复合诱变选育虾青素高产菌株及发酵条件优化

以红发夫酵母(Phaffia rhodozyma)PR2为出发菌株,采用紫外(UV)与硫酸二乙酯(DES)进行复合诱变,通过二苯胺平板初筛、摇瓶复筛、遗传稳定性试验,筛选高产虾青素突变菌株,并通过单因素试验对其发酵产虾青素条件进行优化。结果表明,在紫外照射100 s,DES含量1%的最适诱变条件下筛选得到一株高产虾青素突变菌株PUD11,其虾青素产量达到22.16 mg/L,且该突变菌株传代8次仍具有良好的遗传稳定性,其产虾青素的最佳发酵条件为发酵温度22℃、初始pH值5.0、接种量10%、摇瓶转速220 r/min、装液量75 mL/300 mL、发酵时间120 h。在此优化条件下,虾青素产量为31.39 mg/L,较出发菌株提高了106.24%。

发酵白酒糟生产饲料蛋白的培养条件及产物分析

利用白地霉(Geotrichum candidium) Z-4、热带假丝酵母(Candida tropicalis) Z-14和木素木霉(Trichoderma lignorum) Z-20三株菌混合发酵白酒糟生产饲料蛋白的培养基成分为白酒糟90％、麦芽根粉10％、尿素2％,原料:水=1:0.8,pH6.0,接种量10％,培养温度28～30℃,培养周期3d。分析结果表明,发酵产物营养丰富,粗蛋白含量高达32.1％,氨基酸含量齐全,脂肪含量为5.6％,维生素B_1和B_2的含量分别为2.2mg/kg和52.6mg/kg。具有较高的纤维素酶、半纤维素酶及淀粉酶活性。

香蕉皮发酵饲料的研究

以香蕉皮为主要原料,并添加少量尿素、甘薯粉和麸皮,将其混合后,调节水分,经过双螺杆挤压机挤压膨化,得到的产品,再接种一定量的产朊假丝酵母进行发酵。通过对尿素添加量、甘薯添加量、麸皮添加量、接种量和发酵时间对发酵饲料粗蛋白含量的影响进行研究,在单因素试验的基础上,采用4因素3水平的正交试验,确定了挤压香蕉皮最适的发酵工艺为:尿素添加量3%、甘薯添加量10%、麸皮添加量25%、接种量10%,发酵时间3d。发酵后的饲料蛋白含量达到27.87%,可以有效地提高饲料中蛋白含量,用于生产蛋白饲料。

稀土元素对红酵母的生长及类胡萝卜素合成的影响

探索了稀土元素镧Ｌａ３＋、铈Ｃｅ３＋和钕Ｎｄ３＋对红酵母ｐｈａｆｆｉａ ｒｈｏｄｏｚｙｍａ的生长，类胡萝卜素合成及菌体氨基酸组成的影响。三种稀土元素在所测试的浓度范围内对红酵母细胞生物量仅有轻度的抑制作用，但对类胡萝卜素的合成有促进作用。当培养基中分别加入２０ｍｇ／Ｌ的ＬａＣｌ３、５ｍｇ／Ｌ的ＣｅＣｌ３，和５０ｍｇ／ＬＮｄＣｌ３时，刺激类胡萝卜素合成作用最强，产量分别增加了３２．１％、３６．８％和４２．８％。红酵母菌体氨基酸组成分析表明，培养基中加入上述浓度的稀土元素后，菌体细胞的氨基酸总量基本不变，但氨基酸组成发生变化。

反刍动物饲用高产蛋白酵母菌株的分离和筛选

青贮饲料和酒糟饲料富含酵母菌,从中分离优化筛选出高产蛋白菌株可作为反刍动物饲用酵母菌。作者通过正交试验,对分离菌株进行培养条件的优化,从中筛选出1株高产蛋白菌株为酿酒酵母菌(saccharomyces cerevisiae),在温度30℃、初始pH为5、葡萄糖浓度2%、大豆蛋白胨浓度1%、麦芽汁粉0.3%、酵母膏0.3%、接菌量3%,转速180 r/min时,生物产量达到最高,细胞蛋白达到60.54 mg N/dl,菌体细胞达到1.7×109个/ml。

黑曲霉木聚糖酶结构基因和5'调控区基因克隆及其分析

以黑曲霉(Aspergillus niger)A3的基因组DNA为模板,根据已报道的xynB基因序列设计简并引物,在合适的PCR反应条件下有效地扩增出了xynB的结构基因及其5'调控区序列片段,并克隆到pBS-T载体上,序列测定表明,该目的片段全长1611 bp。通过序列分析:结构基因部分长744 bp,其中含有一个66 bp的内含子和18个氨基酸的信号肽序列;xynB基因的cDNA序列大小为678 bp,编码225个氨基酸,与GenBank上检索的木聚糖酶基因的核苷酸序列同源性最高达98%,氨基酸序列同源性达99%。在翻译起始点上游92 bp和118 bp处找到转录起始位点和类"TATA"box的核心启动子区特征元件以及"CAAT"box,表明所克隆的调控区序列具有真核生物启动子特点,这为构建木聚糖酶高效表达载体,用于工业育种奠定了基础。

不同促溶剂对酵母细胞在发酵液中自溶的影响

通过添加不同促溶剂研究酵母细胞在发酵液中的自溶情况。对影响酵母细胞内容物的溶出率的各因素进行单因素试验,并设计正交试验进行各因素参数优化。正交试验结果表明,以NaCl为促溶剂的酵母发酵液内的自溶条件为pH5.0、温度50℃、时间48h、NaCl添加量为9%,测得酵母细胞在发酵液内自溶率达到49.30%;以β-葡聚糖酶为促溶剂的酵母发酵液内的自溶条件为pH6.5、温度55℃、时间24h、酶添加量为0.6%,测得酵母细胞在发酵液内自溶率达到49.98%;以木瓜蛋白酶为促溶剂的酵母发酵液内的自溶条件为pH 6.0、温度60℃、时间72h、酶添加量1%,测得酵母细胞在发酵液内自溶率达到51.53%。

酵母菌紫外诱变时洗涤液与离心转速的选择

酵母菌在紫外诱变时,由于培养基中的色素及其他物质会影响到紫外线的穿透力,所以不能直接对酵母菌的液体培养物进行诱变,必须对酵母菌的液体培养物进行离心洗涤。该试验对洗涤过程中常用的洗涤液、离心时采取的转速和时间进行了筛选,为酵母菌的紫外诱变做了部分基础工作。

发酵法开发甲醇蛋白的研究

通过大量实验从土壤中分离筛选出 1株同化甲醇能力较强的菌株 15 35 7,该菌能以甲醇作为碳源进行单细胞蛋白的发酵。甲醇蛋白得率为 41.5 %,粗蛋白含量为 80 .9%,各类氨基酸齐全 ,8种主要氨基酸含量丰富。毒性试验证明是一种安全的饲料添加剂 ,喂养蛋鸡应用试验表明 ,可代替鱼粉 。

固体发酵生产活性酵母饲料的研究

本试验以提高植物性蛋白饲料的营养价值为目的，从8个不同酵母菌株中筛选出菌体蛋白质含量高、生长条件一致的4种菌为试验菌，进行固体发酵生产活性酵母饲料，并对其生产工艺做了细致的研究。试验结果表明：在本试验条件下，不同酵母菌株混合发酵培养优于单一菌株发酵培来制曲种原料中铁皮、豆粕、麻饼、玉米面的比例为对：10：15：5时，酵母菌繁殖最快；加曲种量为8％、发酵60小时后，产品粗蛋白质达到最高峰（53．8％）；不同比例混合菌种的发酵产品，1号、2号、3号活性酵母饲料的粗蛋白质含量与对照组相比都明显提高，分别为53．3％、54．2％。53．1％，氨基酸总数也分别提高了5．17％、8．16％、5．02％，而且整个生产工艺简单易行，成本较低，有很大的推广价值。

以玉米芯为原料发酵生产富含虾青素的饲料酵母

玉米芯是一种资源丰富的农副产品。采用氨水、稀酸、稀碱处理玉米芯 ,再用纤维素酶 -木聚糖酶复合酶系可将玉米芯水解生成可发酵性糖类 ,然后以法夫酵母作为菌种发酵来生产饲料酵母 ,从而获得了含有虾青素的饲料酵母 ,大大强化饲料酵母的营养 ,提高了酵母的价值。实验结果表明 ,8%的氨水和 4 %的氢氧化钠处理玉米芯 ,所得还原糖效率都较好 ;不同的初始糖浓度对酵母生长具有不同的影响 ,2 %的糖浓度有利于菌体的生长和虾青素的合成 ;酵母可能利用多种氮源进行生长 ,蛋白胨、鱼粉等有机氮有利于细胞的生长 ;[Goucose]/ [Ammoniumsulfate]=0 .7时细胞干重有较大值 ,而虾青素的浓度却在 [Goucose]/ [Ammoniumsulfate]=2时有较大值 ,为 2 .4 6mg/L。 5升罐上间歇培养中 ,最终细胞干重为 3.3g/L ,虾青素产率 2 .7mg/L。

甘蔗糖蜜酒精废液混菌发酵菌体蛋白的研究

本文报导利用甘蔗糖蜜酒精废液混菌发酵生产高质量菌体蛋白的研究,通过热带假丝酵母Candida tropicalis种内融合株Ct-3配伍其他菌株,混菌发酵时间缩短2～4h,生物量可达20g/L,粗蛋白质含量50～53％,灰份≤10％;水分为5～8％。与Ct-3单菌发酵相比,蛋白质提高4～6％。

鱼重组生长因子酵母的发酵研究

对含鲑鱼生长激素基因的甲醇酵母进行了发酵研究 ,比较了摇瓶发酵和自控罐发酵两种条件下酵母工程菌的生长和外源蛋白的表达 ,确定了自控罐发酵生产含鲑鱼生长激素酵母的工艺 ,为含鱼生长因子酵母饲料添加剂的生产奠定了基础。

柱前衍生高效液相色谱法测定酵母培养物中甘露聚糖的含量

采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)为衍生化试剂,建立了反相高效液相色谱测定酵母培养物中甘露聚糖的含量方法。样品酵母培养物经均质处理,其中的多糖在酸性条件下水解为单糖,PMP衍生后,以0.1 mol/l pH值5.5乙酸铵缓冲液乙腈(V/V,7030)为流动相,反相色谱柱分离,流速1.0 ml/min,紫外波长250 nm检测。结果表明,甘露糖浓度在1.0~100 mg/l范围内与对应峰面积呈线性关系(R2=0.99)。甘露聚糖添加回收率为96.3%~102.6%,相对标准偏差2.5%,甘露聚糖最低检出限为0.11 mg/l。该方法适用于酵母培养物中甘露聚糖含量的分析检测。

以葡萄渣为原料,固体发酵生产单细胞蛋白的初步研究

本文报道以葡萄渣为唯一碳源，利用微生物混合培养固体发酵技术生产单细胞蛋白的初步尝试。将自分的３株霉菌、（Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓ）４株酵母（Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）和１株细菌（Ｃｅｌｕｌｏｍｏｎａｓ）进行了不同组合的培养，并用正交试验法作了培养基配方试验，同时对培养基含水量和发酵时间也进行了一些摸索。初步结果表明，培养基在未经灭菌的条件下，以尿素为氮源，培养基含水量６０％，于２８℃—３０℃，培养４８ｈ，发酵产物的粗蛋白含量可提高一倍。

动物饲用高产蛋白酵母菌株培养条件的优化

采用正交试验法,对动物饲用高产蛋白酵母菌的生长条件进行了研究,探讨了温度、pH值、蔗糖质量浓度、装液量对酵母菌生长的影响。并测定酵母在自然pH值条件下、蔗糖质量浓度20 g/L,装液量2/5,培养条件30℃,摇床转速180 r/min的生长曲线。结果表明,对筛选酵母在30℃,pH值为6.5,蔗糖质量浓度20 g/L,装液量在100 mL/250 mL的条件下生长较优。其中温度为影响生物量的主要因素。通过对酵母生长曲线的测定得出筛选酵母的对数生长期在6～16h,之后逐渐达到稳定期。利用血细胞计数板方法对在优化条件下培养48 h的酵母菌进行计数,含酵母1.09×1010个。与市售酵母菌数相比基本一致。

假丝酵母（Candida）固体发酵的条件及发酵动力学

对影响热带假丝酵母（Ｃａｎｄｉｄａｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）ＺＡＵ－１菌株固体发酵的因素进行了试验．结果表明：最适发酵温度为３０—３５℃，培养基最适ｐＨ４—６，最佳含水量４７％—４８％，种子接种量为１０％，增湿通气有利于该酵母的固体发酵．此外，对通气、温度及湿度在发酵过程中的变化规律进行了分析；并讨论了该酵母固体发酵的动力学特征．

2株海洋红酵母的复合诱变及其高产类胡萝卜素菌株的选育

选用从雷州半岛近岸海域分离鉴定的2株海洋红酵母(胶红酵母J6和黏红酵母J2)作为出发菌株,进行亚硝基胍(NTG)和紫外线(UV)复合诱变,以期筛选出高产类胡萝卜素的突变株。先用NTG处理出发菌株的菌悬液60min,再用UV照射120s,且要连续诱变3次;每次复合诱变后的菌悬液经短时间的液体培养后涂布于红酵母琼脂平板培养,从中筛选出一定数量的第1、2和3代突变菌株;将突变菌株接种于红酵母发酵培养基,经培养、离心和烘干,制备出干菌体细胞;用分光光度计法测定干菌体细胞中的类胡萝卜素含量,筛选出高产类胡萝卜素的突变株,并进行遗传稳定性试验。结果表明,胶红酵母J6的正向突变率为56.57%(56/99),6株高产类胡萝卜素的突变株中,第3代3株,第2代2株,第1代1株,类胡萝卜素含量最高的突变株是胶红酵母J6-82,比出发菌株提高了99.56%;黏红酵母J2的正向突变率为53.01%(44/83),6株高产类胡萝卜素的突变株中,第3代4株,第2代2株,类胡萝卜素含量最高的突变株是黏红酵母J2-75,比出发菌株提高了93.64%。本试验采用的NTG和UV 3次复合诱变的方法有利于海洋红酵母的变异及其类胡萝卜素含量的提升,且突变菌株有良好的遗传稳定性。

利用啤酒的洗糟废水及柠檬酸废水生产单细胞蛋白

研究选择了Ｃａｎｄｉｄａｕｔｌｌｉｓ２号饲料酵母。该菌株絮凝性好，耐酸性强，培养中具有生长繁殖快，酵母产量高，培养周期短，培养条件粗放的特点，摇床试验结果：洗糟废水，３０℃下摇床培养１８小时左右，干酵母产率可达１４ｇ／Ｌ（绝干计）以上，柠檬酸废水，３０℃下摇床培养１６小时左右，于酵母产量可达１２ｇ／Ｌ（绝干计）以上。

利用豆腐黄水发酵生产酵母单细胞蛋白的研究

以豆腐黄水为液体培养基,酵母红-2为发酵菌种,研究不同培养条件对发酵生产酵母单细胞蛋白的影响,通过正交实验确定最佳发酵条件.实验结果表明:当豆腐黄水体积分数为70%、培养温度为30℃、接种量7%、装液量为50 m L/250 m L三角烧瓶、150 r/min摇床发酵培养37 h后,酵母单细胞蛋白产量可达4.15 g/L,其蛋白质量分数达27%以上.