PHA体外诱导草鱼白细胞产生γ-干扰素的研究

于 1 997年 1 0月— 1 999年 3月 ,采用半数细胞病变抑制等方法 ,进行植物凝集素(Phytoagglutinin ,PHA)体外诱导草鱼白细胞产生γ 干扰素的研究。结果表明 ,在PHA诱导的草鱼白细胞培养液中出现了一种抗病毒因子 ,经理化和生物学性质鉴定证明 ,该因子是一种干扰素活性物质。但它不同于病毒诱导的α/β 干扰素 ,主要表现为 :对 56℃、pH =2和0 1 %SDS敏感 ;其活性不能被病毒诱导的干扰素抗体所中和 ;其诱生剂为PHA ,来源于白细胞 ;在诱导条件上 ,佛波酯 (PMA)和白细胞介素 2 (IL 2 )能显著地促进其诱生 ,这些特性与人类和高等脊椎动物中报道的γ 干扰素相符 。

恩诺沙星控制草鱼维氏气单胞菌的用药方案

从四川成都一养殖场大规模发病死亡的草鱼(Ctenopharyngodon idella)病灶处分离一株病原菌CiAV01,结合形态学和16S rDNA序列分析,鉴定该菌为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)。回归感染实验结果表明,分离菌株感染草鱼致死率为100%,出现了局部出血、腹腔积水等症状。采用琼脂平板扩散法研究了16种抗生素对分离菌株CiAV01的体外抑菌作用,在供试的抗生素中,恩诺沙星对该分离菌株CiAV01最为敏感。选择恩诺沙星对分离菌株进行体外药效学研究表明,恩诺沙星对分离菌株CiAV01的最小抑菌浓度(MIC)为0.25μg/mL,最小杀菌浓度(MBC)为0.50μg/mL,MBC/MIC为2。结合其药物动力学参数和MIC、MBC、防突变浓度(MPC)、突变选择窗(MSW)和抗菌后效应(PAE)制定防突变给药方案为:剂量20 mg/kg、每日一次给药、连续给药3～5 d。

复方中草药制剂对草鱼肝胆综合症的防治研究

试验以患肝胆综合症的草鱼(C tenopharyngodon idellus)种苗为研究对象,选用复方中草药制剂为试验药物,设置3个质量分数分别为0.50%、0.75%和1.00%的复方中草药药饵组,1个不含该复方制剂的常规饲料组,1个青饲料组,饲喂4周;结合组织病理学方法,探讨了草鱼肝胆综合症的病理及复方中草药制剂对该病的治疗效果。结果表明,草鱼病变肝组织出现大片自溶性坏死和弥散性病变,肝细胞核偏移,发生空泡变性和水样变性;0.50%、0.75%和1.00%3个药饵试验组与青饲料和不含药物这2个非药饵对照组中,患病草鱼的成活率分别为60.0%、80.0%、96.7%、36.7%和16.7%。试验组草鱼比对照组草鱼肝胆综合症症状有明显好转,表现为鱼的体色、体表粘液和肝脏形态、色泽、质地恢复正常;背鳍、尾鳍边缘发白以及鳃部淤血、充血现象消失,鳃部粘液明显减少。1.00%试验组草鱼肝脏肝小叶分界清楚,肝细胞之间的界限清晰可见,肝细胞的核膜与核仁容易辨认,肝细胞核位移细胞中部,肝细胞逐渐恢复正常。

草鱼呼肠孤病毒vp5基因诱饵重组载体的构建、转化与自激活作用检测

根据草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)的vp5基因设计特异性引物,并扩增其开放阅读框序列(open reading frame,ORF),然后连接至pGBKT7载体上构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-vp5,转化至酵母菌Y2HGold,并进行PCR鉴定以及自激活性和毒性检测。PCR、酶切以及测序表明,pGBKT7-vp5重组诱饵载体构建成功。自激活性和毒性检测显示,阳性重组菌株pGBKT7-vp5/Y2HGold和阴性对照菌株pGBKT7/Y2HGold在SD/-Trp平板上出现大小相一致的乳白色菌落,且在SD/-Trp/X-α-Gel、SD/-Trp/AbA+/X-α-Gel平板上生长出蓝色菌落,而在SD/-Trp/-Ade/-His无菌落出现。表明重组菌株pGBKT7-vp5/Y2HGold表达的融合蛋白激活了报告基因AUR1-C和MEL1,没有激活报告基因ADE2和HIS3并且对宿主菌无毒性。该重组诱饵载体可用于酵母双杂交系统进一步筛选cDNA文库中与其相互作用的蛋白。

草鱼呼肠孤病毒VP6蛋白在毕赤酵母中表达的初步研究

根据GeneBank中草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)104株VP6蛋白的全基因序列(HM234682)设计一对特异引物,以提取的GCRV-104核酸为模板,采用RT-PCR技术扩增VP6蛋白编码基因,并将其克隆到含强启动子AOXⅠ的毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPICZB上。重组酵母质粒pPICZB-VP6经SacⅠ线性化,电击转化到毕赤酵母KM71菌株中,Zeocin抗性平板上筛选高拷贝转化子。阳性转化子在30℃,0.5%(V/V)的甲醇添加量的条件下,连续诱导3 d,表达产物经SDS-PAGE和Western-Blotting检测,结果表明成功实现了GCRV-104 VP6蛋白在毕赤酵母中的胞内表达,重组VP6蛋白相对分子质量约46 000,与天然VP6蛋白相对分子质量接近,并且可与鼠抗草鱼GCRV-104 VP6蛋白的多克隆抗体特异性结合。

草鱼出血病病毒血凝作用及影响因素

为了探明草鱼出血病病毒的血凝作用及其影响因素 ,应用血凝试验对此进行了测定 ,结果表明 :病毒只对鸡红细胞引起高滴度凝集 ,这种凝集能被特异性抗血清所抑制 ;血凝的适宜 pH为 5 .5～ 7.0 ,2 %的氯化钠为较适宜的稀释液 ,血凝活性以在 37℃温度条件下最好 ;出血病病鱼肠道的凝集价最高 ;醛化的鸡红细胞在 4℃下保存一年多仍具有新鲜红细胞表面受体活性 ,从而使草鱼出血病的HA和HI试验更具有稳定性和广泛的实用性 。

草鱼呼肠孤病毒096 vp4基因生物信息学分析及其在肾细胞中的表达

克隆得一株新分离病毒草鱼呼肠孤病毒(GCRV)096的长为1 981 bp的vp4基因,分析该基因的生物信息及其编码蛋白的特性。生物信息学分析表明,同一基因型GCRV分离株vp4基因间的差异不大,但不同基因型GCRV分离株vp4基因间却存在很大的差异。GCRV 096 VP4蛋白含有多个功能位点、2个跨膜结构域及多个潜在的抗原决定簇。构建p EGFP-N3-VP4真核表达质粒,并转染至草鱼肾(Ctenopharyngodon idellus kidney,CIK)细胞中,经荧光显微镜观察和Western blot鉴定,表明GCRV 096 VP4融合蛋白在CIK细胞中得以成功表达。

“全鱼”Mx基因重组构建与转导分析

通过分子重组将鲫Mx1基因的编码序列克隆到鲤β肌动蛋白基因启动子下游,构建成能在鱼体内表达的转"全鱼"Mx基因的重组分子。采用显微注射方法,将含有鲤β肌动蛋白基因启动子和鲫Mx1基因序列的重组片段转入草鱼受精卵中,经人工孵化和养殖获得转全鱼Mx基因草鱼。经PCR和Southern杂交检测分析,证实重组分子成功整合到2月龄转基因草鱼基因组中,为草鱼抗病育种研究奠定了基础。

青萎散

本品是由有益微生物菌群组成的纯天然活性生物制品。该制剂富含蔬菜生长所需要而又难以从土壤中摄取到的多种微量元素、促长因子及抗病毒因子，其有效成分能在作物根部土壤内繁殖并进入幼苗体内，定植存根或茎的劬皮部薄壁细胞内，从而抑制有害菌侵入幼苗和成株体内滞伏。

草鱼出血病防治技术

草鱼出血病是在草鱼养殖过程中，会出现以下症状：①剥去鱼体表质，可见肌肉点状出血，或全身肌肉充血呈鲜红色．对着太阳光看时尤为明显。与此同时．鳃瓣失血变白，这种症状一般在较小(体长7～10厘米)的草鱼种中常见。②鱼的鳃盖、鳍基、头项、口腔、眼眶等明显充血。但体衰充血不明显。

一例草鱼霉菌中毒案例浅析

饲料中含有活性的霉菌或孢子时，毒素含量在条件适合时将极大增加，使动物生长受阻甚至引起死亡。现笔者就一例草鱼食用发霉菜干后中毒死亡的案例谈谈自己的体会。