花旗松素的提取、检测及功能研究进展

花旗松素是一种二氢黄酮类化合物,常见于松科植物和水果蔬菜中。其常见提取方法有乙醇加热提取法、超声波辅助提取法以及闪式提取法。检测花旗松素最常用的方法为高效液相色谱法。体外和动物试验结果证实花旗松素具有抗氧化、抗癌、抗炎、保护肝脏等多种生物活性。本文对花旗松素提取、检测方法以及其抗氧化、抗炎、抗癌作用机制进行了综述,以期为其工业化生产和应用提供参考。

新型布鲁顿氏酪氨酸激酶蛋白水解靶向嵌合体(BTK PROTAC)的设计合成及活性评价

目的 设计合成新型布鲁顿氏酪氨酸激酶蛋白水解靶向嵌合体(BTK PROTAC),并在体外评估这些分子对BTK蛋白的降解活性。方法 以Nurix Therapeutics公司临床化合物NX-5948为先导化合物,分析其与靶蛋白的相互作用,通过引入并环代替吡嗪胺的骨架跃迁思路对其进行结构改造,成功合成了一系列新型BTK PROTACs,通过时间分辨荧光共振能量转移技术(TR-FRET)、MTS法和蛋白质免疫印迹法分别测定目标化合物的激酶活性、细胞增殖抑制活性和BTK蛋白降解活性。结果 共合成6个目标化合物(化合物B~G),活性测试结果显示,大部分化合物都具有优异的细胞增殖抑制活性和BTK降解活性,其中化合物B表现出较优的BTK蛋白降解能力,其半数最大降解浓度(DC_(50))值约为0.1 nmol·L^(-1)。结论 基于NX-5948,通过骨架跃迁的方法设计合成了一类新颖的BTK PROTAC化合物,进行了构效关系的初步探索,可为BTK PROTAC降解剂的进一步研究提供参考。

岩大戟内酯B-17-琥珀酸酯对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

探讨岩大戟内酯B-17-琥珀酸酯(HJB-SA)对肝癌HepG2细胞凋亡的影响及作用机制。方法 采用流式细胞仪定量检测细胞的总凋亡率、线粒体膜电位去极化程度及细胞内活性氧含量变化;再采用Western blot法检测基于线粒体凋亡的相关蛋白(Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase3、Cyt-c)表达水平。结果 HJB-SA能显著升高HepG2细胞的凋亡率(P<0.01或P<0.001);显著降低HepG2细胞线粒体膜电位(P<0.05或P<0.01或P<0.001);增高HepG2细胞内ROS水平(P<0.05或P<0.01);使HepG2细胞内Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01),Bax、cleaved-Caspase3及Cyt-c蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论 HJB-SA可通过线粒体凋亡途径诱导肝癌HepG2细胞凋亡。

超声辅助纤维素酶法提取小麦硒多糖工艺优化及抗氧化活性研究

以富硒小麦全粉为原料,利用超声辅助纤维素酶法提取小麦硒多糖。以小麦硒多糖提取率为衡量指标,通过单因素实验和响应面法对小麦硒多糖提取工艺进行优化,并研究其对ABTS+的抗氧化活性。结果显示,小麦硒多糖的最佳提取工艺条件为料液比1:17(g:mL)、纤维素酶浓度0.75%、超声温度60℃、超声功率497 W、超声时间50 min。在此条件下小麦硒多糖提取率为38.24%,硒含量为0.093 mg/kg。体外抗氧化活性研究表明,其对ABTS^(+)自由基清除率IC_(50)为4.56 mg/mL。

Caerin1.1抗菌机制中脯氨酸作用的光谱研究

Caerin1.1(GLLSVLGSVAKHVLPHVVPVIAEHL-NH2)是一种由澳大利亚树蛙皮肤分泌的天然抗菌肽,在抗细菌感染和抗癌活性等宿主防御活动中具有多种功能。这种肽的杀菌机制已经被讨论了很久。近年来人们发现caerin1.1不属于膜破坏家族抗菌肽,而是通过穿透细菌细胞膜来发挥杀菌机制。该序列中的两个脯氨酸残基被证明是抗菌活性所必需的,但具体原因尚不清楚。我们用羟基荧光素(FAM)作为供体,羟基四甲基罗丹明(TAMRA)作为受体,分别标记在caerin1.1的N端和磷脂膜上。在模拟液相生物环境条件下,通过荧光共振能量转移(FRET)研究脯氨酸对抗菌肽caerin1.1抗菌机制的影响机理。

某海水功能饮品中常量离子对脂肪酶的影响

为揭示某海水功能饮品的作用机理并强化其功能,通过检测加入某海水功能饮品及其所含5种常量离子(Mg^(2+)、Ca^(2+)、Na^(+)、K^(+)和B^(3+))后脂肪酶的活力、Zeta电位、紫外和荧光光谱的变化,初步揭示了该饮品及其所含5种离子对脂肪酶的影响和作用机理。结果表明:该饮品及其所含5种离子对脂肪酶的活力和稳定性均有促进作用,且随着离子浓度的升高作用增强;海水功能饮品可使脂肪酶的Zeta电位绝对值增加,紫外吸收和荧光强度增强,最大吸收峰位红移3 nm,由此说明海水功能饮品中的5种离子可能通过改变蛋白质分子的微环境极性,改变氨基酸残基的带电性等特性,影响酶分子构象,从而改善酶活力及功能。

原人参二醇组皂苷选择性制备人参皂苷20(S)-Rg3和Rg5及其生成机理研究

该文以原人参二醇(protopanaxadiol,PD)型皂苷为原料,盐酸为催化剂,选择性制备稀有人参皂苷Rg5和20(S)-Rg3。主要探索了酸浓度、乙醇浓度、反应温度以及反应时间对制备人参皂苷20(S)-Rg3和Rg5的影响,并通过同位素标记法研究了人参皂苷Rg3的生成机理。结果表明,当PD型皂苷质量浓度为15 mg/mL,HCl浓度为0.02 mol/L,乙醇体积分数为99%,反应温度为60℃,反应时间为3.5 h时,20(S)-Rg3和Rg5收率分别为15.32%和50.12%,20(S)-Rg3的de值为98.28%。同位素标记法研究反应机理表明,PD皂苷在盐酸催化下高立体选择性地生成Rg3是S_(N)2机理。该方法催化剂价廉易得,操作简单,在生成Rg5的同时又能高立体选择性生成20(S)-Rg3,为一步合成多种高活性稀有人参皂苷提供新的思路。

螺旋藻中分析级藻蓝蛋白的高效制备

为了低成本高效生产分析级藻蓝蛋白(C-Phycocyanin,C-PC),本文以钝顶螺旋藻藻粉为原料,采用超声耦合高压均质高效提取藻蓝蛋白,通过盐析、透析和葡聚糖凝胶柱G-75纯化所提取的藻蓝蛋白,从而使得藻蓝蛋白的纯度达到分析级,同时利用SDS-PAGE和紫外吸光度分析纯化提物中的成分变化。实验结果表明,高压均质耦合超声法可有效提高藻蓝蛋白的产率,其最佳组合提取条件为:390 W超声2 min,超声2 s/间隔2 s,60 MPa处理3次,其粗提液中藻蓝蛋白产率和纯度(A 620/A 280)分别为131.2 mg·g^(-1)和0.69,比单独高压均质和超声的产率分别提高了51.07%和58.15%,且高于先前报道的。粗提液经过两步铵盐析(12%硫酸铵和50%硫酸铵)和透析,藻蓝蛋白纯度可提升至1.09(>0.7),最后经过25 min葡聚糖凝胶G-75层析纯化得藻蓝蛋白产率和纯度(A 620/A 280)分别为107.65 mg·g^(-1)和4.23(>4.0),达到分析级标准,其回收率达到82.05%,此外,分析级藻蓝蛋白的色度L*a*b*值分别为58.07,-15.44,-17.86,其主要与纯度、浓度及原料来源有关。采用SDS-PAGE凝胶电泳图分析藻蓝蛋白的分子量(17 kDa)及纯化效果,与先前报道的藻蓝蛋白分子量(15~21 kDa)基本一致。该研究结果为低成本高效生产分析级藻蓝蛋白提供技术支撑。

多肽药物口服给药稳定性研究进展

与小分子药物相比,多肽药物因其高选择性与高效性已在医药领域得到广泛应用。但由于较差的药代动力学与有限的生物屏障渗透性等问题,多肽药物的口服生物利用度较低,其通常通过胃肠外途径给药。主要为多肽药物的口服给药进行综述、介绍了多肽类药物面临的挑战及改善其口服稳定性的策略,如酸碱度调节、酶抑制剂、渗透促进剂及化学法修饰,并对纳米粒载体给药系统进行阐述,以期为未来开发设计临床多肽类口服药物提供参考。

微流控双水相贴壁液滴流动强化酶促反应研究

以微流控双水相液滴流技术为基础,开发了一种酶促反应平台,将微流控贴壁液滴流快速传递、高效混合的特点与双水相反应分离耦合过程优化结合。本体系克服了传统宏观双水相体系传质传热慢以及耗时耗能的问题,并建立了贴壁液滴微反应器,产生更大的内环流,进一步增强传质效果。探究了双水相液滴界面的分子限域能力、对酶和产物的选择性分配能力。通过比较贴微通道壁和未贴微通道壁两类液滴微反应器的酶促反应效果,发现贴微通道壁液滴微反应器仅6 min转化率即可达到40%,其反应速率可达未贴微通道壁液滴微反应器9.4倍。本文通过微流控双水相贴壁液滴流实现了酶促反应的强化,为微尺度下的酶催化反应过程强化提供了一种新的思路。

玉米源活性肽对脂质过氧化的抑制作用研究

玉米肽具有良好的自由基和活性氧清除等抗氧化活性,但对其脂质过氧化抑制作用的报道较少。本研究利用碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶以及模拟胃肠道消化(胰液酶+胃蛋白酶)水解制备玉米源活性肽,测定了不同蛋白酶所制备的玉米肽对ABTS自由基的清除活性,系统评价了其对亚油酸过氧化、蛋黄脂质过氧化和动物肝脏脂质过氧化的抑制作用。结果显示不同蛋白酶制备的玉米肽均具有一定的ABTS自由基清除活性以及脂质过氧化抑制作用,其中,模拟胃肠道消化所制备的玉米肽ABTS自由基清除活性最强,清除率最高达到(78.61±0.56)%;风味蛋白酶制备的玉米肽的亚油酸过氧化抑制作用最强,抑制率最高为(72.54±1.15)%;碱性蛋白酶制备的玉米肽的卵黄脂质过氧化的抑制作用最强,抑制率最高达到(82.50±0.46)%;模拟胃肠道消化制备的玉米肽的动物肝脏脂质过氧化抑制作用最强,抑制率最高达到(61.96±0.34)%。

前沿科研成果融入天然药物化学实验教学——以钩藤中生物碱的提取分离和鉴定为例

掌握药用植物中生物碱的提取、分离和结构鉴定是天然药物化学实验课程教学的重要部分。本文以贵州道地药材钩藤为研究对象,首先对其中生物碱类成分进行提取,之后对混合生物碱进行分离,最后对分离得的单体生物碱进行结构鉴定。在教学过程中,本实验可以锻炼学生掌握中药材中活性物质的提取、分离和结构鉴定的基础知识和基本技能,提高学生科研思维、解决问题和分析问题的综合能力;同时,对培养学生热爱本专业,热爱家乡,开发家乡药用植物资源有重要意义。

5-取代海因的消旋过程对化学酶法制备D-氨基酸的影响

海因酶是化学酶法制备光学活性氨基酸的关键酶,今研究通过采用不同旋光性的底物进行了海因酶底物光学特异性的研究。结果表明,本体系采用的海因酶是D-海因酶,具有严格的光学选择性;提出了L-海因消旋是以混旋海因制备D-氨基酸的重要限速步骤;以L-5-甲基海因为对象,研究了L-海因的消旋过程,对其动力学过程进行了分析。研究表明,L-海因消旋符合一级反应动力学过程;并结合实验提出增高温度和pH值均有助于提高转化效率。

基于定量构效关系制备火麻仁蛋白ACE抑制肽

高血压是引发心血管疾病的主要因素,经常服用降压的药物会产生副作用,因而安全、高效的食源性降压肽成为关注点。本研究建立了血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的定量构效关系(QSAR)模型,确定ACE抑制肽的结构与其活性间的关系。将模型结果辅以计算机虚拟酶切精确掌握蛋白水解位点,筛选合适的蛋白酶水解火麻仁蛋白定向制备ACE抑制肽,并测定最终水解物的抑制效果。结果表明:基于二肽建立的SVM-AAindex模型具有最佳的预测性能(R~2为0.81,RMSE为0.53),且当二肽C端氨基酸为疏水性和芳香族氨基酸时具有较强的ACE抑制效果。蛋白质组分分析发现火麻仁蛋白含有34.60%的疏水性氨基酸和芳香族氨基酸是制备ACE抑制肽的良好来源。选择虚拟酶切产生较多短肽和生物活性肽的碱性蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶对火麻仁蛋白进行定向水解,获得的最终水解液的ACE抑制IC50值分别为1.89和2.30 mg/mL。本研究建立了一种高效精准的制备火麻仁蛋白ACE抑制肽的方法,在降血压药物上具有很好的应用前景。

牛血、猪血中SOD系统分离技术

以牛血或猪血为材料 ,分离的血清开发凝血酶后 ,对红血球经溶血 ,结合铜离子效应 ,通过热变性、有机溶剂沉淀Cu+ + 跟踪等方法 ,获得超氧化歧化酶 (SOD) ,使同一原材料得到充分利用 ,减少环境污染 ,提高畜牧副产品的附加值。

猪血凝血酶的制备

从猪血制备凝血酶 ,对丙酮沉淀法和离子交换树脂法进行了比较 ,结果表明 ,两种方法的得率分别为 2 30 0u/L和5 6 0 0u/L ,酶比活分别为 15u/mg和 36 5u/mg。

季铵化改性壳聚糖的制备及其凝血性能研究

为了对壳聚糖进行化学改性及探究其凝血性能,以来源丰富的壳聚糖为起始原料,通过亲核取代反应,开展季铵化改性,采用紫外-可见光谱、红外光谱及X-射线衍射进行结构表征,并在体外探索其凝血性能。化学结构表征结果表明,季铵化壳聚糖已经成功制备得到;季铵化壳聚糖(50 mg)的体外凝血时间为128.2 s,凝血指数为43.6%,血浆复钙时间为102.1 s,制备得到的季铵化壳聚糖具有较强的促凝血性能。

基于败酱草多糖的能量冲剂的开发

为研发败酱草多糖的能量冲剂,通过单因素和正交试验分别确定加入多糖、可溶性淀粉、甜蜜素的量,从而优选出冲剂的最佳配方。结果表明,败酱草多糖、可溶性淀粉、甜蜜素的最佳加入量分别为1.30、0.50、0.02 g,使用75%乙醇作为润湿剂可制得成型性和流动性较好且不易黏连的败酱草多糖颗粒剂。

用国产生物反应器培养Vero细胞和狂犬病毒

介绍了国产生物反应器ＣｅｌＣｕｌ－５０Ａ的特点及性能，并利用此生物反应器培养了Ｖｅｒｏ细胞和狂犬病毒，细胞密度达１．１×１０７ｃｅｌｓ／ｍｌ。

猪心中提取和纯化辅酶Q_(10)(联产CytC)

辅酶Ｑ１０和细胞色素Ｃ是促生物氧化酶类生化药物，本试验从猪心中提取和纯化辅酶Ｑ１０，并联产细胞色素Ｃ。猪心以酸性水液粗提，细胞色素Ｃ经人造沸石吸附，洗脱，盐析，三氯乙酸沉淀，弱酸性阳离子吸附，真空干燥得２２５ｍｇＣｙｔＣ／ｋｇ猪心，纯度７９％。提取后的猪心渣，用醇碱皂化法，经硅胶柱层析，无水乙醇结晶、重结晶，每千克猪心渣可提取辅酶Ｑ１０７５ｍｇ，含量为９５．３％。