国内养殖鱼类和进境鱼卵中传染性造血器官坏死病毒(IHNV)的检测及基因分析

用传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的反转录聚合酶链及该方法在来自国内养殖场的患病牙鲆和虹鳟及进口的匙吻鲟鱼卵中检测出IHNV,同时对扩增出的IHNV的DNA片段进行了序列分析。结果表明,从国内养殖的牙鲆和虹鳟中分离出的IHNV与IHNV的标准株RB-1株在序列上都具有98.1%的同源性,推导出在氨基酸序列上分别具有97%和99%的同源性。从进口匙吻鲟鱼卵中分离的IHNV与RB-1株在序列上都具有92.5%的同源性,推导出氨基酸序列有93%的同源性。系统发育树分析结果表明,从国内发病的养殖虹鳟中分离出的IHNV与进口匙吻鲟鱼卵中检测到的IHNV在进化上关系较为密切。

感染鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)的异育银鲫血液生理生化指标及相应组织学变化

于江苏大丰金鹿合作社采集三种状态的异育银鲫Carassius auratus gibelio样本,试验1组(H)来自未发生过鲤疱疹病毒(Cy HV-2)病的2个池塘(面积200×667m2),即为无Cy HV-2病症状的病毒携带者;试验2组(IH)和试验3组(I)为正在发病的2个池塘(面积200×667m2),IH组有轻微的Cy HV-2病症状,而I组为典型的Cy HV-2病症状,测定其血成分、血清生化指标,并观察肠道和肝胰脏的组织病理学,以探讨异育银鲫感染鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cy HV-2)的发病机制。结果表明:IH组和I组鲫除淋巴细胞百分比显著升高外(P<0.05),中性粒细胞和单核细胞百分比、红细胞和血栓细胞数、血红蛋白、血栓细胞压积均显著低于H组(P<0.05);I组淋巴细胞百分比显著高于IH组(P<0.05),而中性粒细胞百分比却显著低于IH组(P<0.05),其他各项指标无显著差异。IH组和I组除天门冬氨酸基转移酶/丙氨酸氨基转移酶、白蛋白、白球比例比H组显著升高外(P<0.05),胆碱酯酶和碱性磷酸酶活性、总胆汁酸、甘油三酯、高密度脂蛋白/低密度脂蛋白均显著下降(P<0.05)。I组与IH组结果比较,天门冬氨酸基转移酶、天门冬氨酸基转移酶/丙氨酸氨基转移酶、白蛋白、白球比例均出现显著升高(P<0.05),而胆碱酯酶、碱性磷酸酶出现显著下降(P<0.05),总胆汁酸含量下降了38倍,下降明显,其他均无显著变化。扫描电镜观察发现,H组红细胞表面光滑完整,IH和I组均有一定的损伤;相比H组,IH组、I组的肝胰脏和肠道的组织结构损伤,且随着患病严重性的增加而加重。

鱼类造血器官坏死病病毒检测及其防控研究进展

造血器官坏死病病毒(IHNV)为线性单链RNA病毒,是鱼类病毒性病原体的一种,能引起野生及养殖鲑鱼或鳟鱼的急性系统病。鱼类感染该病毒后会造成内脏器官的坏死,引起死亡。造血器官坏死病(IHV)是鱼类病害中较为难治的一种病毒病,截止到目前为止还没有有效的治疗方法。对IHN的防控,主要集中在预防及对IHNV的分子生物学特性研究方面;根据病毒生物学特性开发出有效的防控方法成为目前主要的研究重点。论文主要阐述了IHNV的分子生物学特征以及传染性造血器官坏死(Infectious hematopoietic necrosis,IHN)的临床症状等,综合近几年国内外对IHNV的研究现状,介绍了几种包括细胞培养、PCR、LAMP等技术在内的几种快速有效的IHNV检测技术,以及病毒疫苗、免疫佐剂、病毒干扰物等在内的主要防控方法。

传染性造血器官坏死病研究进展

对传染性造血器官坏死(IHN)的临床症状、流行特点与传染性造血器官坏死病毒(IHNV)特征(生物学特征、基因组和不同基因型分离株的地理分布)、检测技术及疾病防治等方面进行了综述。

进境鱼传播传染性造血器官坏死病风险分析模型的建立

世界动物卫生组织(OIE)将传染性造血器官坏死病(IHN)列为必须报告的动物疫病,我国将其列为二类动物疫病。本文运用风险分析理论,从危害确定(流行地区、传播方式和传染源、临床症状和潜伏期、发病机理及病理变化等)、传入概率、社会经济危害、风险管理(产地选择、时间限制、预防免疫、实验室检疫等)和风险交流(主要为检疫系统评价)等角度切入,建立了进境鱼传播IHN的风险分析模型。风险分析结果:从IHN流行地区进口一尾鲑传入IHN的概率为4.2×10-3。

传染性造血器官坏死病毒(IHNV)实时荧光环介导等温扩增快速检测方法的建立

建立了一套基于环介导等温扩增技术(LAMP)的实时荧光检测方法,用于IHNV的检测。根据IHNV的保守基因glyG,设计合成3套LAMP引物,LAMP反应在63℃下进行,引入环引物后,第3套LAMP引物显示出良好的扩增效率。以ESE-Quant tube scanner为恒温反应及检测平台,对IHNV进行实时荧光检测,反应在40 min内可得出结果。本研究建立的IHNV实时荧光LAMP法检测限达到3.6 pg。特异性试验表明仅IHNV发生特异性扩增,而SVCV、VHSV、HRV、PFRV以及IPNV均不发生反应。所建立的恒温实时荧光检测法操作简单、反应迅速,同时具有较高的灵敏度和特异性。引入的ESE-Quant tube scanner平台设备要求低,同时使扩增过程数字化和自动化,适合IHNV的现场检测和大规模疫病的监控。

中国本溪虹鳟传染性造血器官坏死症病毒(IHNV)的初步研究 (摘要)

1990年4月,辽宁省本溪市虹鳟鱼种场的虹鳟稚鱼爆发大规模疾病,患鱼长约2.5cm,体重约0.2克,以体侧肌肉线状出血为典型特征,死亡率近100%.取病鱼组织处理后接种于冷水性鱼细胞,出现明显的细胞病变(CPE).按照Reed Muench两氏法在96孔板的CHSE细胞中,测定细胞培养物的病毒滴度,最高达到10^(6.3)T CID50/0.1ml.感染病毒的细胞用1%营养琼脂糖履盖后可形成0.5～1.5mm的蚀斑.经理化特性和生物学特性测定表明,分离出的病毒对氯仿敏感,不耐热、不耐酸。

流行性造血器官坏死病病毒MCP蛋白表达

采用RT-PCR方法克隆流行性造血器官坏死病病毒CH-1株MCP蛋白基因编码区,进而将膜外区编码基因片段,克隆于pET-32a,重组质粒pET-32a-MCP转化ROSETTA(DE3),经1.0 mmol/L IPTG诱导,外源基因获得高效表达。通过Western-blot试验证明表达产物具有良好的反应原性。

一种用于口蹄疫病毒实时荧光RT-PCR检测的引物和方法

本文建立了一种用于口蹄疫病毒实时荧光RT-PCR检测的引物和方法。分析所有已报道的口蹄疫病毒通用型基因组序列,分别设计引物和荧光探针,通过实时荧光RT-PCR检测,得到口蹄疫通用型的特异性荧光曲线,可以确定血清型,检测结果准确、可靠。

虹鳟IHNV－B病毒血清型测定

虹鳟ＩＨＮＶ－Ｂ病毒血清型测定赵志壮（中国水产科学研究院黑龙江水产研究所）１９９０年在我国本溪虹鳟鱼场患病鱼苗中分离出一株弹状病毒，对其进行了理化特性、生物学特性测定，并进行了电子显微镜观察，鉴于该病毒与已报道的ＩＨＮ病毒在形态、特性及流行病学上的一...

传染性造血器官坏死病毒的新型环介导等温扩增(LAMP)荧光检测技术

本研究建立了一种检测传染性造血器官坏死病毒（IHNV）的新型荧光环介导等温扩增法,为实验室及现场检测IHNV提供特异性强、灵敏度高、快速、能实时观察扩增荧光信号的检测技术。针对IHNV全基因组序列设计了一组6条LAMP特异性引物,对4株不同来源的IHNV和8株不同的病毒进行特异性实验和灵敏度实验,结果表明该方法具有高度特异性,检测灵敏度可达3.64×10^-7μg/μL,比常规RT-PCR高1000倍,与荧光RT-PCR方法相当。通过环介导等温扩增技术（LAMP）和荧光检测技术相结合,使其检测时间能缩短至15～20分钟内完成检测,并可杜绝由于开盖加染料而导致的假阳性率偏高问题,在鱼病快速检测上具有重要意义。

传染性造血器官坏死病毒研究进展

传染性造血器官坏死病毒（Infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV）,弹状病毒科,诺拉弹状病毒属[1]作为传染性造血器官坏死病（Infectious heamatopoietic necrosis,IHN）的病原体,是一种线性单链RNA病毒,

两株传染性造血器官坏死病病毒的分离及其糖蛋白基因序列分析

对所分离编号为20101008和20101032的两株传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的糖蛋白编码基因进行遗传进化分析,以揭示我国毒株与其他不同国家和地区毒株间的遗传进化关系。以反转录RCR(RT-PCR)法扩增其糖蛋白(G)编码基因,然后克隆入PMD-18T载体并测序。应用DNAStar和MEGA4.0软件,将20101008和20101032的G基因与多株GenBank中已发表的IHNV毒株相应基因进行比较。结果表明两株病毒间G编码基因的核苷酸和推导出来的氨基酸同源性分别为98%和81.9%,其氨基酸序列分别发生了35和20处氨基酸的替换。20101008和20101032与日本、韩国分离株同源性较高,核苷酸及推导出来的氨基酸同源性分别为93.3%～96.4%和75.9%～84.6%;两株病毒在进化关系上亲缘关系最近,属于同一分支,均为基因U型传染性造血器官坏死病病毒,但其G基因的核苷酸序列以及推导出来的氨基酸序列与已知的基因U型IHNV都有一定的差异。

传染性造血器官坏死病毒液相芯片检测技术

用DNAStar7.0软件对GenBank中IHNV的N基因进行序列分析,设计IHNV特异性引物并标记生物素,将探针氨基化修饰,与荧光编码微球偶联后与RT-PCR产物杂交反应,用液相芯片仪器检测荧光信号,建立了传染性造血器官坏死病毒(IHNV)的液相芯片快速检测技术。结果表明液相芯片检测体系对IHNV病毒核酸的最低检出量为100pg,且特异性高,与其他病毒无交叉反应。应用建立的液相芯片技术检测鱼类中IHNV,并与RT-PCR方法进行比较,检测结果基本一致,但该方法比RT-PCR法更灵敏。表明初步建立了检测IHNV的液相芯片技术,为进一步构建其他水生动物病原体快速高通量检测平台提供参考。

青海:传染性造血器官坏死病控制与净化工作经验

传染性造血器官坏死病(IHN)在农业农村部《一、二、三类动物疫病病种名录》中被列为二类疫病。2010年7月～2012年5月,传染性造血器官坏死病(IHN)在青海省互助县、门源县和循化县鲑鳟鱼养殖场相继暴发,为了有效预防传染源的传播和蔓延,切断传播途径,确保青海省鲑鳟鱼养殖产业绿色健康发展,从2012年起青海省开始全面推广和实施鲑鳟鱼养殖生物安全管理技术。2014年开始。

江西省鲫鱼造血器官坏死病病毒(CyHV-2)感染流行病学研究

为了解江西省鲫鱼造血器官坏死病的流行状况和特征,2015~2017年,从江西省22个区(县、市)的水产养殖(苗种)场采集80批鲫样品,使用聚合酶链式反应(PCR)和实时荧光定量PCR(qPCR)进行病原鲤疱疹病毒Ⅱ型(cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)的监测,扩增部分基因片段,进行测序和做进化树分析。结果显示,80批鲫样品检出CyHV-2型阳性样本6批,阳性检出率为7.5%,江西省存在CyHV-2散在性分布;系统进化分析显示江西省监测的所有CyHV-2毒株与YC110907、SY-C1、JS2012、H.Fukuda等CyHV-2病毒株属同一分支。鉴于目前江西省CyHV-2尚未成扩散的趋势,需加强苗种引种检疫,筑牢产业生物安全屏障。

检测鱼传染性造血器官坏死病毒重组酶聚合酶扩增方法的建立及初步应用

为建立鱼类传染性造血器官坏死病毒(IHNV)的快速检测方法,根据IHNV的G基因保守序列设计特异性引物,建立了基于重组酶聚合酶扩增(RPA)的IHNV检测方法。该方法在30℃20min即可完成,对IHNV具有良好的特异性和敏感性,最低检出限为156ng/mL;用建立的RPA和RT-PCR对实验室保存的50份样品进行检测,结果显示,RPA的阳性检出率为14.00%,RT-PCR的阳性检出率为12.00%,说明RPA比RT-PCR具有更高的灵敏度。建立的RPA方法为IHNV的实验室检测提供了更多选择。

刘家峡水库IHNV检测与分离鉴定

[目的]为了监测IHNV在刘家峡水库不同水生动物中的流行情况并对其进行鉴定。[方法]利用ELISA抗原检测法对水库上游(三塬电灌区)、中游(刘家村)和下游(祁家渡口)三个主要网箱养殖片区内养殖的虹鳟、金鳟、杂交鲟、青海湖裸鲤、鲤以及野生池沼公鱼和浮游动物开展了IHNV检测;之后用检测阳性的虹鳟的组织样本进行病毒分离、巢式RT-PCR检测,并将扩增产物测序后进行系统进化树分析。[结果]在检测的53份样品中,分别在祁家渡口网箱养殖区1号虹鳟的肾脏、2号虹鳟的肝脏以及2号鲟鱼的肝脏和脾脏混合样中检测出IHNV阳性;将阳性虹鳟的头肾、肝脏、脾脏组织匀浆后接种到EPC细胞中,第5 d开始出现CPE,巢氏RT-PCR检测培养物为IHNV阳性,测得该病毒72 h的滴度为10^(8.23)TCID_(50)/mL,系统进化树分析结果显示,所分离毒株与国内2016年黑龙江报道的HLJ-09株序列同源性最高。[结论]刘家峡水库网箱养殖区的虹鳟、鲟鱼是IHNV的宿主,靠近下游的祁家渡口网箱养殖片区IHNV检出率最高,分离得到的IHNV可能与2016年报道的黑龙江HLJ-09株同源。