联苯菊酯对皱纹盘鲍血细胞胞外陷阱形成的影响

为探究贝类细胞胞外陷阱对联苯菊酯(BF)胁迫的响应,实验以皱纹盘鲍血细胞为研究对象,探讨不同浓度BF(0、0.01、0.10、1.00 mg/L)对血细胞细胞活力、胞外陷阱(ETs)、活性氧(ROS)产量以及ROS、糖酵解相关基因表达量的影响。结果显示,皱纹盘鲍血细胞的细胞活力随着BF浓度升高分别降低至90.40%、80.22%和72.28%,具有一定的剂量依赖性特征。BF降低了皱纹盘鲍血细胞活力,且具有一定的剂量依赖性特征。不同浓度BF刺激后,pi3k表达量极显著上调,分别为对照的2.16、3.32和3.32倍。在0.01 mg/L BF刺激下,akt表达量极显著上调,在1.00 mg/L BF刺激下达到最高,为对照的5.34倍。在0.01 mg/L BF刺激下,hif-1α的表达量与对照组无显著差异,在1.00 mg/L BF刺激时升高最为显著,为对照的11.63倍。在BF诱导形成ETs过程中,血细胞ROS产量增加,且ROS相关基因表达量显著上调。通过添加烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶抑制剂(DPI),发现ETs的形成受到抑制,表明ROS参与了ETs形成过程。同时,在ETs形成的过程中,糖酵解相关基因表达量显著提升,初步表明糖酵解反应参与到ETs的形成过程。与对照组相比,pk的表达量显著升高,在BF浓度为1.00 mg/L时表达量最高;hk的表达量在所有刺激浓度下均极显著升高,且在BF浓度为1.00 mg/L时表达量最高。研究表明,ROS和糖酵解反应参与了BF诱导的皱纹盘鲍细胞胞外陷阱发生过程,BF可能会通过干扰血细胞发挥正常的细胞免疫反应,继而对细胞造成一定的免疫毒害作用。

1999年春季东山九孔鲍暴发性病害研究

对 １９９９ 年春季福建省东山县九孔鲍的暴发性流行病进行调研和检测，对细菌性病原进行分离纯化、回归感染确定致病原、对致病菌进行形态（包括电镜和光镜观察）和生理生化鉴定；对病毒性病原进行电镜负染和超薄切片观察、以及病理变化分析．结果表明引起此次东山养殖九孔鲍暴发性流行病的主要致病原是 ３ 种球状病毒（５０ ｎｍ 、１１０ ｎｍ 、１５０ ｎｍ ）、溶藻弧菌和副溶血弧菌．还探讨了这些病菌和病毒的致病性，并以 ４９ 种药敏纸试验寻求防治的有效药物．

东山九孔鲍细菌性疾病研究

本文分离纯化了 1 999年春东山县患病九孔鲍的 2株主要病原菌 ,进行了回归感染、药敏试验、病变组织的超薄切片观察 .结果表明此次暴发性流行鲍病的致病菌主要是溶藻弧菌和副溶血弧菌 .在所进行的 48种药物的药敏试验中 ,2株菌仅对氯霉素和复方新诺明等 8种药物共同敏感 ,药物联合抗菌试验还表明复方新诺明与磺胺甲基异恶唑等有协同作用 ,氯霉素与复方新诺明等有加成作用 .

九孔鲍暴发性流行病的病原及病理

1999年 2～ 5月 ,东山县养殖九孔鲍暴发了大规模流行病 ,不少养殖场全场覆没 .病鲍表现为分泌粘液增多、肝脏红肿、足部僵硬和反应迟钝 .应用磷钨酸负染、超薄切片的电镜观察和现场检测等方法 ,对病鲍的病原及肝肠组织的病理情况进行观测 ,结果表明引发这次养殖鲍暴发严重病害的主要病原是致病力很强的病毒和弧菌 .电镜观察到病毒发生在细胞质中的一种称为“封入体”的泡状结构中 ,证实了病原的入侵造成九孔鲍肝及肠等组织、细胞产生病变 。

杂色鲍幼苗“急性死亡脱落症”病原菌分析

从“急性死亡脱落症”发病期的杂色鲍幼苗体内和病苗附着的薄膜上,共分离到4株优势菌,即NA0301、NA0302、NA0303和NA0304。经人工浸泡感染实验证明,从病幼苗体内和苗附着的薄膜上分离到的优势菌株NA0301和NA0302是杂色鲍幼苗的致病菌,它们均为革兰氏阴性、短杆状、极生鞭毛,能运动。常规生理生化和Biolog细菌鉴定系统测试结果表明,菌株NA0301与溶珊瑚弧菌(Vibrio coralliilyticus)的亲缘关系最近,而菌株NA0302与溶藻弧菌(Vib-rio alginolyticus)的亲缘关系最近。为了进一步确定它们的分类学地位,分别测定了溶珊瑚弧菌和溶藻弧菌的16S rDNA序列,分析相关细菌相应序列的同源性,并构建系统进化树。结果表明,菌株NA0301与溶珊瑚弧菌的亲缘关系最近,菌株NA0302与溶藻弧菌的亲缘关系最近。因此,菌株NA0301和菌株NA0302分别鉴定为:溶珊瑚弧菌和溶藻弧菌。[中国水产科学,2006,13(4):655-661]

引起九孔鲍大量死亡的一种球状病毒

对 1999年初春福建省东山县工厂化养殖九孔鲍中发生的流行性死亡 ,开展了九孔鲍的病理学研究 ,电镜下发现病鲍的肝脏细胞质中有大量具被膜 2 0面体、大小约为 10 0nm的病毒粒子。通过感染实验 ,推断该病毒是造成此次九孔鲍大量死亡的病原体 ;由于肝脏细胞的大量病变和坏死引起九孔鲍的大量死亡。

皱纹盘鲍脓疱病的组织学和超微结构研究

１９９３年９月以来，大连地区许多养鲍厂的皱纹盘鲍都发生了严重的脓疱病。通过病理组织切片研究证明，脓疱病的病灶是从鲍足下表面开始逐渐扩展向足的深部，由于该病的唯一病原菌———河流弧菌Ⅱ（ＶｉｂｒｉｏｆｌｕｖｉａｌｉｓⅡ）的大量繁殖使鲍足的结缔组织、肌纤维坏死瓦解或破碎，病灶中只剩下鲍的血淋巴细胞、弧菌及细胞碎片。从超微结构观察来看，早期病鲍足的肌原纤维排列混乱疏松，横纹肌的横纹模糊，继之细胞核肿大，核膜破裂，核质均质化，呈无结构状态，核仁消失，肌糖原消失，线粒体内嵴模糊，甚至破损。在晚期病灶中含有大量的河流弧菌Ⅱ，该菌呈短杆状，外壁薄，核区明显，胞质内含有颗粒（糖原）。该菌周围的组织被腐蚀成空斑。

闽南养殖九孔鲍暴发性流行病的病原研究

从1999年春季东山县九孔鲍暴发流行病的病鲍内脏提取病原粗提液,经电镜观察和回归感染实验,证实其病原主要是病毒合并细菌感染,细菌为两种弧菌,病毒为球形,其发生基质为细胞质中一种双层膜的泡状结构,观察到病原入侵后引起鲍的组织细胞产生严重的病理变化,探讨病原的入侵途径,提出预防该流行病的一些措施.

杂色鲍哈维弧菌耐药质粒的鉴定和分析

文章对引起杂色鲍(Hallotis diversicolor)肌肉萎缩症的病原菌哈维弧菌(Vibrio harveyi)质粒上的磺胺耐药基因进行研究,结果显示,该菌株对复方新诺明完全耐药,其质粒上含有sulⅡ耐药基因。接合转化试验显示该质粒具可转移性,可使受体菌对磺胺制剂复方新诺明产生耐药性,鉴定为耐药质粒,并测定了该耐药质粒的全基因组序列,序列总长为10 940 bp,初步分析显示有7个具有一定功能的ORF框。进一步构建重组表达质粒pR-SET-A-sulⅡ,表达了目的蛋白(31 kDa)。

敌百虫对九孔鲍稚鲍和真猛水蚤的毒性作用

不同温度下 ,敌百虫对稚鲍的毒性作用不同 ,在水温 2 1～ 2 2℃下 ,2 4h、 4 8h、72h、96h的半致死浓度分别为 182mg/L、 4 6mg/L、10 6mg/L ,6 6mg/L ,安全浓度为 4 6mg/L ;水温 2 6～ 2 7℃ ,在相同时间内的半致死浓度分别降至 12 9mg/L、 11 1mg/L、 8 2 5mg/L和5 1mg/L ,安全浓度为 1 11mg/L ;敌百虫对真猛水蚤的毒性也是随着水温升高而增强 ,水温2 1～ 2 2℃ ,2 4h、 4 8h、 72h的半致死浓度分别为 2 7× 10 - 1mg/L、 3 5× 10 - 2 mg/L、 2 0×10 - 2 mg/L ,安全浓度为 3 5× 10 - 2 mg/L ;当水温升至 2 6～ 2 7℃时 ,半致死浓度分别为 8 3× 10 - 2mg/L、8 3× 10 - 3mg/L、3 6× 10 - 3mg/L ,安全浓度为 8 3× 10 - 4mg/L 敌百虫对稚鲍的亚急性作用结果是 :在 0 4～ 2 0mg/L下生活 2 0d ,稚鲍的壳长、体重、摄食及存活率随其浓度的增大而降低

噬菌体防治皱纹盘鲍脓疱病的研究

于1993年6月在大连太平洋海珍品养殖公司的12个采集点分离到河流弧菌Ⅱ的噬菌体，依据过量噬菌体可以全部裂解其宿主菌河流弧菌Ⅱ的特性，用噬菌体对皱纹盘鲍脓疱病进行了生物防治研究。结果表明，使用一定浓度的噬菌体可以有效地治疗或推迟脓疱病引起的鲍死亡，可将鲍的成活率提高50％以上。探讨了在噬菌体生物防治中遇到的难题及解决办法、噬菌体分离规律等问题。

东山九孔鲍病毒病病毒的分离观察

运用电镜负染和超薄切片技术 ,在福建东山患病的九孔鲍的肾组织细胞、肝细胞和肠上皮细胞中可见有大小为 1 0 0nm的具包囊的六角形病毒颗粒 ,病鲍组织匀浆后 ,经蔗糖分步超速离心 ,RNA酶及DNA酶消化去除组织内DNA、RNA后 ,获得纯化的病毒颗粒 .又经蛋白酶K消化后得到病毒的核酸 ,以DNaseI或RNaseA分别消化 ,经 1 % (m/m)的琼脂糖凝胶电泳证实该病毒为DNA病毒 .

皱纹盘鲍脓疱病病原菌──河流弧菌-Ⅱ的抗药机制的初步研究

1993年9月至1995年末，大连地区的一龄鲍至成鲍都出现了脓疱病，用常规方法从3个养殖厂的病鲍中分离到了3个菌株，分别为D株、N株和T株。经鉴定这3个菌株为同一种──河流弧菌-Ⅱ。这3个菌株来自3个不同的海区、不同的单位，并且这3个单位使用的抗生素种类和浓度也木同，所以这3个菌株对18种抗生素的敏感度也木同。D株对环丙沙星（抑菌坏直径30mm）、复方新诺明（抑菌坏直径27mm）等敏感，而对青霉素、青霉素Ⅱ、氨苄青霉素（抑菌环直径0mm）等耐药。N株除对青霉素Ⅱ、白霉素、吡哌酸等耐药外，对其它12种抗生素都敏感或中度敏感（抑菌环直径13．5－30mm）。T株对氟派酸（抑菌环直径22mm）、环丙沙星（抑菌环直径20．3mm）等敏感，而对氯霉素、复方新诺明等耐药。研究发现，经常使用同一种抗生素很容易使病原菌产生耐药性．连续3d使用单一的抗生素（青霉素）就会产生耐药的菌株。为证明上述3个菌株的抗药性是属于哪一类，以T株为例，提取总DNA，并对总DNA进行EcoRⅠ酶切图谱分析，图谱有明显的异同，说明3个菌株的抗药性不同可能与基因突变有关。不管是非遗传型还是遗传型，都是由于抗生素为细菌提供了耐药突变株的选择环境，从而使耐药菌株得以大量繁殖。

高温胁迫对皱纹盘鲍幼鲍生长和成活的影响

为研究皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)对高温的耐受性,选取经过选育的皱纹盘鲍幼鲍进行试验。试验共分5组,每组设置3个平行,其中自然水温组A为对照组,其他4组分别为B组25℃、C组28℃、D组31℃及E组32℃。研究了皱纹盘鲍幼鲍在温度渐变条件下不同温度组的生长和死亡情况,从而分析其耐高温能力。试验进行了45 d,A^E组的死亡率分别为2.2%、11.1%、43.3%、81.1%和86.7%;壳长增长率分别分别为1.2%、0.5%、0.3%、0.1%和0.1%;壳宽增长率分别为1.2%、0.6%、0.3%、0.1%和0.1%;湿质量增长率分别为6.6%、3.3%、1.7%、1.1%和1.2%。结果表明,当温度高于其最适温度时,随着温度的升高皱纹盘鲍幼鲍的死亡率升高、生长变缓慢;并可初步判断该品系的皱纹盘鲍幼鲍可耐受30℃以上水温。

杂色鲍幼苗大规模死亡与细菌数量的关系

对杂色鲍育苗过程中养殖池、附着板上的细菌数量进行了监测,当鲍苗出现大规模死亡前后,池水及附着板上细菌数量比养殖初期高2个数量级,利用臭氧处理养殖水后,附着板上的细菌数量没有发生根本变化,鲍苗同样出现死亡,鲍苗剥离后1周左右也出现大规模死亡。在鲍苗大规模死亡前后分离的细菌经过鉴定为塔式弧菌及Vibrio sp.

应用双抗夹心ELISA法检测皱纹盘鲍致病病原—创伤弧菌的研究

以皱纹盘鲍脓足病致病病原－ － 创伤弧菌为抗原，制备兔抗血清，抗体纯化后以辣根过氧化物酶标记，建立检测创伤弧菌的双抗夹心ＥＬＩＳＡ 检测法。结果表明，双抗夹心ＥＬＩＳＡ 法有较高的灵敏度，可检出含菌１０４ 个／ｍｌ 的菌悬液。与创伤弧菌对照菌株有明显的阳性反应不与副溶血弧菌、溶藻胶弧菌、河流弧菌等８ 株对照菌株产生影响检测结果的交叉反应。应用该法检测３０ 份病鲍样品，阳性检出率为６６ ．７ ％ 。

皱纹盘鲍脓疱病菌—河流弧菌Ⅱ胞外产物的研究

利用杯碟法研究了河流弧菌Ⅱ的胞外产物．结果表明：河流弧菌Ⅱ含有淀粉酶、明胶酶、脂肪酶、酪蛋白酶、溶血因子，不含卵磷脂酶、脲酶．由于淀粉酶有分解糖原的作用；明胶酶、酪蛋白酶分解胶原等蛋白成分；脂肪酶分解了脂类；溶血因子使鲍的血细胞溶解，在病灶中，核仁消失，双层核膜破裂，核质外泄．病灶内的核糖体减少或消失，线粒体异形，嵴减少或甚至消失使其呈双层膜的空泡状结构，肌糖原消失，内质网变成大小不一的圆形空泡．在晚期的病灶内，肌纤维、结缔组织细胞几乎已完全溶解，只有许多血淋巴细胞存在．除少量细胞结构完整外，大部分血淋巴细胞的质膜破裂，胞质内充满圆形液泡，大部分胞质变性后破碎消失．核质均质化，呈无结构状态，核仁消失，核内具有数个高电子密度的结晶状颗粒．

皱纹盘鲍“足萎缩症”幼鲍超微结构研究

利用超薄切片电镜技术对2005年春季大连养殖场患“足萎缩症”皱纹盘鲍（Haliotis discus hanni）幼鲍足、吻、外套膜、肝胰腺超微结构进行了研究，结果表明：足肌肉组织、吻组织、外套膜组织细胞内出现典型的病理变化。肠组织细胞内出现外膜包裹的聚集大量α糖原颗粒的包涵体。鳃组织细胞内线粒体形态异常，含有类晶格微丝结构，病变细胞间出现α糖原颗粒累积包涵体，说明病变细胞内出现严重的代谢障碍。肝胰腺组织损伤最为严重，超微结构显示为大量空泡结构和淀粉样物质，已无可识别的细胞结构。同时在足肌肉组织细胞间隙发现大量的直径为45～55nm的病毒样颗粒，在吻细胞肿胀的内质网中发现80～110nm的病毒样颗粒，具有囊膜，囊膜厚度约为2nm。

皱纹盘鲍幼鲍溃烂病病原菌的ELISA检测法

皱纹盘鲍幼鲍溃烂病病原菌的ＥＬＩＳＡ检测法Ａｅｌｉｓａｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｎｇｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｂａｃｔｅｒｉａｏｆｆｅｓｔｅｒｄｉｓｅａｓｅｉｎｃｕｌｔｕｒｅｄｊｕｖｅｎｉｌｅａｂａｌｏｎｅ叶林俞开康王如才（青岛海洋大学水产学院...