大鲵养殖健康管理与疾病防治

在当前全球需求不断增长的水产品市场中,大鲵养殖因其独特的生理特征和珍稀性而备受瞩目。随着自然生态系统的压力增大和野生大鲵资源的减少,对其规模化、高效化养殖的需求逐渐上升,然而大鲵养殖面临着各种健康管理和疾病防治的挑战。该文根据养殖实践,围绕大鲵养殖健康管理与疾病防治策略展开探讨,以期为大鲵养殖业的可持续发展提供一定的理论参考和实践经验。

中华鳖源按蚊伊丽莎白菌的分离鉴定及药敏特性研究

研究对从江西省抚州市南丰县某中华鳖养殖基地患病中华鳖(Trionyx sinensis)组织中分离培养得到的一株按蚊伊丽莎白菌(Elizabethkingia anophelis)疑似菌株进行鉴定和药敏特性研究。在无菌环境中解剖患病中华鳖得到肝脏、脾脏组织,匀浆后接种在LB培养基上,分离得到优势菌株EJX2021。对该菌株进行形态学观察、16S RNA基因序列测定和生理生化鉴定以鉴定菌株种类;进行人工回归感染、组织病理学观察、毒力因子分析和抗生素药物敏感性试验研究其致病能力和药物敏感性特征。从患病中华鳖中分离出一株优势菌株EJX2021,结合其表型特征、16S RNA基因序列测定和生理生化鉴定,确定其为按蚊伊丽莎白菌。在人工回归感染后,该菌株对中华鳖15d的LD50为1.62×10^(8)CFU/mL,95%置信区间为(0.78—3.37)×10^(8)CFU/mL;组织病理学观察肠道、肺脏、脾脏、肝脏等组织出现不同程度病变。毒力因子分析显示该菌株包含246个潜在毒力基因。药物敏感性试验显示该菌株为多重耐药菌株,对多西环素、米诺环素、卡那霉素、哌拉西林、恩诺沙星、氟苯尼考敏感,对头孢曲松、头孢哌酮中度敏感,对新霉素等15种抗生素具有耐药性。研究证明了按蚊伊丽莎白菌是能够导致中华鳖病害的一种病原菌,为该细菌导致中华鳖病害的检测、鉴别和防治提供科学依据。

预防刺参腐皮综合征复方中药的筛选及体内药效评价

为开发防治刺参腐皮综合征的复方中药,从14种中药中筛选出对灿烂弧菌(Vibrio splendidus)有明显抑制作用的单味中药,并通过正交实验确定最佳抗菌复方FF-Z(诃子﹕五倍子﹕穿心莲﹕川芎=15 g﹕2 g﹕10 g﹕5 g)。在饲料中分别添加10、20、30和40 g/kg的复方FF-Z作为试验组,不含复方FF-Z的饲料为对照组,并以含恩诺沙星粉20 g/kg的饲料为药物对照组,连续投喂刺参10d,继而用终浓度为10^(7) CFU/mL的灿烂弧菌进行浸浴攻毒,以观察预防保护效果。结果显示,灿烂弧菌对复方FF-Z极敏感,抑菌圈直径可达(23.10±0.62)mm,最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)值分别为7.81和15.63 mg/mL;与阴性对照组相比,复方FF-Z各剂量组刺参的SOD、ACP和AKP活性显著提高,且优于药物对照组。在灿烂弧菌感染后,复方FF-Z各剂量组处理的刺参发病时间比阳性对照组推迟2d,其中复方FF-Z 20 g/kg组、FF-Z 30 g/kg组和FF-Z 40 g/kg组刺参的20d发病率分别为22.08%、22.14%和14.58%,显著低于阳性对照组的84.45%。组织病理学观察结果表明,添加30 g/kg复方FF-Z的饲料能够有效减轻灿烂弧菌入侵引起的刺参组织炎症反应,从而起到保护作用。研究证明,复方FF-Z能够显著提高刺参的免疫和抗病力,对灿烂弧菌引起的腐皮综合征具有良好的预防保护效果,能延缓该病的发病进程并降低发病率。

棘皮动物弧菌诱导中间球海胆免疫致敏现象分析

为探究中间球海胆(Strongylocentrotus intermedius)是否存在免疫致敏现象,使用棘皮动物弧菌(Vibrio echinoideorum)对中间球海胆进行重复感染(首次、二次菌浓度分别为10^(3)、10^(4) CFU/mL),检测并比较了两次注射感染后不同时间点中间球海胆体腔细胞密度、吞噬能力、酸性磷酸酶(ACP)活力、活性氧(ROS)含量、总抗氧化能力(T-AOC)等相关免疫指标的变化,以及二次感染后免疫致敏组和对照组间成活率的差异。结果表明:与首次感染相比,二次感染时诱导致敏组的体腔细胞总密度、吞噬细胞密度、ACP、ROS和T-AOC等均出现显著上升(P<0.05),且响应时间明显缩短,达到峰值的时间分别提前了36、36、84、12、36 h,且各指标的峰值均显著高于首次感染(P<0.05);二次感染后,诱导致敏组在6 h时的吞噬率(45.41%±6.39%)显著高于对照组(33.17%±1.94%);经过棘皮动物弧菌低浓度诱导后,诱导致敏组存活率(43.33%±10.00%)显著高于未经诱导的阳性对照组(7.78%±10.71%)(P<0.05)。研究表明,低浓度棘皮动物弧菌能诱导中间球海胆产生免疫致敏现象,此结果可为中间球海胆的疾病防控提供新思路。

3例龟耳脓肿的病例报告

近几年我国龟类养殖得到快速发展,但针对龟耳脓肿诊治的相关报道较少,饲主和兽医缺乏足够的应对经验。耳脓肿是一种维生素A缺乏或细菌病毒经咽鼓管上行至鼓室感染引起的疾病,在水龟和陆龟中常见。临床接诊3例单侧或双侧鼓膜膨出、鼓室或中耳内黄色干酪样物质聚集的患龟,通过结合病史、饲养情况以及临床体格检查确诊为耳脓肿。患龟经抗菌、手术清创、消炎止痛、加强饲养管理,2个月后均痊愈,未见复发。该类病例报告为龟耳脓肿的诊断和治疗提供了参考。

广西地区美国牛蛙源弗氏柠檬酸杆菌的分离鉴定、耐药性及组织病理

为了探明2022年5月在广西南宁某养殖基地引起美国牛蛙暴发疾病的原因,本实验从患病美国牛蛙的肝脏、脾脏、肾脏和肠道中分离出优势菌,采用形态学观察、生理生化实验、16S rRNA基因序列测定及系统发育学分析进行鉴定。为确定该菌株的致病机理,对该菌株进行了人工感染实验、组织病理学观察、毒力基因检测、药物敏感性实验以及耐药基因检测。结果显示,在患病濒死美国牛蛙的肝脏、脾脏、肾脏以及肠道均分离到单一的优势菌株,从肠道分离得到的一株优势菌被命名为NFCF-02,并经鉴定为弗氏柠檬酸杆菌。该菌株携带viaB、ompX、ureE、ureD、ureG和ureF等6种毒力基因,对美国牛蛙的半数致死浓度为3.12×10^(6)CFU/mL,发病临床症状包括肝脏变黄、花肝、肝脏坏死;肾脏充血发红、胃表面有血丝以及肠道呈红色和充血。组织病理学观察发现,其肝细胞变性坏死,肝索排列紊乱;肾小管上皮细胞肿胀坏死、严重区域肾小管崩解、坏死;脾脏中央静脉扩张淤血,含铁血黄素、色素细胞增多;肠黏膜脱落,肠上皮细胞坏死脱落,杯状细胞坏死。药敏实验结果显示,分离菌株NFCF-02对新霉素、多黏菌素B、头孢拉定、多西环素等4种抗菌药物敏感,对林可霉素等14种抗菌药物已产生耐药性,携带gyrA、Sul1等7种耐药基因。研究表明,弗氏柠檬酸杆菌对美国牛蛙具有高致病性,可引起美国牛蛙肝脏和肠道等多器官组织的病理损伤,最终引发机体的损伤甚至死亡。本研究首次从组织病理学分析和毒力因子携带情况的角度确定了弗氏柠檬酸杆菌对美国牛蛙的致病力,为养殖美国牛蛙中弗氏柠檬酸杆菌病的诊断和药物防控提供了参考依据。

美国牛蛙蝌蚪约氏不动杆菌的分离、鉴定及耐药性分析

为探明2023年3月初引起中国重庆市渝北区某牛蛙养殖场暴发疾病的原因,本实验从患病美国牛蛙蝌蚪肝脏和肠道中分离优势菌,采用形态学观察、生理生化实验、16S rDNA和rpoB基因序列测定、系统发育学分析进行鉴定。为确定该菌株的致病机理,对该菌株进行了人工感染实验、组织病理学观察、毒力基因检测、生长特性研究及药物敏感性实验。结果显示,在患病濒死美国牛蛙蝌蚪的肝脏和肠道中分离得到的其中一株优势菌命名为LT202303,经鉴定为约氏不动杆菌。该菌株携带OmpA、Omp34和OmpTsx等3种毒力基因,具有较强的耐盐性和在广泛的pH范围内生存的能力,对美国牛蛙蝌蚪的半数致死浓度为6.8×10^(6)CFU/mL,发病临床症状为肝脏红肿并伴有大量白色结节,肠道透明发黄。组织病理学观察发现该菌株可引起美国牛蛙蝌蚪肝脏和肠道的明显炎症反应和病灶性坏死。药敏实验结果显示,分离菌LT202303是一种产β-内酰胺酶的多重耐药细菌。本研究表明,约氏不动杆菌对牛蛙蝌蚪具有高致病力,可引起肝脏和肠道等多器官组织的病理损伤最终引发机体的损伤甚至死亡。本研究首次报道约氏不动杆菌感染引起的美国牛蛙蝌蚪传染病的暴发,为该疾病的诊断和防控提供理论参考。

中华鳖趋化因子CXCL10的分子特征及其对细菌感染的响应

为研究趋化因子基因cxcl10的表达特征及其对外源病原微生物的响应,实验以中华鳖为对象,利用生物信息学分析CXCL10蛋白的分子特征及系统进化,通过荧光定量PCR(qPCR)技术检测该基因在健康中华鳖各组织中的表达分布及其在革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌和革兰氏阴性菌嗜水气单胞菌胁迫下mRNA的表达规律。结果显示,该蛋白分子质量为10.89 ku,等电点为9.62,存在信号肽和磷酸化位点,单链包含1个N端的loop区、1个α螺旋和3个反向平行β折叠;该基因在健康中华鳖的肝脏和心脏中表达量最高,在血细胞中表达量最低;两种细菌的刺激能促使中华鳖组织器官中cxcl10及炎症相关因子基因tnf-ɑ和il-1βmRNA表达量的显著上调。研究表明,cxcl10可能在中华鳖机体抗菌免疫过程中发挥重要作用。本实验可为中华鳖病害防治提供理论基础。

唐山市刺参(Apostichopus japonicus)养殖情况和主要病害防治

刺参(Apostichopus japonicus)是唐山市重要的水产养殖品种,2022年养殖面积已超过5100 hm2,年产量超过7700 t。本文基于唐山地区多年的刺参苗种繁育和成参养殖的实践经验,总结了几种唐山地区常见的高温、细菌性疾病、霉菌病、寄生虫病的预防和治疗措施。

加州鲈维氏气单胞菌拮抗菌的筛选

为筛选出对维氏气单胞菌(Aeromonas Veronii)有拮抗效果的最优菌株,本试验从湖北荆州太湖加州鲈池塘底泥中分离获得一株细菌C2-1,对其进行全基因组测序,并研究其生防作用机制。结果表明,细菌C2-1为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),具有广谱抑菌性,对希瓦氏菌(Shiva's bacteria)、溶血链球菌(Streptococcus hemolysis)等多种水产病原菌的抑菌直径达18.57~25.28 mm。菌株C2-1具有较高的酸碱稳定性且对温度适应范围较为广泛。扫描电子显微镜镜观察发现细菌C2-1的发酵产物对维氏气单胞菌具有破坏效果。液质联用(LC-MS)分析该细菌包含多种不同的脂肽类活性物质,如伊枯草菌素等。研究发现,贝莱斯芽孢杆菌C2-1是防治维氏气单胞菌的潜力菌株,对维氏气单胞菌具有较好的抑制作用,且应用前景良好。

鳗弧菌感染单环刺螠体腔细胞转录组分析

鳗弧菌(Vibrio anguillarum)是水产养殖中常见病原菌之一。为探究鳗弧菌感染海洋经济动物单环刺螠(Urechis unicinctus)后宿主基因表达水平的变化和应答细菌感染的分子机制,运用高通量测序技术对感染鳗弧菌的单环刺螠对照组、易感组和抗感组体腔细胞进行了转录组测序,并对比分析其差异表达基因(DEGs)及信号通路。结果显示,鳗弧菌感染单环刺螠后,易感组体腔细胞差异表达基因数目为2309个,其中1451个基因表达上调,858个基因表达下调;抗感组中DEGs数目为1955个,其中1311个基因表达上调,644个基因表达下调。KEGG通路富集分析显示,与免疫相关的通路主要有MAPK信号通路、过氧化物酶体、内吞作用、溶酶体、氨基酸生物合成等,筛选出的潜在抗感基因主要有牛磺酸分解代谢双加氧酶(Taurine catabolism dioxygenase,TauD)、细胞色素P450(Cytochrome P450,CYP450)、Casitas B细胞淋巴瘤B(Casitas B lymphoma-b,Cbl-b)、肌动蛋白相关蛋白3(Actin-related protein 3,ACTR3)、热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)、氨基酸通透酶(Amino acid permease,AAPs)、编码葡萄糖激酶(Glucokinase,GCK)、乙醛酸和羟基丙酮酸还原酶(Glyoxylate reductase/hydroxy pyruvate reductase,GRHPR)、胱硫醚β-合酶(Cystathionine beta-synthase,CBS)、组氨酸磷酸酶(Histidine phosphatase,LHPP)、谷草酰乙酸转氨酶2(Glutamic-oxaloacetic transaminase 2,GOT2)、乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)和细胞分裂周期42(Cell division control protein 42,CDC42),易感基因主要有ADP核糖激化因子(ADP-ribosylation factor,ARF)、细胞粘附素(Cytohesin,CYTH)、EH结构域蛋白1(EH domain-containing protein 1,EHD1)、Ras相关蛋白Rab-8A(Ras-related protein Rab-8A,Rab8A)、钙网蛋白(Calreticulin,CALR)和Ras相关的C3肉毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,RAC1)。实验结果可为鳗弧菌对水产养殖动物的感染机制及单环刺螠对病原菌的免疫应答研究提供数据参考。

刺参养殖常见病害及防治技术

刺参养殖产业在快速发展的同时,由于养殖密度过高、药物滥用、处理不恰当、操作不规范等原因使病害问题越来越突出,给刺参养殖从业者造成了巨大的经济损失,成为制约产业高质量发展的一大瓶颈。因此,要大力发展刺参产业,保障水产品质量安全,必须优先解决其病害问题,减少疾病的发生。

一例国家一级保护动物鼋穿孔病防治技术探讨

一、材料与方法。1.试验材料。(1)鼋的生物学简介。鼋属脊索动物门、爬行纲、龟鳖目、鳖科、鼋属,俗称绿头鱼、兰团鱼。(2)试验水质处理。地下咸水经沉淀、增氧、曝气处理,且用15毫克/升三氯异氰尿酸消毒;池塘水经过滤、沉淀、增氧,也用15毫克/升三氯异氰尿酸消毒处理。将处理过的地下咸水与池塘水按一定比例混合成咸淡水,盐度控制在5~8,放置在50米2温室水泥池内备用。

泥鳅“方块病”病原菌筛查及药物敏感性实验

2024年6月初,辽宁省现代农业生产基地建设工程中心接到省内淡水鱼养殖户求助电话,当地泥鳅精养池塘中出现了一种急性传染性疾病,主要发病品种为泥鳅、黄颡鱼等,1个多月内造成大批商品鱼死亡,因病鱼体表出现近方块形溃烂,深可露骨,且病因不明,当地养殖户将其称为“方块病”,死亡率高达35%,给养殖户造成严重的经济损失。

中华鳖体表出血病防治初探

2022年,杭州某中华鳖养殖场暴发中华鳖体表出血病,给养殖户造成重大经济损失。本研究通过病原分离与鉴定,在此基础上基于卵黄抗体生产技术,生产特异性卵黄抗体和灭活疫苗,并运用动物实验评估了其免疫效果。本研究为预防和控制中华鳖的传染病传播提供技术支持,促进中华鳖绿色健康养殖及其产业可持续发展。一、方法1.病原菌的分离鉴定在无菌环境下取病样腹水,涂布于LB琼脂培养基,30℃下培养36小时.

化皮刺参组织中盾纤毛虫的分离与鉴定

[目的]对化皮刺参(Apostichopus japonicus)病例中的寄生虫进行分离鉴定,分析其致病因素,为刺参盾纤毛虫病诊断和防控提供参考依据。[方法]对辽宁某养殖场送检的化皮刺参表皮、体壁、肌肉、体腔液、呼吸树、肠道进行镜检,将观察到的纤毛虫离体培养,并进行18S rDNA测序。[结果]病参各组织器官观察到纤毛虫H-1、H-2、H-3和H-4,H-4通过形态学判断为后口虫,成功离体培养出H-3与镜检未观察到的H-5。纤毛虫H-3与H-5的18S rDNA序列比对结果显示为海洋尾丝虫(Uronema marinum)。[结论]本病例中刺参各组织寄生多种纤毛虫,体腔液中寄生海洋尾丝虫,呼吸树中寄生后口虫和海洋尾丝虫。

浅析巴西龟肺炎的诊治和预防

巴西龟的肺炎给人工养殖与异宠行业造成了严重的困扰。总体而言,该病主要因不当的饲养管理和病原感染所致。已报道的病原主要有疱疹病毒、嗜水气单胞菌及部分真菌等,同时养殖水体腐败、饲养环境不当及食物组成不合理等因素是造成该病的重要诱因。巴西龟肺炎主要通过临床症状进行诊断,及时准确的诊断和救治是恢复巴西龟健康的重要前提。

循环水养殖系统中高毒力嗜水气单胞菌的鉴定与药敏试验

为探究中华鳖(Pelodiscus sinensis)循环水养殖过程中出现体表穿孔和溃疡的病因,对患病中华鳖的肝、脾、肺和肾等部位取样并进行病原菌分离及革兰氏染色,利用16S rRNA测序和生化鉴定相结合进行细菌鉴定,通过毒力基因PCR检测和人工回感试验评估细菌的致病性,以纸片扩散法评估几种抗生素的抑菌效果,利用琼脂打孔法评估中药提取物的抑菌效果。结果显示,从病鳖的脏器中分离到一株优势菌AH0421,该菌为革兰氏阴性菌,菌体呈短杆状;菌株AH0421与嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)模式菌株ATCC 7966的16S r RNA序列相似性高达99.66%。菌株AH0421能利用葡萄糖、蔗糖和麦芽糖,具有O/129耐受性,其携带act、aerA、aha、ahh、ahp、ahpA、alt、ast、hlyA、lip、ompA毒力基因。回感试验出现与自然发病相似病症,菌株AH0421半致死浓度(LC_(50))为1.7×10^(6)CFU/mL。中药五味子提取物、诺氟沙星、多西环素、恩诺沙星、新霉素以及头孢克肟、头孢曲松等头孢类抗生素对该菌有较强的抑制作用。研究表明,五味子和多数头孢类抗生素可作为治疗菌株AH0421感染的参考药物。

鳖源柠檬酸杆菌属新种的分离鉴定与多位点序列

为确定2020年10月湖北一中华鳖发病的病原体及病原特征,实验从该养殖场患病中华鳖个体肝脏中分离获得1株优势菌A3,经理化性状及16S rRNA序列鉴定,表明菌株A3属于柠檬酸杆菌。进一步通过recN序列鉴定,发现A3与布氏柠檬酸杆菌recN碱基一致性为95.58%~96.01%,与柠檬酸杆菌属其他种的recN碱基一致性均低于93.72%,表明菌株A3为柠檬酸杆菌属潜在新种。人工回归感染实验证实菌株A3是引起本次中华鳖患病的病原菌。与嗜水气单胞菌相比,A3感染病程偏慢但致死率较高。药敏实验结果显示,菌株A3对美罗培南等10种抗生素敏感,对氟苯尼考等9种抗生素耐药。多位点序列分型(MLST)鉴定显示,菌株A3属于新序列型(ST)。对柠檬酸杆菌多位点序列分型的7个管家基因序列进行级联并构建系统发育树,结果显示,柠檬酸杆菌的进化与菌株的分离源及分离地点没有明显关系;菌株A3与分离自欧洲人源的ST120型菌株Citfre2580亲缘关系最近。本研究对中华鳖的病原进行了分离鉴定,并阐述了一种更可靠的柠檬酸杆菌鉴定方法,旨在引起人们对柠檬酸杆菌致病性的重视,为水产品健康养殖提供一定的参考依据。

患白内障病黑斑蛙米尔伊丽莎白菌的分离鉴定与PNGase基因克隆

为给安徽舒城地区患白内障病黑斑蛙(Pelophylax nigromaculatus)提供治疗方案,对病蛙进行了细菌分离、鉴定和药敏检测。从典型患病黑斑蛙的肝脏、眼睛、脑和脊柱中分离出4株优势菌株,经16S rRNA和gyrB基因序列分析,结合生理生化鉴定,结果表明,4株菌株均为米尔伊丽莎白菌(Elizabethkingia miricola)。对分离菌的N-糖苷酶(PNGase)基因进行了克隆和分析,结果显示,其包含PNGase F和PNGase F-Ⅱ两种类型,进化分析结果同样显示,其与米尔伊丽莎白菌聚为一支,表明PNGase基因序列可作为伊丽莎白菌属内部菌分类的参考依据。药敏试验结果显示,4株分离株仅对酰胺醇类中的氟苯尼考敏感,对香豆素类中的新生霉素、大环内酯类中的红霉素和利福霉素类中的利福平等3种抗生素中介,而对测试的其他14种抗生素耐药。实验结果为伊丽莎白菌属细菌的分类鉴定提供了参考方法,且为黑斑蛙细菌病防治提供参考依据。