(-)-表儿茶素通过调控A549R细胞自噬改善放疗敏感性的作用机制

目的 探讨(-)-表儿茶素[(-)-Epicatechin, EC]通过联合放疗(Radiotherapy, RT)改善非小细胞肺癌细胞放疗敏感性的作用机制。方法 体外培养A549人非小细胞肺癌细胞,构建放疗抵抗株A549R。通过细胞计数试剂盒8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测细胞增殖活力,脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling, TUNEL)染色观察细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞迁移能力。蛋白质免疫印迹(Western blot)检测凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3)和自噬相关蛋白(Beclin、LC3II/I)的表达。免疫荧光染色检测Cleaved Caspase-3和LC3的表达。单丹磺酰尸胺(Monodansylcadaverine, MDC)染色检测自噬体的形成。结果 EC联合RT抑制细胞增殖和迁移能力、诱导细胞凋亡和自噬、下调Bcl-2的表达、上调Bax、Cleaved Caspase-3、Beclin和LC3Ⅱ/I的表达,而加入自噬抑制剂(Chloroquine, CQ)或mTOR信号通路激活剂MHY1485处理后部分减弱了EC联合RT处理对细胞的作用。结论 EC可作为放疗增敏剂,通过抑制mTOR信号通路诱导A549R细胞自噬和凋亡改善放疗敏感性。

(-)-表儿茶素和植物铁蛋白的非共价结合及功能表征

采用荧光光谱、圆二色谱、透射电镜、动态光散射等手段研究去铁红小豆铁蛋白(apoRBF)与表儿茶素(EC)的非共价络合及其对蛋白质结构和功能性质的影响。荧光结果表明,EC未改变apoRBF的特征发射峰330 nm,且随浓度的升高,apoRBF荧光强度下降,EC与apoRBF发生相互作用,引起蛋白质三级/四级结构的改变,而对蛋白质的一、二级结构没有影响。荧光拟合显示二者的结合常数K和结合位点数n分别为3.65×10^(4)mol/L^(-1)和98.5。铁蛋白-表儿茶素复合物(FEC)在4℃和40℃下透析12 h,EC的释放率分别为29.1%和45.9%,均低于游离EC的释放率,表明EC与apoRBF发生结合,且低温更有利于二者的结合。经模拟胃肠液孵育2 h后,FEC中EC的释放率分别为68.6%和32.2%,与游离EC的释放率相比,表现出相对较慢和持续的释放过程,表明EC与apoRBF的结合显著抑制模拟胃肠液中蛋白酶对铁蛋白的降解,促进功能组分的缓释作用。此外,FEC保留了表儿茶素的抗氧化能力但略有下降。本研究结果明确了多酚与植物铁蛋白作用机理,为表儿茶素与植物铁蛋白非共价复合物的应用提供理论参考。

HPLC法测定不同产地金荞麦超微粉(-)-表儿茶素含量

为测定不同产地金荞麦中有效成分(-)-表儿茶素的含量,本试验将产自四川、贵州等8个省的金荞麦饮片粉碎成0.75nm以下的超微粉,用500mL/L乙醇提取,高效液相色谱法测定(-)-表儿茶素的含量,色谱条件:Kromasil C柱,流动相为水-乙腈(92∶8),流量为1.0mL/min,柱温35℃,波长为278nm,进样量为10μL。结果表明,在0.55μg/mL～17.6μg/mL范围内(-)-表儿茶素与峰面积线性关系良好,回归方程为Y=519 812.36 X+2 018.12,r=0.999 2;8个产地的金麦(-)-表儿茶素含量在6.45μg/g～8.81μg/g超微粉之间。该方法能快速、稳定、精确的检测(-)-表儿茶素的含量,且不同产地金荞麦中(-)-表儿茶素含量有一定差异。

不同剂量钴-60辐照对制痂酊中儿茶素和表儿茶素含量的影响

目的:建立HPLC法测定制痂酊中儿茶素和表儿茶素含量的方法,同时考察不同剂量^(60)Co辐照对其含量影响。方法:色谱柱:Kromasil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:2.2%冰醋酸-乙腈(86:14),流速:0.8 ml·min^(-1),检测波长:280nm,柱温:35℃。结果:儿茶素和表儿茶素分别在1.025～12.813μg,0.196～2.450μg范围内线性良好,加样回收率分别为98.0%,99.8%(n=5);^(60)Co辐照剂量为3 kGy时,儿茶素和表儿茶素含量分别减少2.77%,3.43%,随着辐照剂量的增加,两者含量有逐渐下降的趋势。结论:对单批次样本测定表明:^(60)Co辐照对制痂酊中儿茶素和表儿茶素的含量有一定影响,但在低剂量(≤3 kGy)时影响不显著。

分光光度法测定金荞麦(-)-表儿茶素含量的方法研究

为建立香荚兰素-盐酸分光光度法对表儿茶素含量的测定方法,实验分别以乙醇和水作溶剂,在34.79～208.74μg范围内取样置50 mL容量瓶测定,结果发现:①以乙醇作溶剂时,测定波长为508 nm,1%香荚兰浓盐酸添加量应超过40mL(CV≤1.86%),测定时间以40 min后为宜(CV≤2.65%),标准曲线线性关系(R=0.999 3)与精确度(CV=2.66%)、准确度(P>0.05)良好。②以水作溶剂时,测定波长为504 nm,显色反应不稳定,标准曲线线性关系(R=0.988 1)也较一般。③采用乙醇作溶剂时,测得金荞麦块根中(-)-表儿茶素类物质含量占干物质的2.22%(CV≤3.90%),该法操作简便,灵敏度高,重现性好。

表没食子儿茶素没食子酸酯抑制人腹膜间皮细胞上皮-间质转化的作用及机制

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人腹膜间皮细胞(HPMCs)上皮-间质转化(EMT)的作用及机制。方法收集新开管的腹膜透析和腹膜透析1年以上患者的HPMCs,分别采用逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法和免疫印迹(Western blot)法检测紧密连接蛋白1(ZO-1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、铁死亡抑制蛋白1(FSP1)mRNA和蛋白表达水平。采用HPMCs细胞系HMrSV5进行体外实验研究,分别加入20,40,60,80,100μg/mL EGCG,检测EGCG对HMrSV5的细胞毒性。通过200μg/mL和500μg/mL晚期糖基化终产物(AGEs)构建HPMCs EMT模型,将HMrSV5细胞分为对照组(AGEs造模前无处理)、实验组(AGEs造模前2 h加入EGCG共孵育)、si-NC+EGCG组(转染si-NC后,AGEs造模前2 h加入EGCG共孵育)、si-Notch3+EGCG组(转染si-Notch3后,AGEs造模前2 h加入EGCG共孵育),检测ZO-1,E-cadherin,FSP1,Notch3 mRNA和蛋白表达水平。结果与新开管的腹膜透析患者比较,腹膜透析1年以上患者HPMCs的ZO-1及E-cadherin mRNA和蛋白表达水平均显著升高,FSP1及Notch3 mRNA表达水平均显著降低(P<0.05)。与正常HMrSV5比较,加入500μg/mL AGEs诱导HMrSV5后,ZO-1及E-cadherin mRNA和蛋白表达水平均显著升高,FSP1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。与对照组比较,实验组ZO-1及E-cadherin mRNA和蛋白表达水平均显著降低,FSP1及Notch3 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。与si-NC+EGCG组比较,si-Notch3+EGCG组Notch3及FSP1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低,ZO-1及E-cadherin mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。腹膜透析患者HPMCs中Notch3表达水平与ZO-1和E-cadherin呈负相关(r=-0.8477,-0.3822,P<0.05),与FSP1呈正相关(r=0.6626,P<0.05)。结论EGCG通过Notch3抑制AGEs诱导的HPMCs EMT,发挥对腹膜透析患者的保护作用。

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯缓解顺铂所致大鼠急性肾损伤效果评价

【目的】评价不同浓度表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)对顺铂所致大鼠急性肾损伤的保护效果,筛选出EGCG缓解顺铂肾毒性的最佳浓度。【方法】将30只Wistar大鼠随机分为5组(6只/组):正常对照组(CON)、顺铂组(CIS)、低剂量EGCG(20 mg/kg)+顺铂组(LCE)、中剂量EGCG(40 mg/kg)+顺铂组(MCE)及高剂量EGCG(80 mg/kg)+顺铂组(HCE)。CON和CIS组大鼠持续28 d灌胃生理盐水(40 mg/kg),CIS组在第26天腹腔注射CIS(7 mg/kg);LCE、MCE和HCE组大鼠持续28 d灌胃相应剂量的EGCG,在第26天腹腔注射CIS,第29天采集大鼠血清和肾脏组织。检测药物灌服期间大鼠生理和生化指标变化,病理学检测各组大鼠肾脏组织病理变化,初步评价EGCG在CIS所致大鼠急性肾损伤中保护作用,筛选出EGCG最佳有效浓度;Western blotting检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3及炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和IL-10蛋白表达变化,进一步证实EGCG的保护效果。【结果】与CON组相比,CIS组大鼠采食量、饮水量和体重在第28天显著下降(P<0.05),血清中尿素氮(BUN)与肌酐(CRE)含量显著上升(P<0.05),肾小管扩张明显,有蛋白管型,肾损伤严重;与CIS组相比,MCE组大鼠采食量、饮水量和体重显著上升(P<0.05),血清中BUN、CRE含量显著下降(P<0.05),MCE组肾脏肾小管扩张程度得到明显改善,LCE和HCE组无明显变化。因此,选用40 mg/kg EGCG用于后续试验。Western blotting检测结果表明,与CON组相比,CIS组Bax、IL-6、Caspase-3蛋白表达量显著上升(P<0.05),Bcl-2、IL-10蛋白表达量显著下降(P<0.05);与CIS组相比,MCE组Bax、IL-6、Caspase-3蛋白表达量显著下降(P<0.05),Bcl-2、IL-10蛋白表达量显著升高(P<0.05)。【结论】EGCG对CIS诱导的大鼠急性肾损伤具有保护作用,以40 mg/kg为最佳,其保护机制与抑制肾细胞凋亡和炎症相关。

金荞麦(-)-表儿茶素抗氧化活性研究

研究金荞麦中(-)-表儿茶素活性物质的抗氧化活性。超氧阴离子自由基清除实验表明其抗氧化率达到83.08%;羟自由基清除实验表明活性物质质量浓度对清除率的影响差异极显著(P<0.01),质量浓度为0.350 mg/mL时清除率达77.30%;还原力测定实验表明其还原力达到同质量浓度VC的48.02%,且质量浓度对还原力的影响差异极显著(P<0.01);乙醇提取物中活性物质含量达1.40 mg/mL,占块根干物质质量的2.52%。实验证明金荞麦(-)-表儿茶素活性物质具有很好的抗氧化活性,可作为一种天然、高效的抗氧化剂。

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯抑制脂多糖诱导的巨噬细胞促炎因子TNF-α和IL-1β基因表达

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate，EGCG）具有抗氧化、抗癌、抗炎等多种生物学特性，但对巨噬细胞中表达TNF-α及IL-1β的报告尚存在争议．本文旨在探索EGCG对脂多糖（LPS）诱导的小鼠腹腔巨噬细胞和RAW264-7细胞促炎细胞因子Tnf-α和Il-1β基因表达的影响．MTT结果显示，0-100μmol／LEGCG对RAW264．7细胞活力没有影响；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和ELISA分析显示，1ing/LLPS可显著升高小鼠腹腔巨噬细胞和RAW264．7细胞Tnf-α和Il-1βmRNA和蛋白水平，EGCG单独处理对巨噬细胞Tnfα和Il-1β的基因表达与蛋白生成没有影响，但可以抑制LPS诱导的巨噬细胞Tnf-α和Il-1β的基因表达与蛋白生成，并存在剂量依赖效应．上述结果提示，EGCG可以剂量依赖方式抑制LPS诱导的巨噬细胞促炎细胞因子Tnf-α和Il-1β的表达，这可能与EGCG的抗炎效应有关．

乙醇提取金荞麦(-)表儿茶素类活性物质的工艺

通过单因素试验法,经F检验和新复极差法(SSR法)比较,先后确定了乙醇浓度、提取温度、料液比、提取时间的大致范围;再通过四因素三水平的正交试验,得到优化后的提取工艺为乙醇体积分数60%、提取温度20℃、料液比(g/mL)1∶18、提取时间30 min,得到金荞麦(-)表儿茶素类活性物质的平均提取率达2.5%。工艺简单合理,可应用于金荞麦(-)表儿茶素单体产业化的前期生产。

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯抑制TNF-α和IL-β在小鼠皮肤烫伤修复期间的表达

肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)在创伤修复中起着至关重要的作用.本研究利用小鼠皮肤深II度烫伤模型,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测烫伤部位组织Tnf-αmRNA和Il-1βmRNA的表达水平以及TNF-α和IL-1β的含量,探讨表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)对小鼠皮肤烫伤修复期间TNF-α和IL-1β表达的影响.结果显示,用0.2 mg/g EGCG膏剂涂敷烫伤皮肤,处理12 h可致组织Tnf-αmRNA表达水平和TNF-α含量下降,处理24 h可致组织Il-1βmRNA表达水平和IL-1β含量下降.上述结果提示,0.2 mg/g EGCG处理能抑制烫伤组织TNF-α和IL-1β的表达,减弱创伤组织的炎症反应,有助于创伤组织的修复.

WPI和WPI-EGCG构建姜黄素纳米乳液的体外消化差异

选择接枝率为3%和4%的乳清分离蛋白(whey protein isolate,WPI)-表没食子儿茶素没食子酸酯((-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)接枝物为乳化剂构建姜黄素纳米乳液,探究纳米乳液体外模拟消化过程中游离脂肪酸(free fat acid,FFA)释放和消化特性的差异。结果表明,EGCG的结合可能导致WPI分子结构的展开;与WPI相比,WPI-EGCG稳定乳液的界面膜厚度增加了31.6 nm。WPI-EGCG接枝物稳定的乳液的粒径分散度和平均粒径较小,形成的纳米乳液更加稳定,可以更好地促进脂质消化。4%WPI-EGCG稳定的纳米乳液在肠消化120 min后的最终FFA释放率达到85.13%。并且接枝还提高了系统中封装的姜黄素的生物可及性。

外源24-表油菜素内酯对低氧胁迫下黄瓜幼苗抗氧化系统及蛋白含量的影响

采用营养液水培,研究了根际低氧胁迫下外源24-表油菜素内酯(24-ep iBR)对2个抗低氧能力不同的黄瓜品种(“绿霸春四号”和“中农八号”)叶和根组织中抗氧化系统及根系中可溶性蛋白和热稳定蛋白含量的影响。结果表明,营养液添加1×10-3m g/L 24-ep iBR能显著提高黄瓜植株叶和根组织抗氧化酶SOD、POD活性,对CAT活性无明显影响,降低了O.2-和M DA含量,同时,根系可溶性蛋白和热稳定蛋白含量显著提高;与抗低氧性较弱的品种“中农八号”相比,24-ep iBR处理对抗低氧性强的品种“绿霸春四号”效果更明显,表明外源24-ep iBR处理通过促进抗氧化酶活性和蛋白含量的提高,降低低氧胁迫下植株体内RO S含量,增强植株低氧逆境的适应能力。

影响荔枝果皮褐变底物(-)-表儿茶素稳定性的因素

分析光照、温度、pH值、气体成分、氧化还原物质和金属离子等因素对荔枝果皮酶促褐变底物(-)-表儿茶素稳定性的影响。结果表明,(-)-表儿茶素在光照、高温和碱性条件下不稳定,容易变褐;O2处理提高了褐变底物与PPO的反应能力,而CO2处理明显起减缓作用;氧化剂H2O2加速了该酶促反应,但还原剂Vc及Na2S2O5阻止底物酶促褐变;K+、Na+、Ca2+和Zn2+对(-)-表儿茶素溶液的稳定性无显著影响,而在Fe3+、Fe2+、Cu2+、Pb2+存在下(-)-表儿茶素不稳定。在生产上可通过合适的处理来减缓荔枝果实褐变发生,以延长货架寿命,进而提高果实商品价值。

UPLC-MS/MS法测定不同产地何首乌中儿茶素类成分的含量

目的:建立超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱联用技术(UPLC-MS/MS)测定不同产地何首乌中儿茶素类成分含量的分析方法。方法:将粉碎后的何首乌样品用70%的甲醇超声提取后,经ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm)分离并在动态多反应监测模式(MRM)下检测,得到相应的提取离子流图,以峰面积进行定量。结果:各产地何首乌中儿茶素类成分存在较大的差异。其中,(+)-儿茶素(C)平均含量最高,达到2 282.23μg/g,其次为表儿茶素没食子酸酯(ECG)和表儿茶素(EC),平均含量分别为813.03μg/g和156.96μg/g,其余儿茶素类含量较低。结论:该法简单快速,结果准确、可靠,重复性好,为何首乌中儿茶素类成分的深入研究、质量控制及保健食品的开发提供了参考依据。

(+)-儿茶素与表没食子儿茶素没食子酸酯对乙醇诱导HepG2细胞脂代谢紊乱及氧化应激的影响

目的:体外对比(+)-儿茶素((+)-catechin,(+)-Cat)与表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对乙醇诱导的HepG2细胞脂代谢紊乱及氧化应激的差异。方法:以HepG2细胞为实验对象,乙醇作用组(ETOH组)加入作用浓度300 mmol/L乙醇,(+)-Cat+ETOH组加入200μmol/L(+)-Cat和300 mmol/L乙醇,EGCG+ETOH组加入200μmol/L EGCG和300 mmol/L乙醇;另设相同浓度的(+)-Cat组、EGCG组及正常组,各组均在37℃培养24 h。检测各组HepG2细胞甘油三酯(triglyceride,TG)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)浓度;油红O染色观察各组HepG2细胞的脂滴状态;荧光定量聚合酶链式反应法检测各组HepG2细胞固醇调节元件结合蛋白1(sterol regulatory element binding protein 1,SREBP-1)、二脂酰甘油转移酶2(diacylglyceryltransferase 2,DGAT2)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisomal proliferators activate receptorsα,PPARα)、肉毒碱棕榈酰基转移酶1(carnityltransferase 1,CPT1)mRNA相对表达水平。结果:ETOH组细胞发生氧化应激,同时TG含量明显高于正常组、(+)-Cat组和EGCG组;(+)-Cat+ETOH组和EGCG+ETOH组细胞氧化应激反应得到明显改善,同时TG含量显著低于ETOH组(P<0.05,P<0.01),并且显著下调SREBP-1和DGAT2 mRNA表达量(P<0.05,P<0.01),上调PPARα和CPT1 mRNA表达量(P<0.05,P<0.01)。结论:(+)-Cat与EGCG均能改善乙醇诱导的HepG2细胞氧化应激反应和脂代谢紊乱,且EGCG的效果更好。

藕节炭中3-表白桦脂酸含量的测定

目的建立藕节炭中3-表白桦脂酸含量的测定方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱:LichrospherC18(4.6mm×150mm,5μm);流动相:乙腈-0.2%冰醋酸(75∶25),流速:1mL/min;柱温:30℃;检测波长:207nm。结果3-表白桦脂酸的进样量在0.3654～3.654μg范围内线性关系良好,r=0.9996,平均回收率为98.83%,RSD=2.47%。不同地区市售藕节炭中3-表白桦脂酸的含量最高为0.5758%,最低为0.0483%。结论本法简便、准确、重复性好,可作为藕节炭中3-表白桦脂酸的含量测定方法。

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯抑制小鼠皮肤外伤愈合组织基质金属蛋白酶1的表达

目的探讨50 mg/L表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)对小鼠皮肤外伤愈合组织基质金属蛋白酶1(MMP-1)mRNA表达及MMP-1水平的影响。方法将57只小鼠随机分为对照组(含无损伤组和损伤对照组)、50 mg/L EGCG处理组和辅料组,除无损伤组为3只外,其余各组均为18只,然后分别于损伤后6、12、24、72、120、168 h取损伤愈合皮肤。利用RT-PCR和酶联免疫吸附法(ELISA)检测皮肤外伤愈合期间损伤愈合组织MMP-1 mRNA表达水平和MMP-1含量。结果检测结果表明,50 mg/L EGCG能在皮肤外伤愈合晚期(72 h后)抑制损伤愈合组织MMP-1 mRNA表达,降低MMP-1含量。结论 EGCG对皮肤外伤愈合、晚期愈合组织MMP-1mRNA表达和MMP-1生成具有抑制作用,提示50 mg/L的EGCG能促进皮肤外伤愈合。

金荞麦(-)表儿茶素类活性物质体外抑菌试验

为了探讨金荞麦(Fagopyrum dibotrys)提取液的抑菌效果,试验测得其乙醇提取液中(-)表儿茶素类活性物质含量达到10.019 mg/m L,占其块根干物质重的1.85%;牛津杯法表明金荞麦(-)表儿茶素类活性物质对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、大肠杆菌均有抑制作用,但对黑曲霉、灰绿青霉没有抑制作用;二倍稀释法表明(-)表儿茶素类活性物质对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母的MIC分别为1.252、2.505、5.010、5.010 mg/m L,对金黄色葡萄球菌的MBC为5.010 mg/m L。

(-)-儿茶素没食子酸酯和(+)-表儿茶素对心肌细胞保护作用研究

目的:观察(-)-儿茶素没食子酸酯[(-)-CG]和(+)-表儿茶素[(+)-EC]对心肌细胞黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶体系损伤的保护作用。方法:建立心肌细胞黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶体系损伤模型,倒置显微镜观察加入(-)-CG、(+)-EC后细胞形态学变化;噻唑盐比色法测定细胞活性;测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果:(-)-CG、(+)-EC能够增加心肌细胞存活率,降低心肌细胞LDH的漏出量,增加SOD活性,降低培养液中MDA的含量。结论:(-)-CG、(+)-EC具有抗体外培养大鼠乳鼠心肌细胞黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶体系损伤的作用。