猪圆环病毒2型灭活疫苗佐剂选择

用水包油佐剂Merckinade SDA 25、HS1010和双向佐剂Montanide ISA 206三种不同佐剂分别制成猪圆环病毒2型灭活疫苗,对三种疫苗的稳定性、黏度、免疫仔猪后的安全性及效力进行了比较。试验结果表明,以3000 r/min离心15 min,三种疫苗均无水析出;三种疫苗的黏度均低于200 cP;三种疫苗按2.0 mL/头的剂量接种21日龄健康易感猪,试验猪体温、采食、饮水、精神状况均正常,均无不良临床反应,剖检后各脏器均无病理变化;加强免疫后21d,各组试验猪采血,检测猪圆环病毒2型抗体效价,结果表明,佐剂MontanideISA206相较MerckinadeSDA25可诱导更高水平抗体效价。攻毒试验结果表明免疫组可以得到100%的保护。根据以上试验结果,确定猪圆环病毒2型灭活疫苗使用Montanide ISA 206。

猪圆环病毒2型灭活疫苗及其亚单位疫苗对PCV2d流行毒株攻毒保护试验

为了评价商品化猪圆环病毒2型(PCV2)全病毒灭活疫苗与PCV2-Cap亚单位疫苗对PCV2d亚型流行毒株的保护情况。选用5周龄PCV2抗原和抗体均为阴性仔猪15头,随机分成3组,每组5头,其中两组分别进行PCV2全病毒灭活疫苗和PCV2-Cap亚单位疫苗免疫,首次免疫1mL,间隔21d以相同剂量和途径重复免疫1mL。二次免疫14d采血分离血清,采用IPMA法检测抗体,PCV2全病毒灭活疫苗于免疫第2周抗体转阳,第5周抗体效价达到均不低于800倍,其中PCV2-Cap重组亚单位病毒样颗粒疫苗免疫组试验猪抗体效价为最高,可达到1:3200。以PCV2d流行毒株进行攻毒,免疫组试验猪的相对增重率显著高于对照组,病理组织学观察显示,免疫组试验猪均未见明显的病理变化,攻毒对照试验猪腹股沟淋巴结出现一定程度的病理损伤。PCV2全病毒灭活疫苗与PCV2-Cap亚单位疫苗均可获得完全保护。

猪瘟兔化弱毒疫苗与猪圆环病毒2型灭活疫苗同时接种的免疫效果评价

为评价猪瘟兔化弱毒疫苗和猪圆环病毒2型(PCV2)灭活疫苗同时免疫效果,本实验采用猪瘟活疫苗(细胞源)和PCV2灭活疫苗(LG株)两种疫苗同时分点注射和混合注射35日龄仔猪,于免疫后间隔3周、5周、7周、9周采血,通过猪瘟病毒(CSFV)抗体检测试剂盒和PCV2抗体检测试剂盒进行CSFV和PCV2特异性抗体检测。结果显示,无论是两种疫苗同时颈部两侧分点分别注射,还是用PCV2灭活疫苗稀释CSFV活疫苗后混合免疫,免疫后3周CSFV和PCV2抗体均呈阳性,CSFV抗体滴度和PCV2抗体滴度于7周和9周达到峰值,与各疫苗单独免疫对照组抗体产生时间和滴度无明显差异。实验表明,两种疫苗可以同时注射或采用PCV2灭活疫苗稀释CSFV活疫苗进行免疫,均不影响各自免疫抗体的产生。因此,可以将PCV2灭活疫苗作为CSFV活疫苗的稀释剂,采用一次性注射的形式同时接种这两种疫苗,为简化这两种病临床疫苗免疫注射方面提供了实验依据。

猪圆环病毒2型灭活疫苗安全性及免疫效力的评价

为了对制备的猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)灭活疫苗进行安全性及免疫效力的评价,本试验将3批次猪圆环病毒2型灭活疫苗以2倍剂量接种PCV2阴性仔猪后,进行了安全性分析抗体检测和攻毒试验。结果显示:3批次疫苗以2倍剂量接种仔猪后,仔猪均无异常临床反应,可达到1∶1600以上,而攻毒对照组及空白对照组仔猪的抗体水平均在1∶400以下;攻毒后免疫组可以达到100%保护,攻毒对照组出现100%发病。结果表明,所制备的猪圆环病毒2型灭活疫苗对仔猪不仅安全性好,而且可以为仔猪提供有效的保护,为疫苗推广奠定了重要基础。

猪圆环病毒2型灭活疫苗的制备与免疫效力研究

猪圆环病毒2型(PCV2)经0.2%甲醛37℃作用一定时间后接种PK-15细胞,盲传3代,用PCR方法检测灭活效果。将灭活的PCV2加入适量的白油和氢氧化铝胶制成PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗,免疫小鼠,共免疫2次,时间间隔为3周,分别于一免后第21天和二免后第14天进行ELISA抗体检测。同时为了评价国产油佐剂和进口油佐剂的免疫效果,笔者进行了猪体免疫效力试验。通过ELISA抗体、攻毒后临床表现及体温变化、剖解时的病理变化、平均日增重及病毒血症等指标对疫苗免疫效果进行评价。结果如下:①PCV2能被0.2%甲醛完全灭活,灭活时间为16 h。②PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗免疫小鼠后均能产生较好的免疫应答,并且油佐剂灭活疫苗免疫效果好于铝胶佐剂灭活疫苗。③猪体免疫效力试验表明,两种油苗均能产生较高水平的ELISA抗体。攻毒后,攻毒对照猪的体温高于免疫猪,空白对照猪体温正常。免疫猪及空白对照猪平均体重均升高,而攻毒对照猪平均体重有所降低,且两个免疫组和空白对照组之间平均日增重差异显著(P<0.05)。病毒血症检测及病毒DNA在组织中的分布检测表明两油苗均能够有效降低猪体的带毒。以上结果表明,PCV2灭活疫苗免疫小鼠和猪体后均能诱导机体产生免疫应答,并能够在一定程度上抵抗PCV2对猪体的感染。

猪圆环病毒2型灭活疫苗免疫佐剂的比较试验

以猪圆环病毒2型(PCV2)遗传标记毒株为毒种,经细胞培养传代,优化了病毒增殖条件,获得较高滴度的病毒培养物用于PCV2灭活疫苗的研制。为了比较不同免疫佐剂的效果,本试验对国产矿物质白油和铝胶两种佐剂以及赛比克公司提供的MONTANIDETMISA206、ISA15VG、IMS1315VG3种佐剂配制的灭活疫苗进行了猪体免疫试验。通过临床观察、血清抗体效价测定,确认ISA15VG佐剂配制的疫苗在增强免疫效果方面优于其它佐剂。按5种佐剂免疫效果排序为ISA15VG、IMS1315VG、铝胶、ISA206、国产白油。ISA15VG佐剂属于水包油剂型,可刺激接种动物产生快速免疫应答反应,抗体产生效价高、持续时间长,有可能成为新型PCV2灭活疫苗佐剂的候选。

猪圆环病毒2型灭活疫苗最小免疫保护剂量研究

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,疫苗是防制该病的主要手段。为研究PCV2灭活疫苗的免疫效果,本研究将PCV2 SH株灭活,用生理盐水稀释成5×105.0TCID50/mL(高剂量)、2.5×105.0 TCID50/mL(中等剂量)、1.25×105.0 TCID50/mL(低剂量)、6.3×104.0 TCID50/mL(超低剂量)4种剂量,与等量白油佐剂乳化后,通过断乳仔猪的免疫攻毒试验观察该灭活疫苗的免疫特性。结果表明,PCV2疫苗抗原含量大于1.25×105.0 TCID50/mL时免疫仔猪后均可以产生特异性抗体,能够明显减轻攻毒后仔猪的临床症状、缓解组织病变、降低病毒血症,对免疫猪有一定的保护效果,可以作为预防PCV2感染的疫苗使用。本研究为研制商品化的PCV2灭活疫苗提供实验依据。

猪圆环病毒2型灭活疫苗(LG株)的研制与应用

猪圆环病毒2型（PCV2）感染引起的以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病,临床上表现有断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾炎综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍、坏死性淋巴结炎、肉芽肿性肠炎和渗出性表皮炎等症状,统称为猪圆环病毒病。

猪圆环病毒2型灭活疫苗免疫效果试验

本试验将10窝同期出生的共105头仔猪,随机分为试验组和对照组,试验组于14日龄、45日龄分别进行猪圆环病毒2型灭活疫苗免疫,对照组不免疫。通过临床跟踪观测和定期采血进行猪圆环病毒2型ELISA抗体和PCR病毒核酸检测。结果表明,临床免疫猪群成活率及生长指标明显好于不免疫猪群;试验组及对照组病毒核酸阳性检出率和抗体阳性率差异不显著,且可同时检出圆环病毒核酸及抗体。

猪圆环病毒2型灭活疫苗免疫试验

采用勃林格殷格翰动物保健公司生产的猪圆环病毒2型杆状病毒载体灭活疫苗,在光明农牧科技有限公司3个畜牧场分别进行免疫核心试验。结果显示,相比对照组,实验组猪成活率、日增重、整齐度等都有较大的改善,投入产出经济效益较好。

猪圆环病毒2型灭活疫苗细菌内毒素凝胶法的检测

为建立猪圆环病毒2型灭活疫苗(WH株)细菌内毒素检测方法,监测疫苗样品中的内毒素含量。本研究分别使用湛江安度斯和厦门生物的鲎试剂采用凝胶法对猪圆环病毒2型灭活疫苗(WH株)进行细菌内毒素检测。结果显示,当供试品稀释至40倍或以上稀释度(最大有效稀释倍数范围内)时对内毒素检查均无干扰。湛江安度斯鲎试剂和厦门生物鲎试剂对7批猪圆环病毒2型灭活疫苗(WH株)的细菌内毒素检测浓度均小于10 EU/ml。该结果表明采用凝胶法可对猪圆环病毒2型灭活疫苗(WH株)进行细菌内毒素检测。

猪圆环病毒2型灭活疫苗免疫效果试验

猪圆环病毒病（Porcineeircovirusdiseases，PCVDs）是由猪圆环病毒2型（Porcinecircovirustype2，PCV2）引发的一种猪传染性疾病。一旦PCV2感染猪后具有免疫抑制特性，能够干扰其它疫苗的免疫效果。近几年我国猪场的PC耽感染已相当普遍，个别猪场猪圆环病毒2型抗体阳性率可达100％。防控PCV2主要有效的手段是接种圆环病毒病疫苗。当前我国市场上有多种类型的圆环病毒病疫苗，猪群免疫后免疫效果参差不齐；为了评估上海佳牧生物制品有限公司研制的圆环病毒2型灭活疫苗免疫效果，现进行以下试验：

中国首个“猪圆环病毒2型灭活疫苗”获准上市

由洛阳普莱柯生物工程有限公司（以下简称＂普莱柯公司＂）研制的＂猪圆环病毒2型灭活疫苗＂于2010年8月27日获得中华人民共和国新兽药注册证书【证号：（2010）新兽药证字25号】（《中华人民共和国农业部公告第1448号》颁布）,并获得农业部批准独家上市。

猪圆环病毒2型灭活疫苗种毒株的筛选

为筛选满足猪圆环病毒2型灭活疫苗制苗要求的毒株,选择河南省8个地区的8株猪圆环病毒2型分离株进行抗原性分析,将各分离株培养后用不同滴度的病毒原液和其分别稀释至同一滴度(4.233×104拷贝/μL)的病毒液分别制成油佐剂灭活疫苗,免疫小鼠后采血测定其抗体动态水平,以进行免疫效力评价。结果显示,8株圆环病毒2型分离株中8#和12#分离株原液制备的疫苗免疫后诱导产生的抗体水平较高,二免后1周抗体水平即高于1∶800,达到猪圆环病毒2型灭活疫苗的国家质量标准要求,3周时达到高峰,比对照商品疫苗诱导产生的抗体水平更高;其分别稀释130倍和463倍后制备的疫苗诱导产生的抗体水平在二免后3周也能达到1∶800。提示,猪圆环病毒2型8#和12#分离株毒价高,免疫效力良好,是理想的疫苗候选株。本研究丰富了猪圆环病毒2型灭活疫苗毒株的种毒资源,为研制高质量的猪圆环病毒2型疫苗奠定了基础。

不同乳化工艺对猪圆环病毒2型灭活疫苗稳定性的影响

为探讨乳化工艺中影响猪圆环病毒2型油包水剂型灭活疫苗的稳定性因素,以提升猪圆环病毒疫苗的质量,分别对圆环病毒抗原pH值、乳化剪切机转数、乳化时间进行筛选,并以疫苗黏度、粒径、保存温度评价疫苗稳定性。结果表明,抗原pH值为7.0~7.5时疫苗稳定性较好;剪切机转数越高,乳化时间越短,乳化效果越好,样品稳定性较高;在一定的时间内样品随乳化时间的延长,样品稳定性增强,但黏度不断增大。在本试验条件下,选择抗原pH值7.0~7.5,剪切机转数19 000r/min,乳化时间8min乳化的样品稳定性好,黏度合适,建议不同厂家在疫苗产业化生产时需调节抗原pH值至7.0~7.5,根据不同的乳化设备进行乳化试验摸索乳化剪机的转速及乳化时间,从而保证疫苗的稳定性。

猪圆环病毒2型灭活疫苗(ZJ/C株)免疫效果研究

为研究猪圆环病毒2型灭活疫苗(ZJ/C株)在规模猪场的临床使用效果,选取300头14日龄仔猪,平均分为2组,免疫组于14日龄每头肌肉注射圆环病毒2型灭活苗2 mL,对照组每头注射生理盐水2 mL,于免疫前后不同时间点采集7次血样检测各阶段圆环病毒2型抗体,并记录2组在保育及肥育阶段的生长指标。结果显示,免疫后第7天,免疫组抗体阳性率明显升高,免疫后第14天免疫组抗体阳性率已达97%。与对照组相比,免疫组猪在保育阶段日增重提高16 g、料重比降低0.08、成活率提高5.4个百分点;在肥育阶段,日增重提高32 g、料重比降低0.07、呼吸道病发病率下降16.5个百分点、成活率提高3.7个百分点。结果表明,试验猪免疫猪圆环病毒2型灭活疫苗(ZJ/C株)可预防圆环病毒对猪体的危害,提高猪群整体健康度及成活率、饲料转化率和平均日增重。

猪圆环病毒2型灭活疫苗SH株免疫仔猪的田间效力评估试验

本试验选择有猪圆环病毒2型感染,而且已经表现断奶仔猪消耗综合征(PMWS)临床症状的商品猪场(600头母猪)进行试验猪圆环病毒2型(SH株)灭活疫苗的相关研究,以评价猪圆环病毒2型灭活疫苗对仔猪存活率、日增重、病毒血症控制、免疫副反应等指标的变化。试验结果表明:(1)免疫后,免疫组仔猪3周龄断奶时的存活率为91.8%,高于对照组的78.57%;4周龄存活率为98.65%,也高于对照组的90.91%;(2)免疫组在疫苗免疫后1 d体温略有升高,高于对照组,但在第2天后逐步恢复正常;(3)免疫组平均增重为0.2241 kg/头·日;对照组只有0.2052 kg/头·日。免疫组要比对照组多增重0.0189kg/头·日;(4)免疫后免疫组抗体水平转阳率比对照组要高、转阳时间比对照组要早,而且第二次加强免疫后抗体转阳率更高,在49 d全部转阳;并且免疫组离散度小于对照组;(5)免疫疫苗后仔猪群病毒血症阳性率会明显下降,随后与对照组一样,逐步回升,但是,相同日龄的病毒血症阳性率明显低于对照组。上述结果表明,接种猪圆环病毒2型灭活疫苗SH株有助于提高仔猪存活率,提高ADG,改善仔猪生产水平。

猪圆环病毒2型灭活疫苗效力检验中参考疫苗的应用

制备了4批不同抗原含量的猪圆环病毒2型(PCV2)灭活疫苗,灭活前PCV2病毒含量分别为107.0、106.5、105.5和104.5TCID50/mL。对此4批PCV2灭活疫苗,利用本实验室建立的小白鼠效力检验标准进行效力检验,即以PCV2参考疫苗作为对照品,测定待检疫苗免疫小白鼠后血清中PCV2抗体效价的高低来判定疫苗效力。3次重复检测结果都显示灭活前病毒含量为107.0、106.5和105.5TCID50/mL批次的疫苗合格,而灭活前病毒含量为104.5TCID50/mL批次的疫苗不合格,这与猪体内的效力检验结果一致,表明建立的针对猪圆环病毒2型灭活疫苗的小白鼠效力检验方法具有良好的准确性和重复性。

猪圆环病毒2型灭活疫苗生产关键技术

猪圆环病毒2型（PCV-2）在我国乃至全世界猪群中广泛传播,是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征的主要病原,PCV-2能造成仔猪生长缓慢,饲料报酬降低,同时侵害猪的免疫系统,导致机体免疫力下降,引起其他疫病的暴发,是近年来危害养猪业的主要免疫抑制病之一[1].我国自2000年首次报道猪群中存在PCV-2感染[2],之后在全国各地陆续有报道,呈逐渐蔓延趋势.近年来,PCV-2的发生和流行,给我国养猪业造成了巨大的经济损失.

国家三类新兽药：猪圆环病毒2型灭活疫苗（WH株）

猪圆环病毒2型（PCV2）感染可以引起仔猪断奶后多系统衰竭综合症（PMWS），此病主要发生于6～15周龄的断奶仔猪，发病率和死亡率常为4％-30％和50％-90％。此外，猪圆环病毒2型感染也可以导致猪皮炎与肾病综合症、母猪繁殖障碍、仔猪先天性震颤等。