三角帆蚌HcCnAα基因克隆及维氏气单胞菌感染后的表达

钙调神经磷酸酶(CN)属苏/丝氨酸蛋白磷酸酶,在软体动物的抗菌应答、免疫调节中发挥重要作用。本研究利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得三角帆蚌CN基因α型催化亚基(HcCnAα)的cDNA序列,并进行了生物信息学分析。构建pET30a-HcCnAα原核表达载体,将诱导表达、纯化、复性后蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。用蛋白质印迹法(Western blot,WB)和荧光定量PCR(qPCR)技术分析健康状态和感染维氏气单胞菌GL2后HcCnAα在三角帆蚌不同组织中的表达情况。结果显示,HcCnAαcDNA全长2737 bp,其中3′UTR长131 bp,5′UTR长1154 bp,CDS区为1452 bp,编码483个氨基酸,序列包含蛋白磷酸酶保守的PP2Ac结构域。WB和qPCR结果显示,HcCnAα在三角帆蚌各组织中广泛存在,并在闭壳肌、斧足、性腺、鳃中的表达量较高,在血液中的表达量最低。维氏气单胞菌GL2感染三角帆蚌后3~24 h,鳃中HcCnAα的表达量显著升高,6 h时闭壳肌中表达量也显著升高,感染后24 h,肝胰腺、斧足、血液、外套膜中的表达量显著升高。而感染后48 h,闭壳肌、鳃、外套膜、肝胰腺中的表达量显著降低。研究表明,三角帆蚌HcCnAα基因与其他物种CnAα基因高度相似,具有保守的PP2Ac结构域,在各组织中普遍表达,并参与了三角帆蚌在细菌感染后的免疫反应。本研究首次克隆了三角帆蚌HcCnAα基因并制备了多克隆抗体,揭示了HcCnAα基因参与三角帆蚌的抗感染免疫应答,为深入研究三角帆蚌的免疫调控机制和疾病防控策略奠定了基础。

三角帆蚌瘟病的组织病理研究

对健康及患瘟病三角帆蚌的１３种脏器组织作了系统的形态结构观察和组织化学分析，结果表明，三角帆蚌瘟病的组织病理变化主要集中在病蚌的肝脏、胃和直肠等组织。病毒侵袭蚌体后，肝脏的吸收细胞、未成熟细胞以及胃、直肠的纤毛上皮细胞内出现病毒包涵体，ＤＮＡ和ＲＮＡ等正常代谢受到抑制，ＡＫＰ和ＡＣＰ酶的活性和分布发生异常，细胞内消化作用受阻，最后病变细胞解体，导致肝脏、胃和直肠等的广泛受损。病蚌因消化系统坏死和消化功能丧失而死亡。还就正常三角帆蚌消化系统的结构与功能作了探讨。

三角帆蚌十六种同工酶系统的表型及其在瘟病病蚌中的病理变化

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对我国三角帆蚌(Hyriopsis cumingii Lea)11种组织中16种同工酶系统的酶谱表型、组织分布、活性含量和迁移特征进行了分析,并就不同酶谱特征与基因表达状况作了讨论。证实酯酶和α-磷酸甘油脱氢酶的表型和活性含量在病蚌体内有明显的紊乱现象,表明三角帆蚌瘟病的病理机制与消化系统脂类代谢异常有密切关系。消化系统两种酶谱的特异性变化,可作为瘟病早期诊断的生化辅助指标。

6种药物对淡水蚌的急性中毒试验

6种药物对三角帆蚌的急性中毒试验表明 ,三角帆蚌在高锰酸钾各浓度试验组溶液中浸浴 96h ,未出现中毒反应 ;其它 5种药物的毒性大小顺序 :鱼虫灵 >敌百虫 >硫酸铜、硫酸亚铁合剂 >甲醛 >冰乙酸 ,其对三角帆蚌的安全浓度分别为 :0 13、1 30、2 93、15。

蚌螨对几种药物的敏感性试验

蚌螨对 5种药物的敏感性试验 ,结果表明蚌螨对 5种药物敏感程度顺序 :高锰酸钾 >敌百虫 >硫酸铜、硫酸亚铁合剂 >甲醛 >冰乙酸 ,相应的安全浓度分别为 1.0 3μg/L、1.2 0 μg/L、2 .88μg/L、3.75 μg/L、和 12 .86 μg/L.

三角帆蚌蚌瘟病的防治研究

本文用生态学和药物学相结合的方法,治疗由病毒引起的蚌瘟病取得一定进展,并报据某些西药(如血卟啉衍生物-HPD)的分子结构和药理性质,把其纳入中药学的药理范畴,达到在治疗蚌病中中西药相结合的目的。

蚌病群体控制技术的理论与实践

从系统生态学角度,探讨了三角帆蚌养殖群体和养殖系统的特征,以及系统控制、育珠生产模式与蚌病群体控制的关系。完全突破了现有水产动物疾病防治以个体为着眼点的基本理论和模式。围绕蚌病群体控制技术的核心问题———蚌病群体诊断技术,建立了育珠蚌群体的健康评价指数(H)和育珠蚌日死亡率(Yi)的计算公式,并把0.01%的日死亡率作为养殖系统的预警值。阐述了蚌病群体控制技术的具体措施及其应用效果的评价。

三角帆蚌疾病及其预防

探讨了三角帆蚌疾病的发病原因、症状，及综合防治措施。对试验池塘中的手术蚌采取综合防治措施：即池塘彻底清整消毒，蚌手术前后药物消毒，吊蚌前水体消毒，吊蚌后药物挂袋，加强日常管理，预防蚌病发生。历时一年半，实验结果表明：采取综合防治措施的育珠三角帆蚌死亡率为2．8％，而对照组的育珠蚌死亡率达68．4％。

微生物病原性蚌病的鉴别诊治

由细菌、藻类、病毒所引起的蚌病,称微生物病原性蚌病。治疗前必须通过认真的鉴别诊断,以便对症下药进行治疗。一、鉴别诊断(一)细菌性和病毒性蚌病的鉴别诊断1、双抗试验选取3—5只始发病蚌,在斧足沟或外套膜的结缔组织中一次注射抗G^+细菌的青霉素1000单位和抗G^-细菌的链霉素20毫克。经10天左右观察,双抗试验明显(有疗效),可诊断为细菌性蚌病;如果双抗试验不明显(无疗效)。

重金属铬、镉、铅、锌对三角帆蚌的毒性研究

近年来,我省曾发生了养殖户与化工厂由于三角帆蚌死亡而引起的纠纷。受漳州市中级人民法院的委托,我们进行了铬、镉、铅、锌对三角帆蚌的毒性试验。这几种重金属对水生生物的毒性研究,在国外已有不少报道,但有关三角帆蚌的毒性效应尚不多见。试验结果显示了重金属对三角帆蚌的致死浓度和影响的临界浓度。试验结果对各地法院、环保局和水产部门都具有重要的参考价值。一、材料与方法 (一)材料 1.试验生物:三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)壳长9.9—12.0cm,取自未受污染的漳州市下碑村下圆丘池塘。试验前,蚌均经暂养。

三角帆蚌蚌瘟病原的初步探讨

探讨了三个水产场三角帆蚌大批死亡的病因。取病料经匀浆、离心后取上清液,再经青霉素、链霉素处理或微孔滤膜过滤除菌,人工感染健康三角帆蚌均能引起发病死亡,并能连续传代。其症状和病理解剖变化与自然发病的蚌相似。病原病毒粒子有囊膜,核衣壳呈二十面体对称,大小80～120nm,暂称为蚌的类疱疹病毒。含毒病料置50％甘油磷酸盐缓冲液中,在0～4℃冰箱保存6个月,-20℃低温冰箱中保存一年半,仍有致病力。

精养蚌池蓝藻水华的综合防治研究

由铜绿微囊藻和水花微囊藻形成的水华俗称为"湖靛",对珍珠蚌的养殖有毒害作用;分析了蓝藻水华产生的主要原因,从7个方面论述了综合防治"湖靛"的方法。

三角帆蚌嗜水气单胞菌病的病理研究

采用生物显微镜和透射电镜观察了三角帆蚌人工感染嗜水气单胞菌后肝脏、肠道、鳃、斧足、闭壳肌等主要器官的组织和细胞病理变化 .病蚌临床症状与自然染病症状相似 ,病变早期 ,体内有大量粘液排出体外 ,蚌壳后缘出水管喷水无力 ,两壳微开 ;病变后期 ,闭壳肌失去功能 ,两壳张开 ,肠道水肿 ,有腹水 ,肠内无食物 ,肝脏呈糜烂状 ,斧足苍白 ,鳃暗黄 .组织及细胞超微结构观察可见 ,嗜水气单胞菌对肝脏危害最为严重 ,肝小管肿大破裂 ,管腔变小甚至完全堵塞 ;肝细胞肿大变性 ,胞浆内出现空泡 ,细胞核溶解 ,水肿变性直至坏死 ,间质中大量的嗜酸性细胞浸润 .其次是鳃 ,鳃丝细胞排列松散 ,纤毛受到不同程度的破坏 ,甚至脱落 ,隐窝深处细胞坏死 ,水肿 ,细胞内及细胞间出现空泡 ,粗面内质网扩张 .嗜酸性细胞局部聚集 。

嗜水气单胞菌感染后褶纹冠蚌抗氧化[0]因子的变化

用109个细胞/mL的嗜水气单胞菌菌液感染褶纹冠蚌,在注射后3、6、12、24、48 h分别取蚌的血清和肝胰腺,测定其超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的活性和谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢(H2O2)、丙二醛(MDA)的含量。结果表明,经嗜水气单胞菌感染后,试验组血清中SOD活性在3 h时与对照组有显著差异;GPX活性分别在12、24、48 h时与对照组差异显著;GSH含量分别在24、48 h时与对照组有显著差异;MDA含量分别在6、12 h极显著高于对照组。试验组肝胰腺中GSH的含量在24 h时显著低于对照组。试验组血清和肝胰腺中H2O2的含量与对照组无显著差异。褶纹冠蚌经嗜水气单胞菌感染后,血清中各抗氧化指标的变化幅度比肝胰腺的大。

人工感染三角帆蚌病毒性疾病的组织病理学观察(英文)

从自然发病的病蚌中提取出病毒,经人工感染健康三角帆蚌后呈现出典型的病理变化。组织学观察显示消化腺、胃、肠、外套膜、斧足和鳃等均出现大量细胞空泡化、部分细胞肿大、上皮细胞排列不紧密,结缔组织不完整,部分细胞溶解甚至脱落等,表明它们均为病毒损害的主要靶器官。透射电镜观察显示大量砂样病毒存在于患病三角帆蚌不同器官中。病毒粒子为直径约120 nm的圆球形,表面具有明显的纤突,无囊膜结构。被感染细胞呈现明显的病理变化,包括细胞质大片空泡化,细胞器相对减少或缺失,细胞核电子密度加深,肠黏膜上皮细胞不同程度的变性和坏死,消化腺细胞核变形肿大,鳃小片上皮细胞坏死脱落,颗粒细胞的核膜溶解等。

名特水产常见疾病与防治(十四)——珍珠蚌

1.烂鳃病该病由产气单胞菌感染所致。病蚌鳃丝残缺不齐,灰白色,粘有污物,闭壳肌松弛,两壳张开无力闭合。防治方法:①及时加注新水。②每立方米水中加入高锰酸钾20克充分溶解,或用2%食盐水浸洗病蚌15分钟。③每立方米水体用生石灰10克～15克或漂白粉1克化水全池泼洒。2.水肿病该病由细菌感染所致。病蚌闭壳肌松弛无力,外套膜积水膨胀,边缘呈波浪式水泡,内含淡黄色粘液。防治方法:①每月每立方米水体用生石灰10克化水全池泼洒1次。②用注射针抽出外套膜中积水,然后用0.1%～0.2%盐酸金霉素溶液浸洗病蚌15分钟,隔天再进行1次3.肠胃炎病该病由点状型产气单胞菌感染所致。用手捏病蚌的双壳,有松弛感。