2012年-2022年TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA在云南主要烟区的发生与分布

烟草丛顶病(tobacco bushy top disease,TBTD)是一种由烟草丛顶病毒(tobacco bushy top virus,TBTV)及其卫星RNA(tobacco bushy top virus satellite RNA,TBTVsatRNA)和烟草扭脉病毒(tobacco vein distorting virus,TVDV)及其伴随RNA(tobacco vein distorting virus associated RNA,TVDVaRNA)共同侵染引起的危险性病害,曾在云南很多烟区造成严重损失。本研究对烟草丛顶病及其相关病原物在云南烟草上的发生情况进行了多年的调查研究,力图对烟草丛顶病及其相关病原物的发生与分布进行追踪和分析。结果表明,2012年-2022年,烟草丛顶病在云南各大烟区仅零星发生,2019年以来已很难发现。烟草丛顶病的相关病原物主要在曾经暴发流行过病害的楚雄、保山和大理发现,且TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA在烟草上并不总是同时被检出,其中引起烟草丛顶病典型症状的TBTV+TVDV+TBTVsatRNA+TVDVaRNA检出率在5%以下,TVDV的检出率最高,达30.44%,TBTVsatRNA的检出率最低,为7.68%。TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA不能同时感染同一烟株可能是当前烟草丛顶病很少发生的主要原因。

烟草扭脉病毒云南分离物rtp基因克隆及序列分析

探究来自云南不同时间和不同地区的烟草扭脉病毒(TVDV)各分离物间rtp基因序列差异,分析烟草丛顶病近年在田间发生趋势减缓的原因.以2020—2022年从云南楚雄、大理、保山及红河采集的染病烟草样品为材料,对TVDV的rtp基因进行扩增和序列分析,共得到TVDV 7个不同分离物的rtp基因序列,长度均为2172 nt,包含618 nt的cp基因及1554 nt的rtd区;推导的TVDVRTP蛋白共编码722个氨基酸,其中包含CP蛋白的205个氨基酸,RTD的517个氨基酸.多重序列比对结果发现,获得的7个TVDV分离物与GenBank上登录的其他TVDV分离物间cp基因核苷酸序列一致性为98.71%~100%,不同TVDV分离物间CP蛋白的氨基酸序列一致性为98.05%~100%,存在4个氨基酸的差异.获得的7个TVDV分离物与GenBank数据库登录的其他TVDV分离物间rtd区核苷酸序列一致性为96.68%~99.81%,RTD蛋白的氨基酸序列一致性为96.52%~100%,存在39个氨基酸的差异.这些TVDV分离物rtp基因的变异可能会对TVDV的蚜虫传播效率产生影响,进而影响到烟草丛顶病在田间的发生与流行.

壶关方言断言性话语标记“不是说嘞”研究

壶关方言中,“不是说嘞”属于断言类话语标记。在会话中,“不是说嘞”只能够出现在回应序列的开始或中间位置;在功能上,其具有断定、称赞、自我肯定、贬斥、示诚的功能;在地域分布上,河南省是“不是说嘞”的集中分布地区,而由于方言接触的影响,其他与河南省毗邻的地区也有分布。将“不是说嘞”与西南官话中的“不是说”进行对比,发现“不是说嘞”断言义的浮现是受其递进语用模式的影响而产生的,其表达的语义为“不(仅仅)是说Z,而是事实上就是Z”。

Wode Qingchun Bushi Feizaopao

雨狠狠地抽打在我滚烫的脸上，立刻化作泪水流了下来。忽然发现，原来我们的感情太简单，简单到一张字条就能分开；原来，我们的感情太脆弱，脆弱得像肥皂泡一碰就破；原来，我们的感情太缥缈，就像飘飞的浮云一样抓也抓不住。

云南省烟草丛顶病发生规律及其综合防治

烟草丛顶病在云南西部烟区暴发流行,给烟叶生产带来严重损失,是烟草最主要的病害之一.目前烟草丛顶病得到了有效控制,但仍是烟区潜在的危险性病害.本文对烟草丛顶病的危害特征、发病症状、病原物、流行发病规律和综合防治研究进展进行了综述,提出了烟草丛顶病综合防治集成技术,可为进一步研究和防治烟草丛顶病或类似病害提供参考.

靶向G-四链体的抗番茄丛矮病毒卟啉类衍生物的筛选

植物病毒病给蔬菜生产带来很大影响,目前蔬菜病毒防控主要采用非药剂措施,广谱抗病毒剂效果有限,需要基于新的药物靶点开发新的病毒抑制剂。G-四链体(G4s)是一种特殊的核酸高级结构,其在病毒基因组中的形成或解链可调节基因的复制、转录和翻译等过程,进而影响病毒增殖。一些可调节G-四链体结构稳定性的小分子呈现出抗病毒活性,使得G-四链体有望成为新的抗病毒药物的靶标。番茄丛矮病毒(tomato bushy stunt virus,TBSV)是一种分布广泛的植物病毒,有关其基因组的复制、转录和翻译等分子机制已研究得较为成熟,是一种研究病毒与寄主互作的模式病毒。揭示TBSV中G-四链体的结构及功能,有望为植物病毒基因中G-四链体的研究奠定基础。本研究通过生物信息学分析,在TBSV基因中鉴定出两条保守的、潜在的G-四链体可形成序列(putative G-quadruplex sequences,PQS)——TBSV-PQS2和TBSV-PQS4;通过紫外、荧光光谱和圆二色光谱(CD光谱)方法筛选出与TBSV-PQS2和TBSV-PQS4互作的G4配体;通过烟草体内侵染性克隆试验发现,G-四链体配体N-甲基中卟啉IX(NMM)可抑制TBSV病毒的增殖。本研究结果表明,以植物病毒中G-四链体为靶点开发抗植物病毒的生态友好型农药,有望成为控制植物病毒危害的新策略。

话语标记“不是”:从话语修正到话语推进

“不是”在现代汉语中具有动词短语、名词、连词等多种语法属性,本文聚焦“不是”的话语标记功能,考察其在当代汉语口语中从话语修正到话语推进的发展演化。语料显示,“不是”基于否定判断产生话语修正功能,分为修正自我和修正他人。随着否定义进一步弱化产生话语推进功能,具体又包括反向转接和正向延续。“不是”言语功能的演化,伴随否定语义的逐步弱化和语篇衔接功能的相应增强,但“不是”用于话语修正和话语推进时,分别暗含言者对命题的不认同和对话语的负面评价。“不是”共时层面功能演化的动因和机制是标异性的主观化表达、基于会话合作原则推动的人际互动和“不是”作为否定性应答的肯定识解。

话语标记“可不是”的语义类型及其语篇功能研究

“可不是”作为一种话语标记,它在句子中所表达的意思存在歧义,这就为学习汉语的外国学生带来了很大困惑,而目前有关对外汉语教学方面的研究还有待深入。本文就此对作为话语标记的“可不是”的语义类型及其在语篇中的功能进行探究,对其意义和结构进行系统的阐释,以期能够更好的服务于二语学习者和对外汉语教学。

烟草丛顶病研究进展

烟草丛顶病是一类在局部地区产生严重危害的烟草病害,由烟草丛顶病毒和烟草扭脉病毒复合侵染引起。目前该病在我国仅云南有发生的报道,烟草丛顶病也是国内第一个报道的由幽影病毒属成员引起的病害。本文较为系统全面地综述了烟草丛顶病的发生与分布、病害症状学、病原物、与病害相关的dsRNA、病组织超微病变以及病害的流行及控制等方面的研究进展。

CTAB法用于染病烟草植株中烟草丛顶病毒RNA的提取

CTAB法是一种广泛用于从染病植物中提取总核酸,并用于后续相关病原物PCR检测的核酸提取法,已普遍运用于DNA病毒、植原体、细菌、真菌侵染植物的总DNA提取和病原检测。本文尝试将CTAB法用于一种由RNA病毒(烟草丛顶病毒)引起的烟草丛顶病染病组织总核酸的提取,以总核酸进行烟草丛顶病毒的RT-PCR检测,并与常规RNA病毒核酸提取法——Trizol法作比较。结果表明CTAB法和Trizol法提取的核酸用于烟草丛顶病毒RT-PCR检测时,均能扩增到目的条带,检测结果一致。在对复合侵染材料进行检测时发现,CTAB法提取的染病植物组织总核酸既包括DNA也包含RNA,有利于对DNA和RNA病原物同时进行检测;CTAB法所用试剂较Trizol法便宜,毒性小,且提取的核酸量较多、保存时间较长。因此CTAB法是一种高效、简便、经济的从烟草丛顶病染病组织中提取烟草丛顶病毒RNA的方法。

TBSV病毒瞬时表达载体构建及其表达

为了深入理解植物RNA病毒载体表达系统,初步建立了利用TBSV病毒表达载体在寄主植物烟草中表达外源蛋白的技术体系.以番茄丛矮病毒（Tomato bushy stunt virus,TBSV）为材料,构建了含报告基因sGFP的WY1,WY2等2个重组病毒表达载体,并将载体导入农杆菌GV3101用于侵染烟草植株叶片;利用农杆菌渗滤接种技术,使构建的载体在烟草本氏烟（Nicotiana benthamiana）中进行瞬时表达.结果表明,接种WY1的烟草,于接种后第2 d就可以检测到荧光信号,10~12 d时表达量达到最高.纯化后的sGFP与标准GFP相对分子质量相同且其荧光光谱也与文献报道的一致.对于感兴趣基因（Gene of interested,GOI）的表达和研究提供了一种新的途径.

基于遗传算法的关系数据库查询优化策略

介绍基本遗传算法的基本思想和工作流程,针对数据库管理系统中最难处理和优化的连接操作,讨论在左深连接树的计划集合和浓密连接树的计划集合上的基于遗传算法的查询优化策略。同时通过具体的查询实例说明其左深度连接树和浓密连接树的染色体编码方法,并基于该编码方式进一步确定了基本遗传算法中其它的七个变元。

烟草脉扭病毒基因组部分序列的克隆和分析

烟草脉扭病毒(Tobacco vein distorting virus, TVDV)是引起烟草丛顶病的两种病毒之一。TVDV被归为黄症病毒科的暂定成员。应用黄症病毒科的通用引物和根据马铃薯卷叶病毒属成员核酸序列设计的简并引物,通过RT—PCR从烟草丛顶病烟株总RNA中扩增到了TVDV基因组的部分序列。序列分析获得了长度为1654 bp的序列,编码推测的TVDV复制酶基因的部分序列、外壳蛋白基因及运动蛋白基因的全部序列。根据这三个基因编码的氨基酸序列构建的分子进化树分析表明,TVDV为黄症病毒科的确定成员。根据其基因间隔区的长度特征和各ORF编码的氨基酸的分子进化分析,我们推测TVDV应当是马铃薯卷叶病毒属的一个新成员。这是TVDV的分子生物学特征的首次报道。

试论“不是……吗”反问句的疑问用法

在梳理已有关于反问句研究成果分歧的基础上,提出了判断反问句是否表示疑问的标准,并提出了"不是……吗"反问句表示疑问的条件:句子中的命题一般是预期信息,说话时出现了新信息,而且新信息是反预期信息,说话人希望了解为什么或怎么会出现这个反预期信息。针对实际情况与预期的多种关系,问句有多种应答方式。

云南烟草丛枝症病害研究：Ⅻ病原研究：病毒问题

云南烟草丛枝症病害病程表现为潜伏、过敏反应、缩顶、丛枝等４个阶段，以过敏反应导致叶片严重坏死和枯死为前期特征，以腋芽丛生而表现为黄化丛枝症为后期特征，苗期感染形成僵苗症，大田期感染表现丛枝症；汁液摩擦接种１１科３２种植物发现其只侵染烟属植物，通过机械传染（嫁接、汁液）和介体传染（菟丝子、蚜虫、烟盲蝽、叶蝉）等方式传播，该病害与文献记载的烟草丛枝、丛顶和丛蔟类病害有明显区别，可能是未见记载的病害．在云南烟草丛枝症病株的老叶和带毒蚜虫中抽提到直径约２２～２４ｎｍ的球状病毒，回接烟草发病，病株检测到和云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ，说明该病毒和云南烟草丛枝症病害有密切的关系，且与ＳＢＭＶ，ＶＴＭＶ，ＴＲＳＶ，ＡｒＭＶ，ＣａｒＭＶ，ＣＭＶ，ＢＣＭＶ，ＴＮＶ等８种病毒无血清学关系，综合各项研究和文献检索结果，作者推测该病毒可能是未见记载的病毒，建议称为“烟草簇矮病毒（Ｔｏｂａｃｏｂｕｓｈｙｄｗａｒｆｖｉｒｕｓ）”．

从烟草丛顶病病原复合物中分离烟草扭脉病毒的方法

烟草丛顶病是由烟草丛顶病毒（TBTV）、烟草丛顶病毒类似卫星RNA（Sat-TBTV）、烟草扭脉病毒（TVDV）和烟草扭脉病毒相关RNA（TVDVaRNA）复合侵染引起的一类特殊病害,目前尚不清楚这些病原物各自在病害症状形成和病害传播中的作用。本文根据蚜虫传播烟草丛顶病复合病原物传毒特性的差异,探索了3种分离TVDV的生物学方法。方法A为将获得了烟草丛顶病复合病原物的蚜虫饥饿24h后,以单虫单苗的方式接到健康烟株上传毒,24h后灭虫。方法B为将无毒蚜虫饥饿2-4h后转接到感病烟株上饲毒48h,再以单虫单苗的方式接到健康烟株上传毒,24h后灭虫。方法C为将无毒蚜虫于感病烟株上饲毒48h后,以单虫单苗的方式接到健康烟株上传毒24h,此后每隔24h将蚜虫移到另一健康烟株上传毒,直到蚜虫死亡。其中方法 A和B均可将TVDV从烟草丛顶病病原复合体中分开,方法A操作简单、分离周期短且TVDV的分离效率高。单独TVDV侵染的烟株无明显的丛顶症状,叶片靠近主脉的地方会出现皱缩,生长后期叶片变得细长且顶端会发生扭曲。本试验可为研究TVDV与其他病原物、寄主植物和传播介体的相互作用提供很好的试验材料,也可为蚜虫传播的复合侵染病毒的生物学分离提供参考。

BPM理论在医院数字化建设中的应用与思考

当前,医院信息化建设正如火如荼地展开,而与之关系密切的业务流程管理也越来越受到重视。本文对数字化医院及业务流程管理概念、内涵、相互联系及对业务流程管理在数字化医院建设中要掌握的核心环节作了探讨。

大鼠内侧膝状体腹侧部神经元形态和电生理特征研究

目的 研究内侧膝状体腹侧部 (ventralmedialgeniculatebody ,MGBv)单个神经元的形态结构和基本电生理特性。方法 采用脑片膜片钳全细胞记录技术 ,观察腹侧部神经元的基本电生理特征和不同膜电位水平时动作电位 ,并结合组化染色观察腹侧部神经元的形态结构。结果 尼氏及Biocytin染色显示MGBv神经元胞体呈卵圆型 ,树突分支呈蓬丛样。经电流钳测得MGBv神经元静息电位 ( -5 4 92± 10 85 )mV ,膜电容 ( 5 3 7± 1 98)pF ,膜电阻 ( 945 67± 5 0 7 80 )MΩ ,时间常数 ( 2 10 9 87± 2 496 0 1) μs。通过注入不同的电流改变膜电位可记录到脉冲式或持续性等多样性的动作电位。在电压钳和电流钳下可记录到自发放电活动。结论 MGBv神经元树突分支较浓密 ,呈蓬丛状 ,神经元动作电位形状呈多样性。在电流钳下记录到的自发性电活动的波形与动作电位相似 。

烟草丛顶病毒完整基因组上微卫星分布

为了提取并展示NCBI数据库中烟草丛顶病毒完整基因组(NC-004366.1)上微卫星分布特性,采用MATLAB软件和最优完全子图算法自编了计算机程序进行。结果表明,烟草丛顶病毒完整基因组上n-碱基组(n=1～6)最大的重复出现次数随n增加而按指数函数减少。

一种改进的烟草丛顶病快速诊断方法

与病害特异的小分子RNA的检测是烟草丛顶病的主要诊断方法。本文报道了一种改进的与烟草丛顶病相关的小分子RNA的简便提取方法,在烟草丛顶病的快速、特异检疫中具有较好的应用前景。