丹荔输通汤对慢性输卵管炎性阻塞模型大鼠TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:探究丹荔输通汤对慢性输卵管炎性阻塞模型大鼠TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法:将84只雌性SD大鼠按随机数字表法抽取11只作为空白组,其余73只大鼠以苯酚明胶化学法构建慢性输卵管炎性阻塞模型,将造模成功大鼠随机分为模型组、西药灌胃对照组、丹荔输通汤中剂量灌胃组及丹荔输通汤高、中、低剂量灌胃+灌肠组共6组,每组11只。模型组灌胃生理盐水;丹荔输通汤高、中、低剂量灌胃+灌肠组分别予14.7.3.5 mg/kg丹荔输通汤灌胃+灌肠;丹荔输通汤中剂量灌胃组予7 mg/kg丹荔输通汤灌胃,西药对照组予10 mg/kg阿奇霉素混悬液灌胃。干预结束后,处死各组大鼠并取输卵管组织,采用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察各组大鼠输卵管组织形态学变化情况;采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组大鼠血清Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)、核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α).白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)表达水平。结果:HE结果显示,模型组大鼠输卵管管腔阻塞,绒毛不完整,破坏严重,腔内有炎性渗出,大量炎细胞浸润;各药物组大鼠输卵部组织形态学均较模型组改善,且呈剂量依赖性;与模型组比较,丹荔输通汤各剂量灌胃+灌肠组均能不同程度下调血清TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6表达水平(P<0.01);与西药灌胃对照组比较,丹荔输通汤中、高剂量灌胃+灌肠组血清TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6表达水平明显下调,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:丹荔输通汤能够减轻慢性输卵管炎性阻塞模型大鼠输卵管炎性症状,其机制可能与丹荔输通汤调控TLR4/NF-κB信号通路,抑制TNF-α、IL-6等炎性因子表达,从而抑制炎症反应,改善输卵管局部组织炎性状态有关。

基于TLR-4/MyD88/NF-κB对健脾化滞丸治疗溃疡性结肠炎的机制进行拆方研究

目的:通过建立脾虚湿蕴型溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型,探讨健脾化滞丸及其不同拆方对TLR-4/MyD88/NF-κB通路的影响。方法:64只Wistar大鼠随机分为正常对照组8只、模型组56只,采用中医证候联合乙醇-2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠法复制UC大鼠模型,造模成功后,将模型大鼠随机分为模型组(M)、美沙拉嗪组(A)、健脾化滞丸全方组(B)、健脾清化方组(C)、健脾清化活血方组(D)、健脾清化导滞方组(E)、清化导滞活血方组(F),每组8只,给予相应药物灌胃4周,疗程结束后处死所有大鼠并取材,观察大鼠体质量变化、疾病活动度及结肠病理改变,ELISA及免疫组化检测大鼠结肠组织TNF-α表达;RT-PCR及Western blot检测大鼠结肠组织TLR-4、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达。结果:健脾化滞丸全方、健脾清化方、健脾清化活血方组及健脾清化导滞方组大鼠体质量明显高于模型组(P<0.01),各治疗组均能明显改善UC模型大鼠结肠组织病理损伤及疾病活动指数,其中健脾化滞丸全方组及健脾清化活血方组作用最好。各治疗组均可抑制结肠组织TLR-4、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达(P<0.001),其中美沙拉嗪组、健脾化滞丸全方组、健脾清化导滞方组及清化导滞活血方组在降低NF-κB mRNA及蛋白表达上明显优于健脾清化方组及健脾清化活血方组(P<0.05)。各组均能降低结肠组织TNF-α表达(P<0.001),组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:健脾化滞丸及各拆方均可能通过TLR-4/MyD88/NF-κB通路发挥作用,其中黄连、煨木香、凤尾草、炮姜可能为本方核心药物,对临床具有一定指导意义。

黄芩苷对干酵母致热大鼠的解热作用及血清TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE_(2)、cAMP和脑组织NF-κB表达的影响

目的:观察黄芩苷对干酵母致热大鼠的解热作用并探讨其作用机制。方法:采用背部皮下注射干酵母构建大鼠发热模型,SD雄性大鼠随机分为正常对照,模型组,阳性组(阿司匹林,0.1 g/kg),黄芩苷高、中、低剂量组(160、80、40 mg/kg),连续给药3 d,测定各组大鼠肛温的变化;酶联免疫法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、前列腺素E_(2)(PGE_(2))与环磷酸腺苷(cAMP)水平;Western Blot检测各组大鼠脑组织NF-κB p65(核转录因子-κB p65)蛋白表达。结果:黄芩苷高剂量组有显著解热效果(P<0.01),黄芩苷各剂量组均可不同程度降低大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE 2和cAMP含量;与正常组比较,模型组脑组织NF-κB p65蛋白表达增多,黄芩苷高剂量组可明显降低大鼠脑组织NF-κB p65表达(P<0.05)。结论:黄芩苷可显著性降低干酵母引起的体温升高,解热机制可能与抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE_(2)与cAMP的分泌和减少脑组织NF-κB p65蛋白表达有关。

α-倒捻子素通过NF-κB途径抑制LPS/ATP诱导的小胶质细胞中NLRP3炎症小体的激活

目的探究α-倒捻子素(α-mangostin)在脊髓损伤后小胶质细胞炎症模型中作用及相关机制。方法体外培养小鼠小胶质细胞系BV-2细胞,利用脂多糖和三磷酸腺苷(LPS/ATP)联合诱导的方式建立BV-2炎症模型。CCK-8法检测不同浓度(0、10、20、40、80μmol/L)的α-mangostin对LPS/ATP刺激下的细胞增殖活力影响以筛选适宜的α-mangostin浓度范围;将BV-2细胞分为Ctrl组、LPS/ATP组、40μmol/Lα-mangostin组和不同浓度(10、20、40μmol/L)的α-mangostin干预组(分别记为LPS/ATP+10μmol/Lα-mangostin组、LPS/ATP+20μmol/Lα-mangostin组与LPS/ATP+40μmol/Lα-mangostin组)。ELISA实验检测各组BV-2细胞上清液中促炎因子白介素-6/1β/18(IL-6、IL-1β、IL-18)和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量,Western blot检测各组细胞中NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体相关蛋白NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、裂解型半胱氨酸蛋白酶1(cleaved caspase-1)和白介素1β(IL-1β)表达及核因子κB(NF-κB)途径中p65的磷酸化水平(p-p65/p65)和BV-2细胞核中p65的表达。结果与Ctrl组相比,LPS/ATP组细胞增殖活力明显降低(P<0.05),但低浓度(10、20、40μmol/L)的α-mangostin可显著改善LPS/ATP对小胶质细胞增殖活力的抑制作用(P<0.05),但高浓度(80μmol/L)α-mangostin可促进LPS/ATP对小胶质细胞的损伤(P<0.05)。与Ctrl组相比,40μmol/Lα-mangostin组小胶质细胞上清液中炎症因子IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-α含量和细胞中NLRP3、ASC、cleaved caspase-1、IL-1β和p-p65/p65比值及细胞核中p65蛋白均无明显改变(P>0.05),而LPS/ATP组均显著增加(P<0.05);与LPS/ATP组相比,不同浓度α-mangostin干预组中IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-α含量和BV-2细胞中NLRP3、ASC、cleaved caspase-1、IL-1β和p-p65/p65比值及细胞核中p65蛋白表达随α-mangostin浓度的增加而依次降低,其中以LPS/ATP+40μmol/Lα-mangostin组的降低程度最为明显(P<0.01)。结论α-mangostin可通过NF-κB途径抑制BV-2细胞中NLRP3炎性小体活化所介导的神经炎症反应。

NF-κB在脂多糖诱导小鼠脓毒症急性肺损伤中对ANXA2表达的影响

目的观察脂多糖(LPS)诱导脓毒症急性肺损伤(ALI)小鼠肺组织中膜联蛋白A2(ANXA2)的表达水平,探讨ANXA2的表达与核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的关系。方法健康雄性C57BL/6小鼠18只,随机分为空白对照组、脂多糖组(LPS组)及LPS+NF-κB抑制剂组(以下为抑制剂组),每组6只。抑制剂组腹腔注射NF-κB信号通路抑制剂吡咯烷二硫代甲酸铵(PDTC)50 mg/kg,1 h后LPS组及抑制剂组腹腔注射LPS 7.5 mg/kg,观察12 h,全身麻醉后采血并处死小鼠。HE染色观察肺组织病理学特征,测右肺中叶湿干重、计算湿/干重比值,ELISA法检测血清ANXA2及左肺肺泡灌洗液中ANXA2、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,免疫组化法检测肺组织ANXA2、NF-κBp65、p-NF-κBp65蛋白平均光密度(MOD)值,RT-qPCR检测肺组织中NF-κBp65、TNF-α及IL-6 mRNA相对表达量,WB检测肺组织ANXA2、NF-κBp65、p-NF-κBp65、Claudin1蛋白表达量。结果与空白对照组比较,LPS组肺组织病理损伤严重,可见细支气管上皮细胞坏死脱落、肺泡间隔增厚、肺泡腔内巨噬细胞和淋巴细胞渗出、少许出血。与空白对照组比较,LPS组右肺中叶湿/干重比值,血清ANXA2及肺泡灌洗液ANXA2、TNF-α水平,肺组织NF-κBp65、TNF-α及IL-6 mRNA相对表达量,肺组织ANXA2、NF-κBp65、p-NF-κBp65蛋白MOD值以及蛋白表达均显著升高(P<0.05),而Claudin1蛋白表达显著下降(P<0.05);与LPS组比较,抑制剂组以上各项观察指标均明显改善(P<0.05)。结论NF-κB信号通路在LPS诱导小鼠脓毒症相关ALI肺组织中可调控ANXA2的表达。

TNF-α/NF-κB信号通路在慢性阻塞性肺疾病中的作用及中医药调控研究进展

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种常见的呼吸系统疾病,发病率和死亡率很高,显著影响着患者的生存质量。临床现有的药物治疗方案因其副作用多、疗效欠佳等原因给患者带来了沉重的身心和经济负担。同时,COPD的具体机制仍不明确,这也给治疗带来了一定的难度。因此,阐明其潜在机制,提出安全、有效的治疗方案,是目前临床治疗COPD亟需解决的问题。大量研究证明,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路在COPD的发生发展中发挥着至关重要的作用;中医药在防治COPD具有多靶点、多成分、副作用低等特点,其中有不少靶向调控TNF-α/NF-κB信号通路的中药复方和中药有效成分。本文综述近几年TNF-α/NF-κB信号通路对COPD的调控作用以及中医药靶向调控TNF-α/NF-κB信号通路防治COPD的研究进展,以期为临床治疗COPD提供一定线索。

麦门冬汤通过调节TLR4-NF-κB通路对大鼠肺纤维化作用机制研究

目的通过博来霉素诱导的大鼠肺纤维化模型,使用麦门冬汤进行干预,观察各组大鼠肺组织病理学情况及各项指标的变化,研究麦门冬汤通过TLR4/NF-κB信号通路对肺纤维化大鼠的干预作用和机制。方法采购SPF级别SD雄性大鼠90只,将其随机分成6组,每组各15只,分别是空白组、模型组、强的松组、麦门冬汤低剂量组、麦门冬汤中剂量组和麦门冬汤高剂量组。干预后14天和28天,分别收集各组大鼠肺组织和血清样本,HE染色和Masson染色观察大鼠肺组织病理学变化,免疫组化法测定大鼠肺组织中Toll样受体4(Toll-like recepter 4,TLR4)、核因子激活的B细胞κ轻链增强(nuclear factor-κB,NF-κB)的表达情况,通过ELISA法测定大鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的水平,实时荧光定量PCR测定大鼠肺组织中细胞角蛋白(Cytokeratin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)、TLR4、NF-κB的mRNA因表达水平。结果建模后14天,对比空白组,模型组HE和Masson染色显示大鼠肺组织病理异常,大鼠肺组织结构明显受损及构架明显紊乱,大量的炎症细胞浸润,肺泡壁增厚,蓝色胶原纤维明显增生,经药物干预后,对比模型组,各治疗组大鼠肺泡炎症及肺纤维化程度有所减轻;建模后28天,对比空白组,模型组HE和Masson染色显示大鼠肺组织结构重度受损以及构架严重紊乱,肺泡几乎被纤维团覆盖,有大量胶原沉积及蓝色胶原纤维增生,经药物干预后,对比模型组,各治疗组大鼠肺组织损伤及纤维化减轻。建模后14、28天,对比空白组,模型组中的TLR4、NF-κB、N-cadherin、TNF-α、IL-6表达水平均升高,Cytokeratin的表达水平降低;治疗后14、28天,对比模型组,强的松组和麦门冬汤各剂量组中的TLR4、NF-κB、N-cadherin、TNF-α、IL-6表达水平均降低,Cytokeratin表达水平升高。结论在博莱霉素诱导大鼠肺纤维化模型中,麦门冬汤能抑制EMT过程,减轻大鼠肺部的炎症,从而改善肺纤维化,推测其机制可能与麦门冬汤通过调节TLR4-NF-κB信号通路有关。

支气管肺泡灌洗液及血清NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α在肺炎诊断中的应用价值

目的探讨支气管肺泡灌洗液(BALF)及血清核转录因子-κB(NF-κB)、Toll样受体2(TLR-2)、Toll样受体4(TLR-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)在肺炎诊断中的应用价值。方法选取2023年1月—2024年3月于吉林大学第二医院就诊的57例肺炎患者纳入研究组,另取同期体检的健康者57例纳入对照组,均采集外周静脉血与肺泡灌洗液,检测NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α水平,采用Pearson相关性分析患者血清及BALF中NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α的相关性。结果研究组患者血清NF-κB(41.74±4.75)μg/L、TLR-2(5.32±1.12)ng/L、TLR-4(6.44±1.61)ng/L、TNF-α(4.36±1.03)ng/L水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组患者BALF中NF-κB(8.19±2.62)μg/L、TLR-2(2.97±0.79)ng/L、TLR-4(4.24±1.18)ng/L、TNF-α(2.04±0.59)ng/L水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,患者血清及BALF中NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α水平呈正相关性(P<0.05)。结论肺炎患者血清及BALF中NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α均呈高表达,联合检测有助于早期诊断及评估病情。

TNF-α调节NF-κB/PXR炎症途径对肺癌细胞生物行为的影响及作用机制

目的分析TNF-α调节NF-κB/PXR炎症途径对肺癌细胞生物行为的影响及作用机制。方法将A549细胞分为对照组和干预组,对照组正常培养不做任何干预处理,干预组使用人TNF-α以10 ng/ml浓度共培养12 h;检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡、细胞侵袭活性;并采用PCR及WB法检测细胞中NF-κB、PXR蛋白和mRNA表达水平。结果在TNF-α干预24 h、48 h和72 h时,干预组细胞检测的吸光度值明显高于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05);采用TNF-α干预24 h后干预组A549细胞的凋亡率明显低于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05);干预24 h后采用TNF-α处理的干预组细胞的S期比例明显高于对照组,而G_(2)+M期和G_(0)+G_(1)期细胞比例明显低于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05);干预24 h后采用TNF-α处理的干预组细胞侵袭数明显高于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05);干预24 h后采用TNF-α处理的干预组NF-κB、PXR蛋白表达水平均明显高于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05);干预24 h后采用TNF-α处理的干预组细胞NF-κB及PXR mRNA表达均明显高于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05)。结论TNF-α可通过调控NF-κB/PXR炎症途径实现对肺癌细胞增殖、凋亡和侵袭的调控。

IL-6对种植体周围炎大鼠牙龈组织中TNF-α表达的影响

目的 探究白细介素(IL-6)对种植体周围炎大鼠牙龈组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的机制。方法 按照随机数字表法将40只大鼠分为假手术组(sham组)、种植体周围炎大鼠模型组(PI组)、种植体周围炎大鼠模型给予IL-6抑制剂Tocilizumab组(Tocilizumab组)、在Tocilizumab组的基础上给予NF-κB/p65激活剂LPS组(LPS组),每组10只。观察种植体周围软组织袋深度(PPD)、探诊出血(BOP)、出血指数(BI)和牙龈指数(GI)。测量种植体周围骨高度和骨密度(Micro-CT法);检测种植体周围牙龈组织炎症浸润(HE染色);RT-PCR检测种植体周围牙龈组织中IL-6、TNF-α mRNA表达;检测牙龈组织中p-p65蛋白表达(蛋白质印迹法)。结果 与sham组比较,PI组大鼠种植体软组织中PPD(近颊、远颊、近舌、远舌)、BOP、BI和GI均明显增加(P<0.05);与PI组比较,Tocilizumab组大鼠种植体软组织中PPD(近颊、远颊、近舌、远舌)、BOP、BI和GI均明显降低(P<0.05);与Tocilizumab组比较,种植体软组织中PPD(近颊、远颊、近舌、远舌)、BOP、BI和GI均明显增加(P<0.05)。与sham组比较,PI组大鼠种植体骨高度、牙槽骨密度明显降低,IL-6、TNF-α mRNA和p-p65蛋白表达增加(P<0.05);与PI组比较,Tocilizumab组大鼠种植体骨高度、牙槽骨密度明显升高,IL-6、TNF-α mRNA和p-p65蛋白表达低于(P<0.05);LPS组大鼠种植体骨高度、牙槽骨密度低于Tocilizumab组,IL-6、TNF-α mRNA和p-p65蛋白表达高于Tocilizumab组(P<0.05)。结论 IL-6抑制剂可通过抑制牙髓组织中NF-κB通路激活,进而抑制种植体周围炎大鼠牙龈组织中TNF-α释放,从而减轻大鼠种植体周围炎发展。

降糖方对糖耐量异常大鼠糖脂代谢及骨骼肌组织IκB-α和NF-κBp65的影响

目的:探讨降糖方对糖耐量异常大鼠糖脂代谢及骨骼肌组织κB抑制蛋白α(IκB-α)、核转录因子肽p65(NF-κBp65)的影响。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、盐酸二甲双胍组、降糖方低、高剂量组,采用高脂饮食喂养4周,链脲佐菌素(STZ)腹膜内注射建立糖耐量异常大鼠模型,治疗8周后,观察骨骼肌组织病理变化,测定空腹血糖(FPG)、血清胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、骨骼肌组织IκB-α mRNA、NF-κBp65 mRNA水平、骨骼肌组织白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-12(IL-12)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白水平。结果:正常组大鼠骨骼肌组织结构正常,模型组骨骼肌排列紊乱、肌纤维断裂、可见明显炎症细胞浸润;盐酸二甲双胍及降糖方干预后,骨骼肌炎症细胞浸润减少,肌纤维排列趋于整齐。模型组大鼠FPG、FINS、HOMA-IR水平、血清TG、TC、LDL-C水平、骨骼肌IκB-α mRNA、NF-κBp65 mRNA和蛋白水平、骨骼肌组织IL-4、IL-12、TNF-α蛋白水平高于对照组(P<0.01);盐酸二甲双胍组、降糖方低、高剂量组大鼠FPG、FINS、HOMA-IR水平,血清TG、TC、LDL-C水平,骨骼肌IκB-α mRNA、NF-κBp65 mRNA和蛋白水平、骨骼肌组织IL-4、IL-12、TNF-α蛋白表达水平低于模型组(P<0.01)。结论:降糖方对糖耐量异常大鼠糖脂代谢具有明显改善作用,其机制可能与降糖方抑制骨骼肌IκB-α mRNA、NF-κBp65 mRNA和蛋白的表达有关。

参附注射液对创伤失血性休克肝损伤大鼠NF-κB、TNF-α表达的影响

[目的]观察大鼠创伤失血性休克肝损伤后核转录因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的情况及不同剂量参附注射液对NF-κB、TNF-α表达的调控作用,探讨参附注射液对创伤失血性休克肝损伤的保护机制。[方法]取100只Wistar雄性大鼠随机分为空白对照组、模型对照组和参附注射液低、中、高剂量组,每组20只。除空白对照组外各组大鼠做双侧股骨骨折合并休克实验制造模型,各组分别于造模后0 h、2 h、4 h、6 h进行药物干预,空白对照组和模型对照组予生理盐水腹腔注射,参附注射液低、中、高剂量组分别以5 ml/kg、10 ml/kg、20 ml/kg剂量腹腔注射给药。实验过程中死亡大鼠立即进行解剖,切取肝脏标本。空白对照组大鼠直接活杀取相应组织及其标本。采用免疫组化法检测各组大鼠肝脏的NF-κB和TNF-α的蛋白表达水平。[结果]大鼠创伤失血性休克后NF-κB和TNF-α在肝组织中迅速表达,伤后6 h左右达到含量的高峰,伤后8 h仍持续在相当高的水平。与空白对照组比较,模型对照组及参附注射液低、中、高剂量组不同时间点(0.5 h、2 h、4 h、6 h、8 h)肝组织NF-κB、TNF-α表达水平均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型对照组比较,参附注射液低、中、高剂量组不同时间点肝组织NF-κB、TNF-α表达水平均有不同程度下降,差异有统计学意义(P<0.05);参附注射液低、中、高剂量组比较,不同时间点肝组织NF-κB、TNF-α的下降水平与剂量呈正相关关系,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]参附注射液通过抑制NF-κB和TNF-α的表达而减少创伤失血性休克的损伤,降低死亡率,进而发挥对肝脏的保护作用。

水飞蓟素通过共同抑制TLR4/NF-κB和TNF-α/ROS/P38MAPK通路减轻糖尿病肾病大鼠肾脏损伤的研究

目的:探讨水飞蓟素通过共同抑制Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)和肿瘤坏死因子α/活性氧簇/P38丝裂原活化蛋白激酶(TNF-α/ROS/P38MAPK)通路减轻糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏损伤的机制。方法:选取健康SD大鼠50只,按随机数字表法分为对照组、模型组、低剂量水飞蓟素组、中剂量水飞蓟素组、高剂量水飞蓟素组,每组10只。建模成功并治疗8周后,生化分析仪测定各组大鼠空腹血糖(FBG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、胱抑素C(Cys-C)、β_(2)微球蛋白(β_(2)-MG)、24 h尿蛋白(UTP)水平;计算肾脏指数;试剂盒检测各组大鼠肾组织丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)水平;RT-PCR检测各组大鼠TLR4,NF-κB,TNF-α和P38MAPK等mRNA的表达水平。结果:与对照组相比,模型组体质量、T-AOC均降低(P<0.05),肾脏指数和FBG,Scr,BUN,Hcy,Cys-C,β_(2)-MG,24 h UTP,MDA,TLR4 mRNA,NF-κB p65 mRNA,TNF-αmRNA,P38MAPK mRNA均升高(P<0.05)。低、中、高剂量水飞蓟素组体质量、T-AOC水平均低于对照组,且均高于模型组(P<0.05);低、中、高剂量水飞蓟素组肾脏指数和FBG,Hcy,Cys-C,β_(2)-MG,24 h UTP,MDA,TLR4 mRNA,NF-κB p65 mRNA,TNF-αmRNA,P38MAPK mRNA均高于对照组,且均低于模型组(P<0.05);低、中剂量水飞蓟素组Scr,BUN水平均高于对照组,且低于模型组(P<0.05);高剂量水飞蓟素组Scr,BUN水平均低于模型组(P<0.05),高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:水飞蓟素可调控TLR4/NF-κB和TNF-α/ROS/P38MAPK通路,可通过抑制其激活减轻氧化应激、减轻DN大鼠的肾脏损伤。

小檗碱激活AMPK/NF-κB/TNF-α信号通路对肾病综合征大鼠肾损伤的影响

目的:从5’-单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/核转录因子-κB(NF-κB)/肿瘤坏死因子-α(TNF-α)信号通路,探究小檗碱改善肾病综合征(NS)大鼠肾损伤的可能机制。方法:尾静脉注射阿霉素建立NS大鼠模型,随机分为模型组、小檗碱治疗组、激素治疗组、AMPK抑制剂组、小檗碱+AMPK抑制剂组,每组15只,另取15只对照组大鼠。各组连续给药治疗5周后,收集尿液检测24 h尿蛋白;取动脉血检测血浆白蛋白、血脂水平;PAS染色观察肾组织形态变化;Western blot法检测肾组织AMPK、p-AMPK、NF-κB、p-NF-κB、TNF-α、白细胞介素-6(IL-6)、脂肪酸移位酶(FAT/CD36)、P糖蛋白(P-gp)表达水平。结果:与对照组相比,模型组大鼠肾小球血管袢与球囊壁黏连、肾小管管腔狭窄、肾小管上皮细胞水肿、坏死及空泡化等病理损伤严重,24 h尿蛋白、血脂水平升高,血浆白蛋白含量、AMPK活性、与AMPK有关的炎性反应蛋白及促脂质吸收相关蛋白表达降低(P<0.05)。小檗碱治疗或激素治疗,均可改善NS大鼠肾脏损伤,降低24 h尿蛋白、血脂水平,升高血浆中白蛋白含量,促进AMPK活化,发挥抗炎及改善脂质代谢作用(P<0.05),激素治疗组可引起P-gp表达升高,且其对NS大鼠的治疗效果弱于小檗碱治疗组(P<0.05)。AMPK抑制剂可加重NS大鼠肾损伤,并削弱小檗碱促进AMPK活化、改善NS大鼠肾损伤等作用(P<0.05)。结论:小檗碱可通过促进AMPK活化,改善NS大鼠糖脂代谢、抑制NF-κB/TNF-α炎症通路,发挥肾保护作用。

人参皂苷Rd通过下调NF-κB信号改善小鼠动脉粥样硬化炎症反应

目的探究人参皂苷Rd在ApoE-/-小鼠中抗动脉粥样硬化(AS)的潜在机制。方法将ApoE-/-小鼠随机分为6组(n=8):对照组、模型组、阿托伐他汀钙(ATV)组、人参皂苷Rd治疗组(5 mg/kg、10 mg/kg和20 mg/kg)。给小鼠喂食西式饮食6周,然后同时给予人参皂苷Rd治疗6周。采集血样进行脂质分析、炎症因子水平检测和氧化应激水平检测。采集胸主动脉,分别进行苏木素-伊红(HE)和油红O染色,Western印迹检测蛋白表达。结果人参皂苷Rd显著抑制了AS病变的发展和脂质积累,显著降低总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,显著升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平。人参皂苷Rd下调促炎标志物的表达,如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β。此外,人参皂苷Rd处理降低了丙二醛(MDA)活性并增强了超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。人参皂苷Rd处理也显著抑制诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)蛋白的表达,并抑制核因子-κB(NF-κB)通路的异常激活。结论人参皂苷Rd通过抑制NF-κB通路激活对AS发挥抗炎和抗氧化作用。

绞股蓝总苷对急性期缺血性脑卒中小鼠NF-κB及TNF-α表达的影响

目的探讨绞股蓝总苷对急性期缺血性脑卒中小鼠核因子-κB(NF-κB)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法将24只健康雄性C57小鼠随机分为假手术组、缺血性脑卒中组、绞股蓝总苷低剂量组、绞股蓝总苷高剂量组,每组6只。除假手术组外,其余组小鼠采用Longa线栓法阻塞大脑中动脉建立缺血性脑卒中模型。术后2 h,绞股蓝总苷低、高剂量组分别给予绞股蓝总苷100 mg/kg、200 mg/kg腹腔注射,假手术组和缺血性脑卒中组均给予等量生理盐水腹腔注射。术后24 h对各组小鼠进行神经功能缺损评分,使用TTC染色测定各组小鼠脑梗死体积,分别使用Western blot法和qRT-PCR法检测手术组、缺血性脑卒中组、绞股蓝总苷高剂量组小鼠脑组织中NF-κB、TNF-α蛋白及mRNA表达情况。结果绞股蓝总苷低剂量组小鼠的神经功能缺损评分与缺血性脑卒中组比较差异无统计学意义(P>0.05),脑梗死体积占比明显低于缺血性脑卒中组(P<0.05);绞股蓝总苷高剂量组小鼠的神经功能缺损评分和脑梗死体积占比均明显低于缺血性脑卒中组和绞股蓝总苷低剂量组(P均<0.05)。缺血性脑卒中组小鼠脑组织中NF-κB、TNF-α蛋白及mRNA表达量均明显高于假手术组(P均<0.05),绞股蓝总苷高剂量组小鼠脑组织中NF-κB、TNF-α蛋白及mRNA表达量均明显低于缺血性脑卒中组(P均<0.05)。结论在缺血性脑卒中急性期,绞股蓝总苷可通过下调NF-κB、TNF-α表达,减轻炎症反应,减小脑梗死体积,保护脑组织。

人参属6种药材的抗炎作用及其对NF-κB信号通路的影响

【目的】比较6种不同人参属药材提取物的体内外抗炎活性差异,并探讨其抗炎活性机制。【方法】采用CCK-8法检测RAW264.7细胞活力,Griess法检测NO释放,ELISA法检测细胞分泌炎症因子情况,Western blot法检测NF-κB信号通路中关键蛋白表达情况。采用二甲苯所致小鼠耳肿胀模型,检测耳肿胀度及HE染色的病理切片情况。【结果】在给药浓度为0.02、0.20 mg/mL时,6种人参属药材提取物对RAW264.7细胞活力无显著抑制作用(P>0.05)。6种人参属药材提取物在0.2 mg/mL浓度下均显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞上清液中NO含量的升高(P<0.05或P<0.01或P<0.001),其中屏边三七抑制作用最强。与LPS组相比,6种人参属药材提取物均显著降低细胞分泌的TNF-α含量(P<0.01或P<0.001)。屏边三七组和竹节参组均显著逆转LPS诱导的细胞中p-NF-κB、IκBα蛋白表达量的升高;而珠子参组和竹节参组均显著抑制NF-κB蛋白表达。此外,6种人参属药材提取物对二甲苯所致小鼠耳肿胀具有剂量依赖性抑制作用,其中屏边三七组、三七组、西洋参组及竹节参组对小鼠耳肿胀的抑制率分别为91.11%、68.89%、82.22%、64.44%。小鼠耳组织HE染色结果表明,模型组小鼠耳组织出现明显结缔组织水肿,间隙增加及炎性细胞浸润。6种人参属药材提取物组与模型组相比水肿反应和炎性细胞浸润减少,其中屏边三七改善效果最好。【结论】6种人参属药材具有体内外抗炎作用,且活性存在差异,其机制作用可能与调节NF-κB信号通路相关。

基于NF-κB/TNF-α/IL-6通路探讨拟黑多刺蚁活性组分对脂多糖诱导抑郁小鼠神经炎症的影响

目的:探讨拟黑多刺蚁活性组分对脂多糖(LPS)所诱导抑郁小鼠神经炎症的影响及其可能的作用机制。方法:将60只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、模型组、氟西汀(20 mg/kg)阳性对照组及拟黑多刺蚁活性组分高(8 g/kg)、中(4 g/kg)、低(2 g/kg)剂量组,连续给药10 d,第11、12天采用LPS(1 mg/kg)腹腔注射诱导小鼠抑郁模型。对小鼠进行行为学实验(强迫游泳实验、悬尾实验),ELISA法检测小鼠血清神经递质和炎症因子,HE、Tunel染色观察小鼠脑组织病理损伤和凋亡情况,Real-time PCR检测小鼠脑组织中IL-6 mRNA表达,Western Blot检测小鼠脑组织中NF-κB/TNF-α/IL-6通路相关蛋白表达。将RAW264.7细胞分为空白对照组、模型组及拟黑多刺蚁活性组分高(2 mg/mL)、中(1 mg/mL)、低(0.5 mg/mL)浓度组,加入脂多糖(1μg/mL)造模,Western Blot检测各组细胞中NF-κB/TNF-α/IL-6通路相关蛋白表达。结果:动物实验中,与正常对照组比较,模型组小鼠的游泳不动时间、悬尾不动时间、血清TNF-α水平及脑组织IL-6 mRNA和p-NF-κB、IL-6、TNF-α蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01),脑组织病理变化明显,脑组织神经元凋亡增加。与模型组比较,除拟黑多刺蚁活性组分低剂量组小鼠血清TNF-α水平及中剂量组小鼠血清TNF-α、DA、BDNF水平差异无统计学意义(P>0.05)外,拟黑多刺蚁活性组分各组小鼠游泳不动时间、悬尾不动时间、血清TNF-α水平、脑组织IL-6 mRNA表达及脑组织IL-6、TNF-α、p-NF-κB蛋白表达显著降低,血清5-HT、DA、BDNF水平显著升高(P<0.05或P<0.01),脑组织病理学明显改善,脑组织神经元凋亡明显减少。体外实验中,与空白对照组比较,模型组RAW264.7细胞IL-6、TNF-α、p-NF-κB蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01),与模型组比较,拟黑多刺蚁活性组分各组RAW264.7细胞TNF-α、p-NF-κB蛋白表达显著降低,高浓度组IL-6蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:拟黑多刺蚁活性组分可通过抑制NF-κB/TNF-α/IL-6通路的激活,改善小鼠抑郁症神经炎症。

舒肝和络醒脾方对肝纤维化模型大鼠TNF-α/NF-κB信号通路的影响

目的:观察舒肝和络醒脾方对肝纤维化模型大鼠TNF-α/NF-κB信号通路以及炎症因子的影响,探讨舒肝和络醒脾方干预肝纤维化进程的相关机制。方法:将雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组,模型组,阳性对照组,舒肝和络醒脾方高、中、低剂量组共6组,每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠均采用腹腔注射40%CCl4油溶液方式诱导肝纤维化模型,注射同时采用相应药物进行灌胃治疗,8周后取大鼠肝脏与血液标本。造模期间观察记录各组大鼠一般情况;HE染色与Masson染色观察大鼠肝组织病理形态学变化;免疫组织化学法检测肝组织α-SMA表达水平;双抗体夹心ELISA法检测大鼠血清IL-1β、TNF-α炎症因子水平;RT-q PCR法检测TNF-α、NF-κB p65的m RNA表达水平;Western blot技术检测TNF-α、NF-κB p65的蛋白表达水平。结果:同模型组比较,大鼠经药物干预后一般状况均改善;肝脏病理形态明显改善(P<0.05);α-SMA表达水平明显下降(P<0.05);炎症因子IL-1β与TNF-α表达水平明显下降(P<0.05);TNF-α、NF-κB p65的m RNA水平和蛋白表达均明显下降(P<0.05)。其中舒肝和络醒脾方高剂量组效果较为显著且稳定,和阳性对照组疗效趋同。结论:舒肝和络醒脾方可延缓由CCl4诱导的肝纤维化进程,其作用机制可能与TNF-α/NF-κB信号通路有关。

针刺联合壮医药线点灸治疗膝骨关节炎的疗效观察及对NF-κB/IκB信号通路的影响

目的 观察针刺联合壮医药线点灸治疗寒湿痹阻型膝骨关节炎(knee osteoarthritis, KOA)的临床疗效及对核转录因子-κB(nuclear factor-κB, NF-κB)及其抑制因子IκB信号通路的影响。方法 将87例寒湿痹阻型KOA患者随机均分为观察组(44例)和对照组(43例)。对照组采用针刺治疗,观察组在对照组基础上采用壮医药线点灸疗法。观察两组治疗前后中医证候积分、视觉模拟量表(visual analog scale, VAS)评分、西安大略麦克马斯特大学骨关节炎指数(Western Ontario and McMaster University osteoarthritis index, WOMAC)评分、血清和关节液NF-κB p65和IκBα表达水平及白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)水平,并比较两组临床疗效。结果 两组临床疗效比较,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组愈显率为62.8%,高于对照组的39.0%(P<0.05)。两组治疗后冷痛重着、关节肿胀、屈伸不利、大便溏薄评分以及总分均显著降低(P<0.05),且观察组各症状评分和总分低于对照组(P<0.05)。两组治疗后VAS和WOMAC评分均降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05)。两组治疗后关节液NF-κB p65表达水平显著降低(P<0.05),IκBα表达水平显著升高(P<0.05);且观察组关节液NF-κB p65水平显著低于对照组(P<0.05),IκBα水平显著高于对照组(P<0.05)。两组治疗后血清和关节液IL-1β、TNF-α水平均显著降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05)。两组治疗前后血清NF-κB p65表达水平低于关节液,IκBα表达水平高于关节液,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗前后血清IL-1β、TNF-α水平与关节液比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 针刺联合壮医药线点灸治疗寒湿痹阻型KOA有利于缓解患者疼痛等症状,提升临床效果,其机制与抑制NF-κB/IκB信号通路和改善炎症反应有关。