小尾寒羊高繁殖力候选基因BMP15和GDF9的研究

以控制Belclare和Cambridge绵羊高繁殖力的骨形态发生蛋白 15 (bonemorphogeneticprotein 15 ,BMP15 )基因和生长分化因子 9(growthdifferentiationfactor 9,GDF9)基因为候选基因 ,采用PCR RFLP技术检测BMP15基因和GDF9基因在高繁殖力绵羊品种 (小尾寒羊、湖羊 )以及低繁殖力绵羊品种 (多赛特羊、特克塞尔羊、德国肉用美利奴羊 )中的单核苷酸多态性 ,同时研究这两个基因对小尾寒羊高繁殖力的影响。结果表明 :在 5个绵羊品种中都没有检测到GDF9基因的G8突变 (C→T) ,也没有检测到BMP15基因的B4突变 (G→T)。高繁殖力的小尾寒羊在BMP15基因编码序列第 718位碱基处发生了与Belclare绵羊和Cambridge绵羊相同的B2突变 (C→T) ,而其余 4个绵羊品种则没有发生这种突变。对于BMP15基因的B2突变 ,在小尾寒羊中检测到AA、AB两种基因型 ,A等位基因频率为 0 734,B等位基因频率为 0 2 6 6。小尾寒羊与其余 4个绵羊品种间B2突变基因型分布差异极显著 (P <0 0 0 1)。突变杂合基因型 (AB)小尾寒羊平均产羔数比野生纯合基因型 (AA)多 0 6 2只 (P <0 0 1)。研究结果表明 ,BMP15B2突变对小尾寒羊高繁殖力影响作用十分明显 。

玉米SSR遗传图谱的构建及产量性状基因定位

利用中国农大培育的高产、多抗性玉米杂交组合农大３１３８的Ｆ２．３家系为材料，构建了具 有８０对ＳＳＲ标记的玉米遗传图谱，标记间平均距离２５．４２，覆盖玉米基因组的２０３３．４ｃｍ。采用 随机区组田间设计，考察了２３０个家系的穗长、秃尖长、穗粗、穗行数、行籽数、千粒重、穗重、单 株粒重，利用区间作图法分析了影响各性状的数量性状基因座位（ＱＴＬ），共检测到３０个 ＱＴＬｓ。单个性状的ＱＴＬｓ为３～５个。ＱＴＬｓ解释变异量占总变异量的比例变化范围为９．５％～ ５５．３％．

中国部分黄牛品种mtDNA遗传多态性研究

对我国 8个黄牛品种 2 2个个体的mtDNAD loop区 910bp全序列进行了分析。结果表明 :8个黄牛品种D loop区序列中 ,A +T平均含量为 6 1 6 5 % ;经比对 ,共检测到 6 6个核苷酸多态位点 ,约占核苷酸总数的 7 2 5 % ;D loop全序列突变类型有 5种 ,即转换、颠换、插入、缺失及转换与颠换共存 ,它们分别占核苷酸多态位点的 81 82 %、6 0 6 %、7 5 7%、3 0 3%及 1 5 2 %。以欧洲牛mtDNAD loop全序列为标准 ,8个黄牛群体D loop的平均核苷酸变异率分 3个层次 :西镇牛、蒙古牛、黑白花牛及秦川牛的核苷酸变异率最低 ,分别为 0 37%、0 4 4 %、0 5 2 %和 0 6 6 % ;南阳牛与郏县红牛的核苷酸变异率居中 ,分别为 1 91%和 2 0 2 % ;晋南牛与岳阳牛的核苷酸变异率最高 ,分别为4 4 7%和 4 73%。中国黄牛品种内D loop区序列歧异度为 0 5 5 %～ 5 39% ,品种间序列歧异度为 1 2 1%～ 6 5 9%。在所测黄牛个体中 ,mtDNAD loop序列由 19种单倍型组成 ,单倍型比例为 86 36 % ,说明中国黄牛mtDNA遗传多态性很丰富。由此构建了中国 8个黄牛品种的NJ分子系统树 ,聚类分析表明 :所测黄牛的mtDNAD loop序列表现为3个单倍型组 ,从而揭示中国黄牛可能有 3个母系起源 。

转甜菜碱醛脱氢酶基因植物的耐盐性研究

将山菠菜甜菜碱醛脱氢酶（ＢＡＤＨ）基因经农杆菌介导转入草莓、烟草，转基因植株中该基因的转录水平、ＢＡＤＨ活性及耐盐性均明显高于对照，膜的相对电导率和大分子渗漏值说明在盐胁迫下转基因植株的膜结构所受损伤小于对照。

普通小麦、斯卑尔脱小麦、密穗小麦和轮回选择后代材料ISSR分子标记遗传差异研究

首次采用ISSR(Inter SimpleSequenceRepeat)分子标记 ,对我国北方冬麦区普通小麦 (14份 )、斯卑尔脱小麦 (10份 )、密穗小麦 (11份 )和一批以外源小麦为主要血缘的优良轮回选择后代 (12份 )共 4 7份材料进行了遗传差异研究 ,以探讨拓宽杂交小麦育种亲本遗传基础的途径 ,并分析利用ISSR分子标记构建小麦杂种优势群的可行性。所用 11个ISSR引物在 4 7份材料中共扩增出 2 38条带 ,其中 2 0 8条具有多态性 ,占总数的 87.4 %。每个引物可以扩增出 11～ 38条多态性带 ,平均为 18.8条。比较分析发现 ,不同类型材料群体内的ISSR多态性都很高 ,其中以普通小麦最高 (80 .3% ) ,轮回选择后代次之 (78.7% ) ,斯卑尔脱小麦 (75 .0 % )和密穗小麦 (74 .9% )相对较小。遗传距离(GD)计算结果表明 ,不同类型材料群体间的平均遗传距离在 0 .3115～ 0 .344 2之间 ,明显高于不同类型材料群体内的GD平均值 (0 .2 35 1～ 0 .2 74 3) ,特别是轮回选择后代材料与普通小麦、斯卑尔脱小麦和密穗小麦之间也具有较大的遗传差异 ,平均遗传距离分别为 0 .32 17、0 .32 5 6和 0 .3198。聚类结果显示 ,普通小麦、斯卑尔脱小麦、密穗小麦和轮回选择后代材料明显划分为 4大不同类群。斯卑尔脱小麦、密穗小麦及以外源小麦 (含国内 )

玉米P_(25)自交系抗锈病基因的遗传分析及SSR分子标记定位

以玉米南方型锈病免疫自交系P2 5和感病自交系F3 4 9及F1、F2 、B1和B2 为材料 ,采用主基因 多基因混合遗传模型研究了P2 5的抗病遗传规律。结果表明 :自交系P2 5的抗病基因为一主基因 ,表现为加性效应 ,没有检测出多基因 ,其在F2 、B1和B2 群体的遗传率分别为 81 88%、38 14 %和 5 5 1%。利用SSR分子标记技术 ,以组合P2 5×F3 4 9的F2 :3 家系作为构图群体 ,构建了玉米SSR遗传连锁图谱 ,并将玉米抗南方型锈病基因定位于 10号染色体上 ,与phi0 5 9标记的遗传距离为 5 8cM。

苗期水稻根部性状的QTL定位

耐旱是水稻抗逆研究中最重要的性状之一。利用水稻籼粳品种窄叶青８号（ＺＹＱ ８）和京系 １７（ＪＸ１７）及其通过杂交Ｆ１代花药培养获得的由 １２７个单株组成的双单倍体分离群体（ｄｏｕｂｌｅ ｈｏｐｌｏｉｄ， ＤＨ）为材料，在营养液中培养 １０天后，对影响抗旱能力的根部几个主要性状进行了分析，发现最大根长（Ｍａｘｉｍｕｍ Ｒｏｏｔ Ｌｅｎｇｔｈ， ＭＲＬ）、根干重（Ｄｒｙ Ｒｏｏｔ Ｗｅｉｇｈｔ，ＤＲＷ）和根茎干重比（Ｒｏｏｔ／Ｓｈｏｏｔ Ｒａｔｉｏ ｏｆ Ｄｒｙ Ｗｅｉｇｈｔ， ＲＳＲ）３个性状在群体中变异较大。利用该群体建立的水稻分子遗传图谱，对上述 ３个水稻性状进行数量性状座位（ＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＴｒａｉｔ Ｌｏｃｕｓ， ＱＴＬ）的分析定位，结果表明，２／１／２个ＱＴＬｓ的亲本ＪＸ１７等位基因分别控制着最大根长、根干重和根茎干重比的表达，对表型变异的解释率分别为１６．４％、１７．０％、１６．４％、１０．４％和 １９．９％；２／１个ＱＴＬｓ的亲本ＺＹＱ８等位基因分别控制着最大根长和根茎干重比的增加，对表型变异的解释率分别为１９．６％、１３．０％和１３．２％。检测到的８个ＱＴＬｓ分别位于水稻的染色体２、３、４、５、６、９和?

猪雌激素受体(ESR)基因对产仔数性状的影响

猪产仔数是重要的经济性状，产仔数的提高将会大大地增加商品肉猪的产量，给现代养猪生产带来巨大的经济效益。ＥＳＲ基因是影响猪产仔数的主效基因，而且与猪的生长发育性状及酮体性状之间不存在负的基因多效性影响。采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰｓ的方法，通过对５个不同品种的、特别是我国地方品种的２６２头母猪进行了基因多态性分析，研究表明ＥＳＲ基因在这些种群对产仔数均有极显著影响，ＥＳＲ位点ＢＢ基因型母猪平均比ＡＡ基因型母猪多１．４０～３．３７头总产仔数／胎，０．６３～３．５８头产活仔数／胎，这些发现对育种改良猪繁殖性能有重要意义。

大豆重要农艺性状的QTL分析

应用栽培大豆科丰 1号 (♀ )和南农 1 1 38- 2 (♂ )杂交得到的F9代重组自交系 (RILs)群体 ( 2 0 1个家系 ) ,构建了含 30 2遗传标记、覆盖 2 363 8cM、由 2 2个连锁群组成的遗传连锁图谱。采用区间作图法 ,对该群体的主要农艺性状的调查数据进行QTL分析 ,表明与开花期、成熟期、株高、主茎节数、每节荚数、倒伏性、种子重、产量、蛋白质和含油量等 1 0个重要农艺性状连锁的QTL位点 34个 ,每个数量性状的遗传变异是由多个QTL位点决定的。

水稻纹枯病抗性QTL分析

对籼稻窄叶青 8号 (ZYQ8)和粳稻京系 17(JX17)以及由它们构建的加倍单倍体 (DH)群体 ,分别在杭州和海南岛 ,采用注射器接种法进行纹枯病抗性鉴定 ,并使用该群体的分子连锁图谱进行数量性状座位 (QTL)分析。共检测到 4个抗纹枯病的QTL(qSBR 2、qSBR 3、qSBR 7和qSBR 11) ,分别位于第 2、第 3、第 7和第 11染色体。其中qSBR 2、qSBR 3、qSBR 7的抗性基因由抗病亲本ZYQ8贡献 ,而qSBR 11的抗性基因来自感病亲本JX17。qSBR 2、qSBR 3和qSBR 7在杭州和海南岛都能检测到 ,而qSBR 11只在杭州检测到。在杭州的实验中 ,纹枯病病级与秆长和抽穗期呈显著负相关 ;在控制秆长和抽穗期的QTL中 ,控制秆长的qCL 3与qSBR 3位于同一染色体区域 ,其余QTL与抗纹枯病的QTL之间无连锁关系。

水稻生防菌株多粘类芽孢杆菌WY110抗菌蛋白的纯化及其基因克隆

通过DEAE SephadexA 5 0离子交换层析和SephacrylS 2 0 0分子筛层析并采用抑菌活性和SDS PAGE跟踪检测 ,从多粘类芽孢杆菌 (Paenibacilluspolymyxa)WY110菌株中分离纯化到一种对稻瘟病菌具有拮抗活性的抗菌蛋白P2 (分子量约 2 6kD)。平板抑菌试验表明 ,在PDA培养基上 1 5 μg纯化的P2 蛋白即可有效地抑制稻瘟病菌菌丝生长 ,并对所测试的稻瘟病菌不同菌株均表现出抑菌活性。对P2 蛋白的N 端测序结果表明 ,N 末端 2 4个氨基酸序列为H2 N Ala Asn Val Phe Trp Glu Pro Leu Ser Tyr Tyr Asn Pro Ser Thr Trp Gln Lys Ala Asp Gly Tyr Ser Asn 。以此为靶序列在网上用BlastP程序对蛋白质序列数据库进行了类似性检索 ,发现其与来源于芽孢杆菌的β 1,3 1,4 葡聚糖酶前体具有很高的同源性。进一步用此酶的特异底物地衣多糖进行了定性检测 ,验证了P2 蛋白具有 β 1,3 1,4 葡聚糖酶的活性。在此基础上 ,根据P2 蛋白N 末端氨基酸序列及此酶C 端保守性序列设计合成了两端引物 ,以WY110基因组DNA为模板 ,通过PCR高保真扩增获得了P2 蛋白编码基因的全序列 ,并克隆到pMD18 T载体上。核苷酸序列分析表明 ,其 5′端 72个核苷酸序列与蛋白N 端已知的 2 4个氨基酸序列完全吻合 ,序列全长为 6 36bp (GenBank登录号 :AF2

提高农杆菌转化水稻频率的研究

以１６种重要的籼稻和粳稻栽培品种为材料，研究了影响农杆菌转化水稻频率的有关因素。结果表明：ＣＣ培养基是绝大多数水稻愈伤组织的最适诱导与继代培养基；添加２．５～５ｍｇ ／ Ｌ ＡＢＡ可以有效地改善水稻愈伤组织的质量；籼稻愈伤组织所需的筛选剂浓度低于粳稻愈伤组织所需的浓度；根癌农杆菌ＥＨＡ１０５菌株对水稻的转化效果优于ＬＢＡ４４０４和ＡＧＬ１菌株的效果；头孢霉素对农杆菌的抑制效果优于羧苄青霉素的效果；共培养后进行适当的干燥处理既可增强脱菌效果，又可提高转化频率。应用我们所优化的农杆菌转化技术体系，获得了１０个品种的水稻转基因植株。

转几丁质酶和葡聚糖酶基因棉花的获得及其对黄萎病的抗性

通过根癌杆菌介导法 ,将维管束特异启动子 (竹节花黄斑病毒启动子CoYMV)启动的几丁质酶和CaMV3 5S启动的 β 1,3 葡聚糖酶嵌合双价基因 ,导入陆地棉品种冀合 3 2 1和中棉所 3 5。利用卡那霉素涂抹法对转基因株的卡那霉素抗性进行初步鉴定 ,再经PCR和Southern杂交确证 ,结果显示双价抗病基因分别以 1～ 2个拷贝整合到棉花基因组内。对转基因株系T3 幼苗进行无底塑钵菌液浇根法鉴定和大田病圃鉴定 ,结果显示 :7个转化株系均表现不同程度的抗或耐黄萎病性 ,苗期鉴定结果和大田病圃调查结果基本一致 ;其中D9910、D9915和D9919等 3个转基因纯合系的大田病情指数分别为 6 5、9 4和 9 5,均达到高抗水平。对以上 3个高抗黄萎病的纯合系进行遗传分析 ,结果显示这 3个抗病纯合系的卡那霉素抗性符合一对显性基因分离规律 ,结合分子杂交验证结果 ,可以认为这3个转基因株均含有一个拷贝的双抗病基因。

利用 RFLP、SSR、AFLP和 RAPD标记分析玉米自交系遗传多样性的比较研究

利用 ＲＦＬＰ、ＳＳＲ．ＡＦＬＰ和ＲＡＰＤ ４种分子标记方法研究了 １５个玉米（Ｚｅａ ｍａｙｓ Ｌ．）自交系的遗传多样性，同时对４种标记系统进行比较。在供试材料中筛选到具多态性的ＲＦＬＰ探针酶组合５６个，６６对ＳＳＲ引物，２０个ＲＡＰＤ引物和９个ＡＦＬＰ引物组合，分别检测到多态性带１６７、２０１、８７和１０８条。ＳＳＲ标记位点的平均多态性信息量（ＰＩＣ）最大（０．５４），ＡＦＬＰ标记位点最小（０．３６），但ＡＦＬＰ标记具有最高的多态性检测效率（Ａｉ，３２．２）。４种分子标记所得遗传相似系数相关性显著，比较相关系数表明 ＲＡＰＤ可靠性较低。依据 ４种分子标记结果将 １５个供试自交系划分为塘四平头、旅大红骨、兰卡斯特、瑞德和ＰＮ共５个类群，与系谱分析基本一致。认为ＳＳＲ和ＲＦＬＰ两种分子标记方法适合进行玉米种质遗传多样性的研究。

西瓜抗枯萎病育种分子标记辅助选择的研究

将西瓜野生种质ＰＩ２９６３４１抗枯萎病生理小种１的抗性基因连锁的ＲＡＰＤ标记ＯＰＰ０１／７００进行克隆、测序，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证明此标记为１个单拷贝，并转化为ＳＣＡＲ标记，简化了ＳＣＡＲ扩增产物的检测技术。上述技术在抗病转育后代选择中得到了很好的应用，初步建立了西瓜抗枯萎病育种分子标记辅助选择技术系统。

鱼类线粒体DNA研究新进展

线粒体DNA是分子生物学研究中的一个热门领域 ,已成为鱼类进化生物学和群体遗传学研究的重要分子遗传标记。本文对鱼类线粒体DNA分子生物学的最新研究进展进行了较详细的阐述 ,重点介绍鱼类线粒体DNA全序列的研究进展、组成及特征 ,鱼类线粒体DNA非编码区结构研究进展 ,鱼类线粒体DNA多态性及其主要的检测方法 ;综述了最近有关鱼类线粒体DNA在鱼类系统学、种间杂交渐渗、种群识别、起源和进化、地理分化等研究中的应用情况。

不同猪种E .coli F1 8受体基因的多态性

采用PCR RFLP技术检测了大约克、长白、杜洛克、宁乡、沙子岭和大围子 6个品种共 86 7头猪的E .coliF18受体 (ECF18R)基因座的遗传变异。结果表明 :Hin6Ⅰ RFLP位点上 ,大约克、长白、杜洛克 3个外来猪种均存在多态 ,且以敏感型 (GG型和AG型 )居多 ,平均占 94%,3个外来猪种的G等位基因频率平均为 0 76 ,AA抗性型个体占少数 ,平均为 6 %,猪群中M30 7处G→A的突变频率并不高。宁乡、沙子岭和大围子 3个本地猪种的所有检测样品都表现为GG型 ,在该位点上均不存在G→A的突变。各猪种ECF18受体基因座的PCR RFLP基因型分布 χ2 检验结果表明 ,每个外来猪种ECF18受体基因座的PCR RFLP基因型分布与 3个本地猪种的相比均差异显著或极显著 ,3个本地猪种间的ECF18受体基因座的PCR RFLP基因型分布完全一致。外来猪种间只有长白与杜洛克各基因型的分布差异显著 ,其余均不显著。

运用近等基因系(NIL)、AFLP、RFLP和SCAR标记对玉米S组育性恢复基因(Rf_3)的研究

以１对近等基因系（ＮＩＬ）及其回交群体（ＢＣ１）为材料，采用ＢＳＡ法，利用ＡＦＬＰ技术，筛选与Ｒｆ３基因连锁的分子标记。在筛选的１２８个ＡＦＬＰ引物组合中，有２个能在ＮＩＬ及其可育池、不育池间扩增出多态性条带ＲＲ６和ＲＲ７。１００个ＢＣ１个体验证结果表明，ＡＦＬＰ标记ＲＲ６扩增产物中仅出现２个重组体，重组率２％，由此估测ＲＲ６距Ｒｆ６基因约２．０ｃＭ。并成功地将此标记转化为 ＳＣＡＲ标记，进行了ＮＩＬ和 ＢＣ１个体的特异性扩增。在来自综 ３ × Ｐ１３８的Ｆ２：３的群体上经ＲＦＬＰ分析后，将ＲＲ６定位于第二染色体的长臂上。不仅为辅助育种奠定了基础，而且为克隆Ｒｆ３基因提供了有益的信息。

大豆耐旱种质鉴定和相关根系性状的遗传与QTL定位

从301份黄淮海和长江中下游地区代表性大豆地方品种和育成品种(系)中按根系类型选取59份,在苗期干旱胁迫和非胁迫条件下对地上部和地下部性状进行2年重复鉴定,发现材料间性状隶属函数值具有丰富遗传变异,以株高、叶龄、根干重和茎叶干重隶属函数的算术平均数为抗旱综合指标从中筛选出汉中八月黄、晋豆14,科丰1号,圆黑豆等强耐旱型(1级)和临河大粉青、宁海晚黄豆等干旱敏感型(5级)材料。比根干重、比总根长、比根体积与耐旱隶属函数平均值均呈极显著正相关,可作为耐旱性的根系性状指标。利用“科丰1号×南农1138 2”(1级×4级)衍生的RIL群体为材料,对耐旱相关根系性状采用主基因+多基因混合遗传模型分离分析法进行遗传分析并进行QTL定位。结果表明,该两亲本间比根干重、比总根长、比根体积的遗传均为两对主基因加多基因模型,后两者主基因间有连锁(重组率分别为4.30%和1.93%);主基因遗传率为62.26%～91.81%,多基因遗传率为2.99%～24.75%;耐旱相关根系性状各主要由1对主基因控制,另1对效应较小。QTL分析检测到5、3、5个QTLs分别控制比根重、比根总长、比根体积,位于N6 C2、N8 D1b+W、N11 E、N18 K连锁群上。3性状各有1个贡献率大的QTL(Dw1,Rl1,Rv1),而且均位在N6 C2的STAS8_3T STAS8_6T相同距离的区段上,其他QTLs效应均较小。分离分析与QTL定位的结果相对一致。

鸡PPAR基因单核苷酸多态与脂肪性状相关的研究

以AA肉鸡和 3个中国地方鸡品种 (石岐杂、北京油鸡、白耳鸡 )为实验材料 ,用 7对引物对PPAR α基因整个编码区用PCR SSCP方法进行了扫描 ,结果发现引物 4扩增片段上有一个C T的单碱基突变 ,使鸡群中表现出 3种基因型 (AA、AB、BB)。统计结果发现 3种基因型在各品种中的分布不一致 ,AA肉鸡同中国地方鸡品种差异很大 ,χ2 独立性检验差异极显著 (P <0 0 1)。将AA肉鸡 3种基因型同腹脂等屠体性状进行方差分析 ,结果表明BB基因型与其他 2种基因型相比有较高的腹脂重和腹脂率 ,同AA型比较差异显著 (P <0 0 5 )。因此推测PPAR α基因可能是影响鸡脂肪代谢的主效基因或与控制该性状的主效基因连锁 ,并且能够用于对鸡脂肪性状进行分子标记辅助选择。