此结果为呼肠孤病毒核酸具有mRNA性质增加了又一个证据。人工释放的病毒核酸,其双链RNA的一端与核心相连,构成类似反应核心的形态。核心上的12个钉状物可能是病毒基因组溢出的通道。

草鱼出血病病毒854株的理化、生物学特性及基因组结构

草鱼出血病是我国一种十分严重的病毒性鱼病。１９７８年，中国科学院水生生物研究所第三研究室的科研人员首先报道了草鱼出血病是一种病毒性鱼病，并初步认为其病原是一种疱疹病毒（Ｈｅｒｐｓｖｉｒｕｓ）。１９８３年，陈燕新等报道了自己分离的草鱼出血病病毒形态结构...

RT-PCR检测草鱼呼肠孤病毒的方法研究

草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)为草鱼出血病的病原.本实验根据GenBank中GCRV和其他水生呼肠孤病毒毒株的第六基因片段,在其保守区设计了一对GCRV特异性引物,建立了快速检测GCRV的逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法.该PCR体系中,上下游引物的最适终浓度为120 nmol/L,最适退火温度为52℃.PCR特异性试验表明:所设计的引物只能扩增GCRV的核酸,而不能扩增嗜水气单胞菌BSK-10、WSSV以及正常CIK细胞的DNA或RNA.敏感性试验表明,当GCRV的反转录模板稀释至5-7时,PCR结果还为阳性.用所建立的RT-PCR方法对5份样品进行检测,结果表明本研究建立的RT-PCR检测方法可靠且可行.

鱼呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

采用杂交瘤技术,用浓缩的鱼呼肠孤病毒(Fish Reovirus FRV)免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/O细胞融合,经筛选克隆,共获得B_7、C_6.D_9.G_7、E_4、F_5,F_7七株分泌抗鱼呼肠孤病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。这七株细胞经液氮反复冻存、复苏及连续培养,可稳定分泌抗FRV的单克隆抗体.这七株杂交瘤细胞的染色体数为90～98条,明显高于SP2/O细胞(71条).分泌的单克隆抗体经琼脂双扩散法证实分别属于小鼠r球蛋白中的IgG_1、IgG_(2a)和IgG_(26)亚类.ELISA测得腹水抗体滴度1:2万～1:40万,病毒中和试验显示C_6、G_7有中和作用,滴度达1:64.

从草鱼细胞分离到一种抗出血病病毒蛋白因子的研究

从人工诱变筛选的草鱼抗出血病病毒AHZC88细胞中检测到一种高效的抗病毒因子,经(NH_4)_2SO_4沉淀,PAGE洗脱和HPLC分离,得到纯化的抗病毒蛋白。该蛋白在出血病病毒的敏感细胞株ZC7901和CP80上表现出很强的抗病毒活性,平均滴度Log_4CPEI_(50)/0.1 ml在7.10±0.10(±S)以上。理化性质研究表明,该因子100000g离心不沉降,抗酸,不耐热,等电点为5.2。转译后分子量为29kD,经糖基化修饰成为38kD和36kD两种糖肽,未检出明显的磷酸化修饰,其沆病毒作用依赖于细胞内RNA和蛋白质的合成,并存在一定的细胞或病毒特异性。该因子在鱼体中有明显的抗病毒感染作用,能降低发病率,延缓发病时间。

外源DNA处理的草鱼对草鱼出血病毒的抗性观察

用草鱼出血病毒人工感染经鲤鱼总ＤＮＡ处理的草鱼和普通草鱼，在剂量为０．２ｍＬ／尾时，前者的ＬＤ５０较为一致，为１０－２．９７，后者的为１０－３．５６～１０－３．７２，前者比后者的抗病力强３．８９～５．８９倍，潜伏期长１～２ｄ，死鱼持续时间短１～２ｄ．

海水网箱养殖鲈鱼的一种病毒性疾病

本文首次报道了海水网箱养殖鲈鱼出血病，发病季节在６～１１月份，死亡率达５０×１０－２。病鱼体表、上下颌充血出血，肠道充血。在病鱼的肝、肾、脾、肠以及体表充血处的肌肉均没有分离到致病菌。电镜观察发现病鱼体内存在２种病毒颗粒，一种存在肾上皮细胞，具囊膜，直径约２５０ｎｍ；另一种存在肠肌细胞，无囊膜，大小约５０ｎｍ。受病毒侵染的细胞受损严重。

鱼呼肠孤病毒诱导草鱼肾细胞凋亡

采用荧光显微镜、电子显微镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪分析等技术研究鱼呼肠孤病毒诱导草鱼肾细胞 (CIK)凋亡。结果显示 ,鱼呼肠孤病毒感染CIK细胞后 ,光镜下可见空斑形成 ;荧光染色观察到细胞凋亡碎裂核 ;且电镜下呈现细胞核裂解 ,核周裂隙增大 ,细胞膜内陷并出泡形成凋亡小体现象 ;琼脂糖凝胶电泳出现 1 80— 2 0 0bp整数倍的DNA梯形带 ;流式细胞仪检测到典型的细胞凋亡峰 ,在病毒感染 48h ,细胞凋亡百分率达 1 5%。上述结果显示 ,鱼呼肠孤病毒诱导CIK细胞凋亡是其致细胞病变死亡的重要表现形式之一。

两种草鱼出血病病毒株的比较

草鱼出血病病毒（ＧＣＨＶ）是我国分离成功的第１种鱼类病毒，隶属于呼肠孤病毒科水生呼肠孤病毒属（Ａｑｕａｒｅｏｖｉｒｕｓ）［７，１４］。ＧＣＨＶ是草鱼出血病的病原体，可导致当年龄草鱼（Ｃｔｅｎｏｐｈａｒｙｎｇｏｄｏｎｉｄｅｌｈｕｓ）鱼种大批死亡［５，８...

鳗鲡出血性开口病的病理学研究

本文报告了我国发生的一种鳗鲡病毒病──鳗鲡出血性开口病的组织病理变化：肝、肾、脾脏组织出血、细胞变性，骨质内有大县白细胞浸润，肝、肾、脾脏细胞超微结构病理变化明显，肾、脾脏造血组织和外周血细胞出现核染色质边集、奇异形核，大量髓鞘样结构、自噬体和自噬溶酶体等，并可见类似凋亡细胞及调亡小体结构和邻近细胞内吞噬体增多现象。根据骨组织中白细胞浸润及器官和血液中部分细胞结构已出现异型性特征，作者认为，鳗鲡出血性开口病可能有癌变的趋势．

草鱼出血病病毒873株基因组外发现缺损性干扰颗粒的亚基因组成份

草鱼出血病病毒基因组由 11条dsRNA片段组成。最近在研究其基因组时发现 ,在病毒基因组外存在许多核酸成份 ,但在核苷酸数量上少于基因组成份 ,表现为较小分子量的RNA片段。在完整地克隆了这些片段的全长cDNA后 ,测定了其中两个克隆的序列组成 ,发现它们为病毒基因组经剪切后的部分片段 ,已经重新装配 ,而且都含有原基因组某一片段 3′端和 5′端的保守区和倒转重复区 ,缺失中间部分。根据其特点来看 ,它们应为目前病毒学研究的重要材料———缺损性干扰颗粒的亚基因组成份。