(1-3)-β-D葡聚糖联合降钙素原、CD4^(+)T淋巴细胞多指标在艾滋病患者马尔尼菲篮状菌感染早期诊断临床研究

目的探讨(1-3)-β-D葡聚糖联合降钙素原(procalcitonin,PCT)、CD4^(+)T淋巴细胞多指标在艾滋病患者马尔尼菲篮状菌感染早期诊断临床研究。方法回顾性选取我院2020年1月—2022年6月住院的120例艾滋病患者为研究对象。依据实验室结果,将其分为马尔尼菲篮状菌感染确诊组(血或组织液培育养出马尔尼菲篮状菌),简称A组(62例),及马尔尼菲篮状菌感染临床诊断组[根据临床症状、体征、血常规及(1-3)-β-D葡聚糖、PCT、CD4^(+)T淋巴细胞多指标诊断],简称B组(58例)。检测患者(1-3)-β-D葡聚糖、PCT、CD4^(+)T淋巴细胞的表达水平,采用受试者工作特征(receiver-operating characteristic,ROC)曲线下面积(area under the curve,AUC)评估上述指标联合检测对艾滋病患者感染马尔尼菲篮状菌的诊断效能。结果A组的(1-3)-β-D葡聚糖和PCT水平均高于B组,CD4^(+)T淋巴细胞个数低于B组(P<0.05);(1-3)-β-D葡聚糖、PCT、CD4^(+)T淋巴细胞联合检测的AUC为0.933,(1-3)-β-D葡聚糖单独检测的AUC是0.812,PCT单独检测的AUC为0.883,CD4^(+)T淋巴细胞单独检测的AUC是0.810,(1-3)-β-D葡聚糖、PCT和CD4^(+)T淋巴细胞联合检测的AUC皆优于三项单独检测,表明(1-3)-β-D葡聚糖、PCT和CD4^(+)T淋巴细胞联合检测的诊断价值皆优于单一指标诊断,且联合检测的特异度、约登指数分别为92.43%和0.580,均高于三项单独检测。结论(1-3)-β-D葡聚糖联合PCT和CD4^(+)T淋巴细胞多指标对艾滋病马尔尼菲篮状菌感染具有非常高的临床诊断价值,能够帮助医生分析出高危风险患者,及时制定治疗方案,同时也承担预后效果的判断依据,对治疗艾滋病马尔尼菲篮状菌感染具有非常重要的研究价值。

裸藻β-1,3-葡聚糖对断奶仔猪生长性能、血清炎症细胞因子含量及肠道菌群结构的影响

本试验旨在研究裸藻β-1,3-葡聚糖对仔猪生长性能、血清炎症细胞因子含量及肠道菌群结构的影响,为裸藻β-1,3-葡聚糖的开发和应用提供依据。选取150头40日龄左右、体重[(13.06±0.26)kg]相近的“杜洛克×长白×大白猪”三元杂断奶仔猪,随机分为5个组,每组5个重复,每个重复6头猪。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加50、100、150 mg/kg的裸藻β-1,3-葡聚糖及100 mg/kg的酵母β-1,3-葡聚糖。预试期3 d,正试期28 d。结果表明:1)与对照组相比,饲粮中添加100 mg/kg的裸藻β-1,3-葡聚糖显著提高了断奶仔猪平均日采食量和平均日增重(P<0.05),显著降低了料重比(P<0.05)。2)与对照组相比,饲粮中添加50、100、150 mg/kg的裸藻β-1,3-葡聚糖及100 mg/kg的酵母β-1,3-葡聚糖显著提高了血清白细胞介素-1、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α含量(P<0.05)。3)与对照组相比,饲粮中添加50 mg/kg的裸藻β-1,3-葡聚糖显著提高了软壁菌门(Tenericutes)相对丰度(P<0.05),饲粮中添加50和100 mg/kg的裸藻β-1,3-葡聚糖显著提高了乳杆菌科(Lactoba⁃cillaceae)相对丰度(P<0.05),饲粮中添加50和150 mg/kg的裸藻β-1,3-葡聚糖显著降低了瘤胃球菌属(Ruminococcus)相对丰度(P<0.05)。4)与对照组相比,饲粮中添加100 mg/kg的裸藻β-1,3-葡聚糖显著提高了Chao1指数(P<0.05),饲粮中添加150 mg/kg的裸藻β-1,3-葡聚糖显著降低了Simpson指数(P<0.05)。Beta多样性分析发现,饲粮中添加100 mg/kg裸藻β-1,3-葡聚糖组与对照组物种相似性最高。由此可见,饲粮中添加适量裸藻β-1,3-葡聚糖能提高断奶仔猪生长性能,降低炎症反应,改善肠道菌群多样性和结构。本试验条件下,饲粮中添加100 mg/kg裸藻β-1,3-葡聚糖效果最好。

β-1,3/α-1,3-葡聚糖与益生菌复配物的润肠通便功能

为探讨β-1,3/α-1,3-葡聚糖与益生菌复配对便秘小鼠通便作用的影响,将小鼠随机分为5组:阴性对照组、模型组、β-1,3/α-1,3-葡聚糖与副干酪乳酸杆菌质量比1∶1组、β-1,3/α-1,3-葡聚糖与鼠李糖乳杆菌质量比1∶1组、β-1,3/α-1,3-葡聚糖与乳双歧杆菌质量比1∶1组。除对照组外,其余组别均采用盐酸洛哌丁胺建立小鼠便秘模型。观察各组小鼠首粒黑便排出时间、6 h黑便粒数、粪便质量、粪便含水量及小肠墨汁推进率。结果表明:与模型组相比,3组处理组均能显著缩短便秘小鼠的首粒黑便排出时间,显著增加粪便质量、粪便粒数、墨汁推进率及粪便含水量。其中β-1,3/α-1,3-葡聚糖与副干酪乳杆菌1∶1组改善便秘效果优于β-1,3/α-1,3-葡聚糖与鼠李糖乳杆菌、乳双歧杆菌质量1∶1组。研究表明,β-1,3/α-1,3-葡聚糖与益生菌复配能有效促进便秘小鼠肠道蠕动,促进排便,具有润肠通便作用。

酵母β-1,3/1,6-葡聚糖对断奶仔猪细胞免疫和体液免疫机能的影响

为了探讨酵母β-1,3/1,6-葡聚糖对自然条件下饲养的断奶仔猪细胞和体液免疫机能的影响,选择品种一致,体重接近,公母各半,日龄为(28±3)d的长×大二元断奶仔猪160头,随机分成4个处理组,分别连续添加0、50、100和200 mg/kg的β-1,3/1,6-葡聚糖,进行试验,试验期为28 d。采用MTT法测定外周血淋巴细胞转化率,流式细胞仪(Flow Cytometry,FCM)检测外周血主要淋巴细胞亚群,IDEXX-ELISA antibodyTest Kit检测猪瘟抗体。结果发现:添加β-1,3/1,6-葡聚糖14 d后,试验组外周血T、B淋巴细胞转化率极显著高于对照组(P<0.01);但28 d无明显差异(P>0.05)。21 d试验组猪瘟疫苗免疫的抗体水平显著提高(P<0.05);低剂量(50mg/kg)的β-1,3/1,6-葡聚糖对Th细胞、Tc细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞数量及其CD4+/CD8+比值均有提高,但高剂量(100和200 mg/kg)的β-1,3/1,6-葡聚糖可以导致CD8+T细胞数量显著升高(P<0.05),CD4+/CD8+显著下降(P<0.05)。结果表明:酵母β-1,3/1,6-葡聚糖可影响猪的细胞和体液免疫功能,对猪瘟疫苗免疫抗体水平有提高,其免疫调节作用受添加剂量和时间的影响。低剂量酵母β-1,3/1,6-葡聚糖能适度提高机体细胞和体液免疫机能,增强机体的抗病力,高剂量可能会影响机体免疫系统的正常状态。

β-1,3/1,6-葡聚糖对肉仔鸡生产性能和免疫功能的影响

研究肉仔鸡日粮中添加 β 1,3/1,6 葡聚糖对生产性能、免疫器官重量、细胞免疫功能及体液免疫功能的影响。结果表明 ,饲喂 β 葡聚糖能提高 2 1日龄仔鸡法氏囊的重量 (P <0 .0 5 )和 4 2日龄外周血淋巴细胞 (PBL)对脂多糖 (LPS)的反应 (P <0 .0 5 )。注射绵羊红细胞 (SRBC) 7d后 ,抗体水平和IgG含量达到峰值 ;与对照组相比 ,添加 β 葡聚糖使其在长时间内维持较高水平 ,一免 11d后差异显著 (P <0 .0 5 )。β 葡聚糖提高了肉仔鸡对新城疫疫苗(NDV)的抗体水平 ,同时还增强了肉仔鸡对NDV的免疫应答 ,二免 9d后差异显著 (P <0 .0 5 )。本研究认为 ,β 1,3/1,6 葡聚糖能提高肉仔鸡的体液免疫和细胞免疫功能。

酵母β-1,3/1,6-葡聚糖与丁酸钠合用对断奶仔猪生长性能和生理代谢的影响

为探讨丁酸钠与β-1,3/1,6-葡聚糖合用对断奶仔猪生产性能和生理代谢的影响,试验选择日龄为(28±3)d的长×大二元断奶仔猪120头,随机分成3个处理,每个处理5个重复,每重复8头猪。3个处理分别为对照组、丁酸钠组和丁酸钠与葡聚糖合用组。结果表明:饲料中单独添加丁酸钠,可显著(P<0.05)提高仔猪后期(15～28d)和全期(0～28d)的日采食量、日增重并改善饲料转化效率,显著(P<0.05)降低腹泻发生率和升高血浆游离脂肪酸、甘油三酯浓度,显著(P<0.05)降低血清葡萄糖浓度,但对血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、胆固醇、尿素氮浓度均无显著影响(P>0.05)。丁酸钠与葡聚糖合用,显著(P<0.05)降低了血浆游离脂肪酸含量。

日粮添加不同水平酵母β-1,3/1,6-葡聚糖对断奶仔猪生产性能和血清生理指标的影响

为了探讨酵母-β1,3/1,6-葡聚糖对断奶仔猪生产性能、血清理化指标的影响,试验选择品种一致,体重接近,公、母各半,日龄为(28±3)d的长×大二元断奶仔猪160头,随机分成4个处理组,分别连续添加(0、50、100和200mg/kg)的-β1,3/1,6-葡聚糖,试验期为28d。结果表明:断奶仔猪日粮中添加-β1,3/1,6-葡聚糖有提高血清总蛋白浓度的趋势(P<0.01),可极显著(P<0.01)提高血清球蛋白浓度,显著(P<0.05)降低血清总胆固醇浓度和LDL浓度,对血清甘油三酯浓度、HDL浓度和葡萄糖浓度均无显著影响(P>0.05)。同时也发现,断奶仔猪日粮中连续添加50mg/kg的β-1,3/1,6-葡聚糖,可显著提高日增重及改善饲料转化率,显著(P<0.05)降低腹泻发生频率,有提高日采食量的趋势,各处理组死亡率无显著差异。剂量太高有提高腹泻发生率的趋势。上述试验表明,断奶仔猪日粮中添加50 mg/kg的β-1,3/1,6-葡聚糖可调节其脂质代谢和蛋白质代谢,增强机体免疫功能,从而显著提高其生长性能。

利用活体成像技术研究海茸β-1,3/1,6-葡聚糖在小鼠体内的分布

以海茸β-1,3/1,6-葡聚糖(DAG)为研究对象,首先经还原胺化反应在DAG还原端引入功能氨基,再将其与N-羟基丁二酰亚胺(NHS)活化的荧光染料(Cy7)偶联,获得Cy7标记的DAG分子;利用小动物活体成像技术研究了DAG在小鼠体内的分布.结果表明,DAG在小鼠体内主要分布于肺、肝和肾,具有靶向小鼠肺部和通过肾排泄的特点.该方法简便、数据可靠,为多糖和寡糖的体内分布与代谢研究提供了参考.

日粮添加酵母β-1,3/1,6-葡聚糖对哺乳仔猪生长性能和免疫功能的影响

试验选用相近胎次(4-6胎)和分娩日龄(相差3d左右)的长×大二元母猪20头,随机分成4个处理组,各处理组哺乳仔猪均从5日龄开始补料,哺乳仔猪日粮中分别添加0、50、100和200 mg/kg的酵母-β1,3/1,6-葡聚糖,研究酵母β-1,3/1,6-葡聚糖对哺乳仔猪生长性能和免疫机能的影响。结果表明:哺乳仔猪日粮中添加酵母β-1,3/1,6-葡聚糖,对生产性能无显著影响,有降低仔猪腹泻率和死亡率的趋势;可显著提高外周血淋巴细胞转化率,血清IgA、IgG和IgM浓度(P<0.05),有提高血清溶菌酶活性的趋势。综合全期生长性能和免疫调节效果来看,哺乳仔猪日粮中β-1,3/1,6-葡聚糖适宜的添加剂量为50mg/kg。

黑酵母β-1,3/1,6-葡聚糖对感染肠炎沙门氏菌Caco-2细胞促炎症和抗炎症细胞因子基因mRNA表达水平的影响

本试验采用实时荧光定量PCR分析黑酵母β-1,3/1,6-葡聚糖对肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)诱导Caco-2细胞表达细胞因子基因mRNA表达水平的影响。试验选用Caco-2细胞,分成4个组:对照组(A组)、肠炎沙门氏菌感染组(B组)、β-1,3/1,6-葡聚糖组(C组)和β-1,3/1,6-葡聚糖+肠炎沙门氏菌共培养组(D组)。C、D组用黑酵母β-1,3/1,6-葡聚糖(50μg/mL)预处理24 h,然后B、D组各孔接种1×108CFU/mL肠炎沙门氏菌处理3 h。实时荧光定量PCR方法分析细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β(TGF-β)基因mRNA表达水平。结果表明:肠炎沙门氏菌和β-1,3/1,6-葡聚糖均极显著地上调了IL-1β、TNF-α、IL-8和IL-10基因mRNA表达水平(P<0.01),但对TG F-β基因mRNA表达水平无显著影响(P>0.05)。与肠炎沙门氏菌感染组相比,添加β-1,3/1,6-葡聚糖可显著地下调肠炎沙门氏菌诱导Caco-2细胞的细胞因子IL-1β、IL-8和TNF-α基因mRNA表达水平(P<0.05),并且显著上调IL-10、TGF-β基因mRNA表达水平(P<0.05)。由此可知,黑酵母β-1,3/1,6-葡聚糖能抑制肠炎沙门氏菌感染引起的肠道上皮细胞免疫炎症反应。

β-t，3／1，6-葡聚糖制剂对凡纳对虾生长及免疫力的影响

研究了从啤酒酵母泥悬液中提取的β-1，3／1，6-葡聚糖制剂(含25％β-1，3／1，6-葡聚糖)对凡纳对虾生长及免疫力的影响。基础饲料中分别添加3个水平(0．1％，0．2％和0．4％)的β-葡聚糖制剂配制成3种实验饲料，以基础饲料作为对照组。实验饲料采取间隔投喂的策略，即每投喂15天实验饲料后再投喂15天对照饲料，整个饲养试验持续60天。饲养试验结束后，无论是投喂3种实验饲料还是对照饲料，对虾的成活率都很高(94．7％～100．0％)，各处理间无显著差异(P＞0．05)。然而，投喂0．2％或0．4％β-葡聚糖制剂的实验组的增重率显著高于(P＜0．01)对照组；投喂β-葡聚糖制剂的3个实验组的饲料系数显著低于(P＜0．01)对照组。此外，投喂β-葡聚糖制剂的实验组，对虾血细胞酚氧化酶活性和吞噬活性都显著高于(P＜0．01)对照组。无论是增重率还是免疫指标，投喂β-葡聚糖制剂的3个实验组彼此之间无显著差异(P＞0．05)。60天的饲养试验结束后，通过注射白斑杆状病毒(WSSV)进行对虾攻毒试验。在攻毒后的14天内，对照组的累计死亡率显著高于(P＜0．01)β-葡聚糖实验组。攻毒后第14天，3个β-葡聚糖实验组的免疫保护力为75％～80％。根据本研究结果可以得出如下结论：1)饲料中添加β-葡聚糖可以促进凡纳对虾生长并提高免疫力和抗病力；2)在本投饲策略下，全周期养殖期间投喂β-葡聚糖是安全的，不会产生免疫疲劳或其他副作用；3)从提高免疫力的角度，凡纳对虾饲料中β-葡聚糖制剂的添加量推荐为0．1％；若考虑促进生长，则添加量建议上升到0．2％。

黑酵母β-1,3-1,6-葡聚糖对小鼠肿瘤及免疫功能的影响

目的:探讨黑酵母β-1,3-1,6-葡聚糖对S180腹水移植瘤荷鼠瘤体生长以及免疫功能的影响。方法:建立BALB/c小鼠S180腹水移植瘤模型,每日给予β-1,3-1,6-葡聚糖干预,并测量瘤体积。21d后,检测小鼠血清中10种细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、IFN-γ、TNF-α、TNF-β和G-CSF的水平,以及CD4、CD8、补体C3、IgG和IgM的含量。结果:β-1,3-1,6-葡聚糖能显著抑制S180移植瘤的生长(P<0.01)。与空白对照组比较,多糖灌胃组小鼠血清中细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、TNF-α、TNF-β、IFN-γ和G-CSF水平显著上升(P<0.01,P<0.05)。CD4、CD8、CD4/CD8、补体C3、IgG和IgM含量也明显增加(P<0.01,P<0.05)。结论:β-1,3-1,6葡聚糖对S180腹水移植瘤生长具有明显抑制作用,其机制可能是通过促进细胞免疫和体液免疫的功能而实现的。

β-1,6葡聚糖纤维素的临床应用

目的 :观察以 β 1,6葡聚糖为主要成分的纤维素对血脂和血糖的调节作用。 方法 :根据相应的标准从体检人员中筛选出高脂血症、糖耐量减低和便秘患者。高脂血症患者每天服用纤维素 8g ,其间不控制饮食 ,不服降脂药物 ,观察 1个月 ,测定观察前后患者血清甘油三酯和胆固醇水平 ;糖耐量减低者分为三组 ,均不服用降糖药物 :对照组只进行一次饮食控制教育 ;而饮食控制组每 2个月进行一次膳食控制教育 ;服用纤维素组在饮食控制教育的基础上、每天服用 8g纤维素。实验前及观察 6个月后 ,分别进行口服葡萄糖耐量试验。结果 :每日服 8g纤维素 1个月 ,受试者血清甘油三酯由 (4 .39± 4 .0 9)mmol/L降到 (2 .5 6± 1.91)mmol/L ;血清胆固醇由 (6 .6 3± 0 .6 3)mmol/L降到 (5 .4 9± 1.11)mmol/L。与对照组相比 ,纤维素组口服葡萄糖后 2h血糖略有下降 ,但差别不显著。对照组转归为糖尿病的比例最高 ,达 36 .36 % ,而纤维素组仅为 18.8% ,两组间有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :服用纤维素可减少糖耐量减低者转归为糖尿病。

β-1,3/1,6-葡聚糖对肠炎沙门氏菌感染Caco-2细胞抗氧化功能的影响

本试验旨在探讨sophyβ-1,3/1,6-葡聚糖对肠炎沙门氏菌感染Caco-2细胞抗氧化功能的影响。选用Caco-2细胞作为试验模型,分别用MEM(A组)、β-1,3/1,6-葡聚糖(B组)、肠炎沙门氏菌(C组)处理Caco-2细胞,以及先用β-1,3/1,6-葡聚糖预处理,再用肠炎沙门氏菌处理(D组),每个处理3个重复。结果表明,沙门氏菌感染3与12h时Caco-2细胞上清中总抗氧化酶(T-AOC)活性显著升高(P<0.05),与对照组相比,C组Caco-2细胞上清中丙二醛(MDA)水平在沙门氏菌感染3h时显著下降,但感染12h后显著升高(P<0.01);添加β-1,3/1,6-葡聚糖可以显著升高12h细胞上清中总抗氧化酶(T-AOC)活性(P<0.01),并且有降低12h细胞培养上清中MDA水平和增加超氧化物歧化酶(SOD)活力,以及降低细胞裂解液中GSH水平的趋势。结果提示,β-1,3/1,6-葡聚糖可以通过增强T-AOC活力和下调MDA水平来提高细胞抗氧化能力,缓解由肠炎沙门氏菌引起的过氧化损伤。

β-1,3/1,6-葡聚糖的免疫调控机理及其在畜牧生产中的应用

葡聚糖是一种广泛分布于自然界中的一类生物细胞壁成分,由葡萄糖聚合而成。来源和结构不同的葡聚糖表现出不同的生理功能,其中以β-1,3和β-1,6糖苷键连接而成的微生物源β-葡聚糖存在有效的免疫调控功能,在畜牧生产中具有良好的应用前景。本文结合国内外近年的研究结果,对此类β-葡聚糖的结构功能及其在畜牧行业的研究现状作一综述,以期为β-1,3/1,6-葡聚糖在畜牧生产中的应用提供参考。

β-1,3-葡聚糖内切酶合成、制备及应用研究进展

β-1,3-葡聚糖内切酶是一类广泛存在于细菌、真菌和某些植物中,并能够水解β-葡聚糖产生不同分子量葡聚糖的酶。低分子量葡聚糖具有抗菌、抗氧化、免疫调节和抗肿瘤的生理活性,已在医药、食品、化工等多个领域显现良好的应用前景。目前生产低分子量葡聚糖的方法主要包括物理、化学和酶降解法。相较于物理和化学降解法,酶降解法具有催化效率高、反应条件温和、收率高及对环境友好等特点,但现阶段已开发的β-1, 3-葡聚糖内切酶的酶活性和稳定性仍无法满足工业化生产的需求。因此,开发适用于工业化生产的β-1,3-葡聚糖内切酶,已成为跨越通过降解高分子量葡聚糖制备低分子量葡聚糖技术壁垒的关键。本文系统介绍了β-1,3-葡聚糖内切酶的合成调节、特点、用于低分子量葡聚糖的制备以及工艺的优化等方面的研究进展,为促进β-1,3-葡聚糖内切酶的研究和工业化应用提供参考。

糖熏色素5-(葡萄糖基-α-1-6-葡萄糖)-羟甲基糠醛形成机理的量子化学计算

为探究糖熏色素5-(葡萄糖基-α-1-6-葡萄糖)-羟甲基糠醛(5-(α-D-glucopyranosyl-(1-6)-α-D-glucopyranosyloxymenthyl)-2-furancarboxaldehyde,5-GGMF)的形成途径,采用量子化学计算对蔗糖的热分解反应位点、葡萄糖与5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethylfurfural,5-HMF)及两分子葡萄糖间的脱水反应方式、5-HMF和5-GGMF的形成路径进行分析。结果表明:蔗糖热分解的初始位置为果糖基-氧键的裂解;葡萄糖与5-HMF或两分子葡萄糖间发生相互作用时,均是范德华力在复合物中起主导作用,且都会因为强氢键作用促进分子间脱水反应的发生;蔗糖形成5-HMF时,其热解后形成的葡萄糖部分比果糖部分生成5-HMF需要更大的活化能且反应速率更低,因此果糖部分更容易形成5-HMF,而在果糖部分形成5-HMF的两条路径中,路径5比路径4更容易发生,因为路径5在能量上和反应动力学上都表现出明显的优势;在蔗糖形成5-GGMF的途径中,转糖基化路径能垒总体较低,相较于二糖脱水路径和三糖脱水路径都更加有利,其中路径C2,即蔗糖热解生成果糖和葡萄糖,然后葡萄糖与5-HMF反应先生成5-葡萄糖氧甲基糠醛,后者再与一分子游离的葡萄糖生成5-GGMF,此路径最有利于5-GGMF的生成,无论是从能垒角度,还是动力学上的可行性。本研究结果可为今后控制和干预糖熏产品的色泽提供理论依据和参考。

一株高产水溶性β-1,3-葡聚糖的棕鞭藻高密度异养培养

棕鞭藻作为一种淡水藻类,能够用于生产水溶性β-1,3-葡聚糖。为了提高棕鞭藻的生物量,增加其水溶性β-1,3-葡聚糖的产量,笔者在7.5 L发酵罐中对棕鞭藻的异养培养基和异养培养条件进行了优化,同时也在125 L发酵罐中进行工艺放大验证。实验结果表明:采用优化后的培养基和培养条件,棕鞭藻在7.5 L发酵罐中培养,生物量达到61.25 g/L,与优化前相比提高了2.4倍;在125 L发酵罐中放大培养,棕鞭藻的生物量与7.5 L发酵罐中的培养结果相比无显著差异,水溶性β-1,3-葡聚糖的平均生产速率达到0.36 g/(L·h),较外籍文献报道的产率最高值0.13 g/(L·h)提高了1.8倍。该研究为棕鞭藻异养培养生产生物活性物质β-1,3-葡聚糖提供了依据,也为棕鞭藻在食品、医药和饲料等领域的应用创造了条件。

明胶/(1→3),(1→6)-β-葡聚糖聚合生物人造皮肤

明胶和β-葡聚糖通过冻干法制得多孔骨架。该骨架具有互联多孔结构,平均孔径为90～150μm。接触角和细胞附着的研究结果表明,在成纤维细胞的平面或立体培养过程中,高明胶含量有利于细胞的附着与分布,因为明胶含有酸性残余物和精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸基团。为了制备分层创伤敷料来摸拟正常人体皮肤,我们从儿童的包皮中分离出成纤维细胞和角化细胞。并将他们协调培养在用1-乙基-(3,3-二甲基甲丙胺)碳二酰亚胺氢氯化物交联的明胶/β-葡聚糖骨架中。活体研究表明,一周之后,含成纤维细胞的人造皮肤促进了全厚皮肤创伤的表皮再生,而非细胞骨架则没有这种作用。

circLRP6调节miR-31-5p/HMGA1轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

目的分析circLRP6调节miR-31-5p/高迁移率族蛋白A1(HMGA1)轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响。方法体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,分为对照组、高糖组、高糖+si-NC组、高糖+si-circLRP6组、高糖+si-circLRP6+miR-NC组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-NC组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-HMGA1组,对照组置于含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基内培养,其余各组置于含25 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基内培养,并通过Lipofectamine 2000将相应质粒转染至HK-2细胞内,实时定量PCR测定细胞circLRP6、miR-31-5p、HMGA1 mRNA水平,试剂盒测定细胞上清液白细胞介素-6(IL-6)水平、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及丙二醛(MDA)含量;流式细胞仪观察细胞凋亡;Western blotting测定细胞HMGA1、Bax、Bcl-2蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验分析miR-31-5p与circLRP6、HMGA1的靶向关系。结果与对照组相比,高糖组HK-2细胞circLRP6水平升高,细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P<0.05);与高糖组相比,高糖+si-circLRP6组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(均P<0.05);与高糖+si-circLRP6组相比,高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P<0.05);与高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组相比,高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-HMGA1组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(均P<0.05)。miR-31-5p与circLRP6、HMGA1均具有靶向关系。结论沉默circLRP6可能通过上调miR-31-5p,抑制HMGA1表达,对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤发挥保护作用。