大口黑鲈蛙虹彩病毒MCP蛋白多克隆抗体的制备与应用

【目的】制备大口黑鲈蛙虹彩病毒主衣壳(MCP)蛋白兔多克隆抗体,以期为该病毒蛋白功能研究奠定基础。【方法】对pET32a(+)MCP/BL21重组大肠杆菌进行诱导表达,将重组蛋白进行纯化、复性,以此为抗原免疫大耳兔制备多克隆抗体,ELISA检测抗体效价,间接免疫荧光试验(IFA)和Western Blot法分析MCP多克隆抗体的特异性。【结果】纯化的MCP重组蛋白条带特异;间接ELISA结果显示,制备的兔多克隆抗体血清效价为1∶1024000;IFA和Western Blot检测结果表明该多抗特异性良好,能够与大口黑鲈蛙虹彩病毒MCP蛋白发生特异性反应,IFA试验表明血清最适稀释度为1∶500。【结论】成功制备了大口黑鲈蛙虹彩病毒MCP兔多克隆抗体,该抗体可特异性识别大口黑鲈蛙虹彩病毒MCP蛋白。

红螯螯虾弗氏柠檬酸杆菌病病原的分离与鉴定

从濒死的红螯螯虾(Cheraxquadricarinatus)的肝胰脏中分离得到可疑病菌L1和L2,经细菌学鉴定2株细菌均为弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacterfreundii);经人工感染试验证实L1和L2均导致健康虾发病死亡,其LD50分别为2 2×105CFU/ind、7×105CFU/ind;2株细菌对14种药物的敏感性相似,对9种抗生素敏感,对5种抗生素有抗性。从中筛选出有效药物,应用于生产中取得了较好效果。

鲈鱼苗烂鳃、烂尾病病原菌的研究

１９９７年４～５月，对花鲈（Ｌａｔｅｏｌａｂｒａｘｊａｐｏｎｉｃｕｓ）鱼苗期细菌性烂鳃和烂尾病的病原菌进行了研究。从具有明显症状的病鱼的病灶组织分离到２株致病菌Ｃ－１和Ｗ－１，经人工感染及从人工感染发病鱼体再分离的Ｗ－４和Ｗ－５菌株的再感染试验结果表明，所分离的细菌为鲈鱼苗烂尾，烂鳃病的致病菌。经６４项生物学特性，生理生化特征测试结果表明，这４株菌可归为一类，同属于鳗弧菌（Ｖｉｂｒｉｏａｎｇｕｉｌａｒｕｍ）。药敏试验结果表明，痢特灵、ＣＩＮ１００、ＭＥＬ２５、呋喃妥因、氯霉素、磺胺药＋ＴＭＰ和美洛西林等７种药物对病原菌有显著的抑制作用。

海水网箱养殖鲈鱼皮肤溃疡病的防治药物

本文研究了海水养殖鲈鱼皮肤溃疡病病原菌—哈氏弧菌 (Vibrioharveyi)对 2 4种化学疗剂及 1 5种中草药的敏感性。结果表明 :环丙沙星、氯霉素、庆大霉素、头孢孟多、磺胺 +TMP、磺胺甲基异恶唑等 6种化学疗剂及地榆、石榴皮、五味子等 3种中草药抑菌作用较强 ,在此基础上进行了药物联用效果试验。

鳜塘水体理化因子昼夜变化及相关性研究

通过对鳜塘水体部分理化因子昼夜检测及藻类的观察 ,分析了塘水重要理化因子昼夜变化情况。结果表明 ,不同鳜塘溶氧、pH值昼夜升降变化规律基本一致 ,总铵、亚硝酸盐氮、磷酸盐磷昼夜变化因塘而异。鳜塘生态因子的统计分析还显示 ,磷酸盐磷与异氧细菌数 (r2 8=0 30 )相关性最大 ,其次是与溶氧 (r2 8=0 2 4 ) ;亚硝酸盐氮与叶绿素a呈负相关 (r2 8=- 0 35) ;总铵与多数因子呈负相关 。

海水网箱养殖鲈鱼淋巴囊肿病的初步研究

在 1996年调查的基础上 ,首次报道了浙江海水网箱养殖鲈鱼淋巴囊肿病的发病情况 :发病季节在 6～ 8月 ,1龄鱼苗发病率 70 %,死亡率 30 %。电镜观察表明 ,体表和鳍上的疣状物主要由淋巴囊肿细胞组成 ,细胞内充满虹彩病毒颗粒。肝细胞和肠上皮细胞内没有发现病毒颗粒 ,但溶酶体数量增多 ,肝细胞结构有部分损伤。本文还描述了虹彩病毒在肥大细胞内的增殖过程。

聚合酶链反应(PCR)检测花鲈鳗弧菌感染

从海洋鱼类重要病原菌———鳗弧菌基因库中选择金属蛋白酶基因为目标检测基因 ,以此设计一对引物 ,建立聚合酶链反应 (PCR)检测鳗弧菌的方法 ,并对此方法的灵敏性和特异性进行了研究 ,结果表明该方法对鳗弧菌的检测快速、灵敏。对人工感染鳗弧菌的花鲈组织样品进行检测 ,该方法能识别组织样品中极微量的鳗弧菌。

加州鲈鱼（Micropterus salmoides）细菌性烂鳃、烂嘴病病原菌的研究

本文报道从患细菌性烂鳃、烂嘴的加州鲈鱼（Ｍｉｃｒｏｐｔｅｒｕｓｓａｌｍｏｉｄｅｓ）病灶中分离到滑动粘细菌Ｆ５、Ｆ２５，经多次水中感染（包括再分离和再感染），能使健康的加州鲈鱼及多种池塘鱼类致病、死亡。根据其生物学特性及质粒ＤＮＡ电泳分析，两株菌属同一个种，定名为柱状纤维粘细菌（Ｃｙｔｏｐｈａｇａｃｏｌｕｍｎａｒｉｓ）。

鱼类镰刀菌的研究Ⅲ:几种药物对鱼类镰刀菌的抑制作用

研究发现制霉素（14．4～16．0mg·L－1）、K制剂（4．0mp·L－1）和孔雀绿（3，0～40mp·L-1）对镰刀菌Fu2和尖F1抑制效果好，而对Fu1-2抑制效果差；优氯净（2．0mg·L－1）能抑制Fu1-2，而不抑制Fu2和尖F1；龙胆紫（1．0mg·L-1）可抑制尖F1，而不抑制Fu2和Fu1-2制霉素对鱼毒性最小，而孔雀绿毒性最大．

海水网箱养殖鲈鱼的主要疾病与防治

通过对浙江省海水网箱养殖鲈鱼Lateilabrajaponicees疾病的调查，分别介绍了13种疾病的病原，疾病特征及防治措施。

花鲈溃疡病的防治研究

在海水网箱养殖花鲈溃疡病的流行病学研究和病原菌的生物学特性研究基础上,进行养殖水域细菌学分析和防治药物的研究,提出了以生态防病结合药物防治的综合性防治技术。结果表明:依细菌数量的动态规律可预测鱼病的发生时期。环丙沙星、氯霉素、庆大霉素、磺胺+TMP、磺胺甲基异恶唑等可作为首选药物,联合用药效果更佳。试验点的花鲈成活率为93.9%～98.6%,比较同一海区另两个养殖点的成活率72.7%和37.5%分别提高了约23个百分点和58个百分点,表明综合防治技术应用试验效果显著。

鲈鱼的鳃寄生车轮虫病及扫描电镜观察

报道鲈鱼的鳃寄生车轮虫病及病理组织的扫描电镜观察。病原鉴定为 :直钩车轮虫、杜氏车轮虫、日本车轮虫、劳牧小车轮虫及简单两分虫 5种车轮虫科纤毛虫 ,其中数量上占优势的为直钩车轮虫。扫描电镜观察结果表明 ,鳃寄生车轮虫可对宿主的上皮组织产生明显的机械性损伤并造成鳃丝粘液分泌增多及炎症反应。文中就海水养殖鱼类及野生鱼类由车轮虫寄生造成的危害及防治途径做了探讨。

鲈脾肿大症的病原及细胞病理学的初步研究

首次报道了鲈脾肿大症的发病情况。病鱼以脾脏肿大为主要症状,死亡率高达50%以上。对病鱼进行显微镜检查和细菌分离培养,未见寄生虫和病原菌。经电镜检查,在脾、肝等组织中发现大量病毒颗粒。该病毒颗粒为六边形,没有囊膜,衣壳直径180～220nm,认为该病毒属虹彩病毒(Iridoviridae)。细胞病理变化表现为感染细胞肿胀,细胞超微结构破坏,细胞质出现大面积空泡。血细胞中出现大量异形淋巴细胞,占淋巴细胞总数的50%以上。

6种常用药物对乌鳢的急性毒性研究

在室内常温、静水条件下 ,用生物毒性试验方法进行硫酸铜、敌百虫、孔雀石绿、高锰酸钾、生石灰、福尔马林对乌鳢苗种(6～8cm)的急性毒性试验 ,结果表明6种药物的安全浓度分别为0.0385、0.105、0.115、0.460、0.765、0.815mg/L ;其中生石灰不宜作为防治乌鳢鱼病的药物 。

鳜鱼养殖常见病害防治技术

介绍了鳜鱼养殖生产中常见且危害较大的一些病害及防治方法,并建议慎用晶体敌百虫来防治鳜鱼的一些疾病。