基于Moldflow对某电器塑料外壳最佳浇口的研究

以某电器塑料外壳的浇口位置选择为例,利用Moldflow软件设计了单边双点进胶和双边对角进胶两种方案,并分别做了充填时间、注射压力、纤维取向张量、熔接线分布、翘曲变形等参数的模拟分析。模拟结果表明:采用单边双点进胶注射压力较小,熔接线位置不影响塑件外观及质量,纤维在指定的主方向上对齐的可能性很大,以及翘曲变形也小。模流分析结果有效地指导了模具浇口位置的设计,降低了研发成本及生产周期。

糯红高粱中产蛋白酶内生酵母筛选鉴定及发酵特性研究

以糯红高粱中分离出的内生酵母为研究对象,筛选具有产蛋白酶功能的内生酵母,采用形态学观察和26S rDNA D1/D2区序列分析对内生酵母进行分类鉴定,并分析其氮源利用能力以及产酶发酵特性。结果发现:从糯红高粱分离得到33株产蛋白酶内生酵母;经26S rDNA D1/D2区序列分析,这些菌株隶属于1门、4目、13属,优势目为银耳目(Tremellales),占57.62%;优势种属为Papiliotrema rajasthanensis,占27.3%。氮源利用能力研究发现,7株内生酵母具有产利用菜籽饼粕氮源的蛋白酶,J3-74菌株产酶能力最强;5株能产利用明胶的蛋白酶,J6菌株产酶能力最优;7株能产利用干酪素的蛋白酶,J3-78菌株的产酶能力最强。对其中2株产蛋白酶菌株的发酵条件优化发现,J6菌株在接种量为1%、pH为9.0、温度为25℃、葡萄糖为碳源、牛肉膏为氮源时产蛋白酶的活力最高。而J24菌株在接种量为2%、pH为5.0、温度为25℃、葡萄糖为碳源、牛肉膏为氮源时产蛋白酶的活力最高。结果表明,糯红高粱内生酵母种类及其功能具有多样性,可为功能菌株的进一步开发和利用提供支撑。

高产蛋白酶菌的分离、诱变及其对羽毛的降解效果

旨在筛选产蛋白酶的土壤细菌资源,分别采用细菌分离培养和富集培养方法分离鸡场羽毛堆放区土壤中的产蛋白酶细菌,以其为出发菌株,利用紫外诱变方法选育蛋白酶活性高的菌株,并评价其降解羽毛的能力.结果发现,通过初筛选、复筛选以及诱变后,菌株的蛋白酶活由原来的31.33U/mL提高到42.13U/mL,提高了34.47%筛选的出发菌株在含有鸡羽毛的培养基中培养7d后,羽毛降解率为51.3%,而诱变后菌株的羽毛降解率高达80.6%,对鸡羽毛的降解能力显著高于出发菌株,为实现羽毛废弃物的资源再利用提供参考途径.

产蛋白酶菌株的筛选鉴定及产酶优化

为筛选出高产蛋白酶的菌株,通过干酪素培养基筛选到一株高产蛋白酶的菌株BJ-4,经鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。对菌株的产酶条件进行单因素及响应面优化,确定最佳产酶条件为:葡萄糖0.5%、牛肉膏1.5%、培养温度37.61℃、培养初始pH值6.84、接种量1.36%,优化后酶活力同比增长了71.01%。菌株BJ-4在工业中具有一定的应用前景。

pH渐变条件下多酶分步连续酶解工艺制备鲟鱼硫酸软骨素与胶原蛋白肽

pH渐变条件下采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶分步连续酶解鲟鱼软骨,同时制备鲟鱼硫酸软骨素和胶原蛋白肽。分别通过温度、酶解时间、酶用量3个单因素实验,研究其对连续酶解效果的影响。综合分析得出最佳条件:碱性蛋白酶酶解温度为45℃,酶解时间为2 h,酶用量为100 U·g^(-1)底物;木瓜蛋白酶的酶解温度为50℃,酶解时间为2 h,酶用量为50 U·g^(-1)底物;菠萝蛋白酶的酶解温度为50℃,酶解时间为2 h,酶用量为30 U·g^(-1)底物。该工艺条件下制备的鲟鱼硫酸软骨素提取率为85%,纯度93%,胶原蛋白肽的提取率为82%,纯度为90%。研究建立的pH渐变条件下多酶分步连续酶解工艺,产率与纯度较国内现有生产方法均有提高,且碱液使用量减少,避免了有机溶剂的引入,从而可以降低生产成本,减轻环境污染负担。

中性蛋白酶及碱性蛋白酶制备玉米粗肽的醒酒活性比较

本文旨在使玉米蛋白增值,为工业化生产玉米醒酒肽提供依据。采用气相色谱、氨基酸自动分析仪等仪器,研究了玉米蛋白水解物——粗肽的醒酒活性。结果表明:中性蛋白酶的低水解度粗肽(2h、酶底比0．5％、料液比1:25)能使小鼠血醇浓度降低54．06％,但该粗肽的蛋白回收率太低。碱性蛋白酶的中水解度粗肽(4h、酶底比0．5％、料液比1:20)的醒酒活性高,并存在剂量效应关系,其剂量为800 mg／kg．bw时,小鼠血醇浓度降低了62．80％,且该粗肽的蛋白回收率高,具有开发价值。

固定化碱性蛋白酶生产CPP的研究

以ＧＭ２０１大孔树脂和壳聚糖为载体，以戊二醛为交联剂，对碱性蛋白酶２７０９的固定化条件、固定化酶的性质以及利用固定化酶制备ＣＰＰ进行研究，考察了交联剂的浓度、载体与酶的比例、温度以及ｐＨ等对碱性蛋白酶固定化的影响。确定了固定化最佳条件为以ＧＭ２０１为载体的固定化酶活力回收１９％以上；而以壳聚糖为载体的固定化酶活力回收达到了６６％以上，其最适温度为４５℃，最适ｐＨ８．０，最适底物浓度为４０％，利用固定化酶水解酪蛋白４０ｍｉｎ所制备ＣＣＰ的产率达到了７．５４％。

弹性蛋白酶产生菌的筛选及其发酵条件的初步研究

从肉联厂和屠宰场附近的土壤和污水中采集到的近100个样品中,经富集培养分离到123株能产生弹性蛋白酶的菌株,反复初筛、复筛后,分离到一株产胞外弹性蛋白酶活较高且稳定的细菌,经初步鉴定属芽孢杆菌属(Bacillussp.EL3)。同时研究了其产酶最适条件,产酶最适碳源为葡萄糖,最适氮源为豆饼粉。并对碳源、氮源和生长因子进行了正交实验,研究发现碳源对产酶的影响最大,其次为氮源。当葡萄糖的用量为6%、豆饼粉为5%、玉米提取液为0.2%时,其具有较高的产酶水平。最适发酵初始pH为7.5,250mL最适摇瓶装液量为20mL。在该发酵培养基中培养,35h时达最高的产酶水平。同时还对离心后的粗酶液进行温度和pH试验,发现该酶最适作用温度和pH分别为50℃和7.4,该酶在40℃以下保温30min酶活仍较高,在60℃以上酶活全部丧失。在pH7.4～9.0的范围内比较稳定,而在pH7.0以下时,酶活下降很快。金属离子Cu2+、Zn2+、Al3+能抑制弹性蛋白酶的活性,而Fe3+、Li2+能激活弹性蛋白酶活性,螯合剂EDTA则严重抑制弹性蛋白酶活性。

中性蛋白酶发酵工艺优化研究

采用正交试验，对枯草芽孢杆菌ＨＤ４０１中性蛋白酶深层发酵工艺进行了优化，结果表明：较优发酵培养基为玉米粉５％、豆饼粉３％、麸皮４％、Ｎａ＿２ＨＰＯ＿４０．４％、ＫＨ＿２ＰＯ＿４０．０３％；在发酵中期流加蚕蛹水解液５％、植酸钙０．２％、吐温－８００．１％，对发酵后期有较大的调控作用。采用优化工艺，在２Ｌ发酵罐中进行验证试验，酶活达１３２００ｕ／ｍｌ，比原工艺提高了１６４％。

渤海湾浅表海水中产低温蛋白酶适冷菌的筛选

从渤海湾浅表海水中分离到150株产蛋白酶的低温菌 ,对其中5株产蛋白酶活力较高的菌株的生长特征和其所产蛋白酶的酶学性质进行了研究。这5株菌的最适生长温度都在20～25℃ ,最高生长温度都在35～40℃ ,属于典型的适冷菌。这5株菌中 ,SM9908的产酶活力最高 ,为320U/ml。这5株菌所产蛋白酶的最适酶活温度均为35～40℃。最适 pH在7.0～9.0范围内 ,为中性或碱性蛋白酶。这些蛋白酶的热稳定性普遍较低 ,SM9908所产蛋白酶的热稳定性最高 ,在50℃保温20min仍具有42.9 %的酶活。这些低温蛋白酶在洗涤剂、饲料。

AS1.398中性蛋白酶固定化条件的初步研究

考察壳聚糖、卡拉胶、海藻酸钠、琼脂等固定化载体对 AS1 .398中性蛋白酶固定化的影响。确定 0 .3%戊二醛在 30℃ ,p H8.0的条件下处理壳聚糖 8～ 1 0 h,加酶液 ,固定 8h,酶活力回收约为 77% ,固定化酶最适作用温度为 55℃ ,最适作用 p H为 8.0 ;

Actinomucor elegans、Aspegillus oryzae和Rhizopus oligosporus产蛋白酶条件及蛋白酶性质的比较

比较了腐乳生产菌株Actinomucor elegans、豆酱和酱油生产菌株Aspegillus oryzae以及天培生产菌株Rhizopus oligosporus产生蛋白酶的条件和所产蛋白酶的性质。结果表明,不同的菌株产酶条件及蛋白酶的性质有较大的差异:少孢根霉主要产生酸性蛋白酶,在pH2.5-4.0的酸性介质中、32℃条件下培养时产酶能力较强,所分泌的蛋白酶系在pH5.0时酶活力最高,在pH5.0附近最稳定;米曲霉可以产生酸性、中性及碱性蛋白酶,所产生的蛋白酶活力显著高于少孢根霉和毛霉,米曲霉在酸性条件下产酸性蛋白酶能力强,在中性条件下产中性蛋白酶能力强,在碱性条件下产碱性蛋白酶能力强,在28-32℃时产酶能力强,所分泌的蛋白酶系在pH5.0-9.0的广泛范围内有很强的活力,在pH6.0-8.0的范围内稳定性强;毛霉可以产生酸性、中性及碱性蛋白酶,但酶活力明显低于米曲霉,毛霉在中性偏酸性(pH5.5)的介质中产酸性蛋白酶的能力较强,但介质的酸碱度对毛霉产中性及碱性蛋白酶没有影响,在28℃时产酸性、中性和碱性蛋白酶的能力都比较强,毛霉所分泌的蛋白酶系在pH5.0-9.0的广泛pH范围内有活力,在pH5.0-6.0时酶活力最高,在pH5.0-7.0时稳定强。

枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件优化

对1株枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵培养基以及发酵条件进行了优化,最终确定了摇瓶最佳发酵培养基为:甘油40 g/L、豆粕粉30 g/L、麸皮10 g/L、Na2HPO44 g/L、K2HPO40.3 g/L。摇床最佳发酵条件为:温度30℃、转速250 r/min、接种量体积分数6%,在此发酵条件下,酶活达到6 082.7 U/m L,发酵强度为56 U/(m L·h)。在15 L发酵罐进行了初步验证,通过流加甘油分批发酵,在第25h酶活达到最大值,为11 871 U/m L。

碱性蛋白酶(alcalase)水解鹰嘴豆分离蛋白的工艺优化

采用单因素和正交试验的方法对碱性蛋白酶alcalase水解鹰嘴豆分离蛋白的工艺进行了系统研究,确定最佳水解条件为:pH,9.0;反应温度(T),50℃;底物浓度[S],4%;酶与底物浓度比[E/S],0.4 AU/g。在最佳条件下水解100 min水解度可达52.65%。

高产中/碱性蛋白酶的枯草芽孢杆菌W1菌株的筛选及条件优化

为了筛选高产蛋白酶活性细菌,以大豆及其发酵制品为目标样品,采用酪蛋白平皿筛选到一株既可产中性蛋白酶又可产碱性蛋白酶的细菌菌株W1,经形态学及16S rDNA基因序列分析鉴定为枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp. Subtilis),其产中性蛋白酶和碱性蛋白酶活力分别为28.99 U/mL和33.19 U/mL。通过单因素试验对其产蛋白酶的培养条件进行初步优化,并在此基础上以总蛋白酶活力为指标对其产蛋白酶条件进一步进行正交试验优化,最佳条件为培养基初始pH 9.0,接种量4%,培养温度35℃,培养时间48 h,此条件下中性蛋白酶活力为40.39 U/mL,碱性蛋白酶活力为52.02 U/mL,总蛋白酶活力为92.41 U/mL,优化后相应酶活力分别提高了39.3%、56.7%和48.6%,这将为枯草芽孢杆菌W1菌株蛋白酶的酶学性质研究提供帮助,同时也是对蛋白酶活性枯草芽孢杆菌资源库的丰富。

信号肽筛选和核糖体结合位点优化的组合策略提高角蛋白酶在枯草芽孢杆菌中的胞外表达

角蛋白酶(keratinase)是一类能够特异性降解角蛋白的蛋白酶,在废弃物回收、皮革纺织和饲料添加等领域有着广泛的应用前景。然而,较低的胞外蛋白含量仍是重组角蛋白酶开发的主要问题。前期研究中已经获得了1株重组枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis WB600-p43NMK-Ker,在摇瓶水平下,其胞外角蛋白酶活力为10.4 kU/mL,在SDS-PAGE分析中发现角蛋白酶所在条带颜色较浅,说明其胞外表达量较低。该研究考察了信号肽和核糖体结合位点(ribosome binding site,RBS)对角蛋白酶胞外表达量的影响。通过枯草芽孢杆菌内源信号肽替换,筛选得到的带有SP_(dacB)的重组菌株的分泌能力显著提升,其胞外角蛋白酶活力达到84.3 kU/mL,约为出发菌株胞外酶活力的8.1倍。在此基础上,通过对RBS进行基于高效突变位点的半理性预测的饱和突变,筛选得到的1株高产菌株R16D12,其胞外酶活力达到109.1 kU/mL,较RBS优化前提高了29%,是出发菌株胞外酶活力的10.5倍。研究结果表明,信号肽筛选和RBS优化的组合策略显著提高了角蛋白酶在枯草芽孢杆菌中的胞外表达量,为后续研究与应用奠定了基础。

重组弹性蛋白酶在猪肉嫩化中的应用

以木瓜蛋白酶作为对照,研究本实验室构建的重组毕赤酵母表达产物即弹性蛋白酶在肉类嫩化方面的应用,测定酶的活力,并对酶的最佳作用条件进行研究,进一步对其在肉类嫩化应用中加酶量、加入方式,肉的处理温度和时间进行优化。实验利用质构仪和嫩度计测定肉的剪切力的变化,按照剪切力与嫩化程度成反相关的规律并结合显微镜观察结果综合判断肉的嫩化程度。结果显示:利用注射法把酶液均匀注射入经过75～80℃水浴加热20～30min处理的肉样中,加入酶量约20～37mg/mL,处理时间为2.5～6h时,该重组弹性蛋白酶对肉的嫩化效果较好。

产蛋白酶深海细菌的筛选及其蛋白酶酶学性质

从中国南海深海海泥中筛选出了2株产中低温碱性蛋白酶的菌株SWJS33,SWJS22,并对其发酵液中的蛋白酶性质作了初步研究。研究结果显示,SWJS33,SWJS22所产蛋白酶适用于较广的pH及温度范围,且有较好的温度稳定性和耐盐性。采用16S rDNA结合细菌常规鉴定方法,确认分离得到的SWJS33,SWJS22分别为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。

甲鱼酶解液化技术研究

用对比试验和正交试验对甲鱼酶解液化技术进行了研究。结果表明,木瓜蛋白酶的较佳酶解条件为酶用量(E/S)6g/kg,酶解温度65℃,pH值5.5,在此条件下酶解8h后氨基态氮含量为0.262g/kg,木瓜蛋白酶酶解速度慢;胃蛋白酶的较佳酶解条件为酶用量(E/S)42g/kg,酶解温度60℃,pH值1.5,在此条件下酶解6h后氨基态氮含量为0.286g/kg;再将这2种酶在同一底物下酶解,胃蛋白酶酶解速度较木瓜蛋白酶快,6h后酶解液氨基态氮含量为0.1793g/kg,而木瓜蛋白酶8h后酶解液氨基态氮含量为0.1590g/kg;胃蛋白酶酶解甲鱼蛋白液的颜色较木瓜蛋白酶的好;用2种酶复合酶解时,酶解效果较单独使用胃蛋白酶的效果差;酶解液经硅藻土过滤后,酶解液色泽呈乳清色,澄清透亮,适用于制作各种甲鱼保健食品。

Fe_3O_4磁性纳米粒子固定化胰蛋白酶

以Fe3O4@mSiO2@nSiO2介孔材料为载体,γ-氨丙基三乙氧基硅烷接枝,戊二醛交联,研究胰蛋白酶的固定化及其在蛋白酶解中的应用。对蛋白酶固定化条件的优化研究表明,φ(戊二醛)=1.875%、给酶量为0.3 mg/mL、反应时间为4 h时酶的固定化效率可达50.5%,且保持77.3%相同含量酶的活性。对牛血清蛋白的酶解实验表明,在微波辅助作用下,磁性微球材料固定化酶可快速高效地酶解牛血清蛋白,酶解液在λ=280 nm处有较明显的吸收信号变化,HPLC分析表明酶解液中多肽片段吸收值变化明显,同时有新的多肽片段生成。