27-羟基胆固醇在乳腺癌进展中的作用及分子机制研究进展

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,也是女性癌症死亡的主要原因。高胆固醇血症和肥胖是乳腺癌发病的潜在危险因素,体内高胆固醇水平与乳腺癌的发展密切相关。然而,胆固醇代谢产物对乳腺癌进展的影响尚未完全阐明。胆固醇在体内有多种代谢产物,其中27-羟基胆固醇(27-hydroxycholesterol,27HC)是人体内循环水平最高的胆固醇羟基代谢物,是胆固醇促进乳腺癌发展的重要因素,可在促血管生成、上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)、内皮-间质转化(endothelial-to-mesenchymal transition,EndMT)及抑制免疫功能等多方面促进乳腺癌的侵袭转移。

25-羟基胆固醇通过调控干扰素调节因子4抑制CD4^(+)T细胞IL-17的表达

目的探讨25-羟基胆固醇(25-hydroxycholesterol,25-HC)对人外周血单个核细胞(PBMCs)产生IL-17的抑制作用及其机制。方法用抗人CD3抗体联合抗CD28抗体刺激培养外周血单个核细胞(PBMCs)和纯化CD4^(+)T细胞,加或不加25-HC进行培养,ELISA、ELISPOT和PCR检测IL-17和IFN-γ的表达;流式细胞术检测T细胞转录因子(RORγt、RUNX1和IRF4)的表达、细胞表面活化分子的表达以及T细胞分裂增殖情况。通过电转染过表达IRF4,检测其对IL-17表达的影响。结果25-HC呈时间和剂量依赖的方式抑制T细胞产生IL-17,且主要抑制CD4^(+)T细胞中IL-17的表达。进一步研究发现,25-HC抑制T细胞晚期活化分子的表达和细胞分裂增殖,抑制IL-17相关转录因子IRF4的表达;过表达IRF4后,25-HC对IL-17表达的抑制作用被恢复。结论25-HC抑制Th17细胞的活化和增殖,并通过下调IRF4的表达抑制CD4^(+)T细胞产生IL-17。25-HC可能是IL-17相关炎症性疾病的一个具有前景的调控靶点。

25-羟基胆固醇的合成及路线优化

以猪去氧胆酸为起始原料,经酯化、上保护、还原、氧化、缩合、水解、酯化、环氧化、还原等九步反应,制备25-羟基胆固醇,总收率30%。目标产物结构经^(1)HNMR和 ^(13)CNMR鉴定。

(25R)-27-羟基胆固醇的合成研究

以薯蓣皂苷元为起始物,经克莱门森还原,羟基保护,脱羟基等步骤,以51%总收率得到目标分子(25R)-27-羟基胆固醇。

(25R)-26-羟基胆固醇的合成研究

本研究对(25R)-26-羟基胆固醇的合成路线及方法进行了改进。以薯蓣皂苷元为起始物,经开环反应得到(25R)-3-羟基基胆甾-5-烯-16,26-二醇,再经叔丁基二甲基氯硅烷保护C3-和C26-位羟基后依次经磺酰化、四氢铝锂还原得到(25R)-3,26-二叔丁基二甲硅氧基-5-烯,最后经四丁基氟化铵脱保护得到(25R)-26-羟基胆固醇,总收率54%。改进后路线具有条件温和,分离纯化简便等优点。所合成关键中间体及目标化合物经核磁氢谱、高分辨质谱确证。

25-羟基胆固醇促进培养的家兔主动脉中膜细胞体外钙化

为研究主动脉中膜细胞体外钙化情况以及 2 5 -羟基胆固醇对此过程的促进作用 ,采用贴块法分离培养主动脉中膜细胞 ,并进行vonKossa染色以显示钙化 ,生物化学检测细胞不溶性钙 ,放射免疫法测定培养上清液中骨钙素含量。发现原代细胞有两种生长表现 :一种细胞平行生长 ,不形成结节 ,vonKossa染色阴性 ;另一种易形成结节 ,vonKossa染色阳性。对照组传代细胞培养 2 8天无结节形成 ,vonKossa染色阴性。而实验组 ,即 2 5 -羟基胆固醇处理组有细胞结节形成 ,vonKossa染色阳性 ,培养上清液中骨钙素增多。由此可见体外培养的主动脉中膜细胞有两种亚型 ,一种为平滑肌细胞的表型 ;另一种为微血管周细胞型细胞 ,能使其细胞外基质钙化。 2 5 -羟基胆固醇可以促进这一体外钙化过程。周细胞型细胞钙化过程中骨钙素合成增多 ,推测骨钙素可能参与了主动脉的钙化。

27-羟基胆固醇激活LXR信号通路调节肺癌细胞的增殖

目的:探讨胆固醇代谢产物27-羟基胆固醇(27-OHC)对肺癌细胞增殖的影响。方法:采用不同浓度(0、0.3125、0.625、1.25、2.5、5和10μmol/L)的27-OHC处理人肺癌A549细胞24～48 h,随后使用细胞计数试剂盒(CCK-8法)评估细胞活力,采用流式细胞术检测细胞周期,Ed U实验检测细胞增殖状况,采用总胆固醇检测试剂盒检测细胞内胆固醇水平,real-time PCR及Western blot法分别检测胆固醇代谢相关分子的表达。结果:27-OHC以剂量和时间依赖性显著降低A549肺癌细胞的活力(P <0.01),抑制细胞增殖(P <0.05)。27-OHC通过上调肝X受体(LXR)信号通路下游靶蛋白ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)的表达,促进细胞内胆固醇的外排,同时下调低密度脂蛋白受体(LDLR)和3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMG-CR)的表达,减少胆固醇的摄入和从头合成,导致细胞内胆固醇水平降低,细胞活力下降(P <0.01)。此外,LXR通路被5μmol/L GSK2033部分阻断后,27-OHC对A549细胞活力的抑制作用显著减弱(P <0.05)。结论:27-OHC通过激活LXR通路抑制A549细胞增殖。

二甲基二氧杂环丙烷的制备及在25-羟基胆固醇合成中的应用

以胆固醇为起始原料,经酰化、溴代、二甲基二氧杂环丙烷氧化、还原等4步反应合成了25-羟基胆固醇,总收率为62.7%,其结构经~1HNMR和^(13)CNMR鉴定。

液态乳中胆固醇、7-脱氢胆固醇及25-羟基胆固醇的同步测定方法

试验优化了液态乳胆固醇的皂化条件(皂化时间、温度和皂化试剂添加量),采用高效液相色谱法同时测定乳品中胆固醇、7-脱氢胆固醇和25-羟基胆固醇的含量。结果表明,1 m L液态乳最佳皂化条件:80℃下2.0mL 2 mol/L KOH皂化20 min,液态乳的胆固醇含量为10.824 mg/100g;采用Eclipse plus C18 (4.6 mm×250mm,5μm)色谱柱,以甲醇为流动相,流速0.8 mL/min,在205 nm和227 nm两个波长下分离3种胆固醇,分离效果较好。胆固醇、7-脱氢胆固醇和25-羟基胆固醇分别在0.0967～0.9959 mg/mL、0.0120～0.2011 mg/mL和0.1237～0.1998 mg/mL范围内呈现良好的线性关系(R2=0.9999,R2=0.9996,R2=0.9992);胆固醇、7-脱氢胆固醇和25-羟基胆固醇的精密度试验RSD分别为0.619%,3.562%,1.696%;稳定性试验RSD分别为0.545%,1.248%,2.798%;重现性试验的RSD为1.105%,1.446%,5.284%;回收率分别为99.5%,67.6%,47.4%。该方法操作简单,试剂用量小,耗时短,结果准确可靠,可用于液态乳中胆固醇的准确测定。此外,本试验应用该方法测定了13种液态乳,发现除了母乳样品中含有少量的7-脱氢胆固醇和25-羟基胆固醇外,其它奶制品中均未检测出。

胆固醇代谢产物27-羟基胆固醇与肿瘤发生发展研究进展

全球肥胖人群逐年递增,大量文献数据报道,肥胖提高肿瘤相关疾病的发病率。高胆固醇饮食与肿瘤发病率呈正相关。近年来研究发现,肥胖会引起一些小分子物质在肿瘤发生发展过程中起到生理病理作用,进而促进肿瘤恶化。胆固醇代谢产物27-羟基胆固醇(27-HC)可以作为雌激素受体的配基,促进多种肿瘤细胞增生。本综述总结了目前对于27-羟基胆固醇与肿瘤发生发展的研究现状,为研究人员提供了新的研究方向,为肿瘤治疗提供了新的临床策略。

25-羟基胆固醇的免疫调控作用及其对结核肉芽肿形成的意义

胆固醇25-羟化酶(CH25H)是一种内质网相关酶,可氧化胆固醇生成25-羟基胆固醇(25HC)。25HC是巨噬细胞产生并分泌的唯一氧固醇,在不同生物学过程中发挥重要免疫作用,包括抗病毒效应、炎症反应、信号转导等。研究发现体内25HC高表达或体外经25HC处理均能诱导巨噬细胞泡沫化。肉芽肿是结核分枝杆菌感染后形成的特征性标志物,大量研究证实泡沫细胞参与肉芽肿形成的全过程,但CH25H/25HC通路及其介导巨噬细胞泡沫化在结核肉芽肿发生发展中的作用尚未见报道。本文将对25HC的免疫调控进展进行讨论,并重点探究25HC在结核肉芽肿形成过程中的作用,以期为研究结核病发病机制与治疗的研究提供新线索。

27-羟基胆固醇在乳腺癌、前列腺癌和子宫内膜癌发生发展中的作用

血浆中最丰富的胆固醇初级代谢产物27-羟基胆固醇(27HC)是肝X受体(LXR)配体激动剂和内源性选择性雌激素受体调节剂(SERM),具有雌激素样作用,能促进肿瘤生长。研究发现27HC是多种恶性肿瘤发病的危险因素,参与肿瘤的发生,肿瘤微环境的调节以及肿瘤细胞增殖、血管生成、肿瘤细胞侵袭、迁移和转移等过程。同时,调控27HC含量的关键酶的表达也与27HC在肿瘤中的作用密切相关,可作为乳腺癌、前列腺癌等疾病预后复发的预测及监测生物标志物。本综述重点介绍了近年来27HC在乳腺癌、前列腺癌和子宫内膜癌中的研究成果,阐述了27HC在肿瘤生理病理过程中的雌激素受体(ER)和LXR依赖性作用及其对其它信号通路的调控作用,为防治相关癌症提供了新的理论依据和思路。

二甲双胍对27-羟基胆固醇诱导的HT22细胞损伤的保护作用

目的:探究二甲双胍(Met)对27-羟基胆固醇(27-HC)诱导的HT22细胞损伤的保护作用。方法:将HT22细胞分为对照组(control)、27-HC处理组(27-HC)和27-HC联合Met处理组(27-HC+Met)。采用MTT法确定27-HC诱导HT22细胞损伤模型的最佳浓度及不同浓度的Met对细胞活性的影响,确定Met的最佳预保护浓度;利用Hoechst 33342染色观察细胞凋亡;利用商品化的试剂盒检测HT22细胞中超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性;利用Western Blot法检测HT22细胞中NMDA受体亚单位2B(NR2B)和AMP活化蛋白激酶(AMPK)蛋白表达及AMPK蛋白的磷酸化水平。结果:与对照组相比,27-HC诱导后的HT22细胞活性显著下降(P <0.05),细胞形态异常且凋亡细胞增加,LDH活性升高,SOD活性降低,NR2B的表达和p-AMPK水平降低;Met预处理后,细胞活性提高,细胞形态趋于正常且凋亡细胞减少,LDH活性降低,SOD活性升高,NR2B的表达和p-AMPK水平增加。结论:Met通过AMPK/NR2B信号通路调节细胞氧化应激水平,发挥对27-HC诱导的HT22细胞损伤的保护作用。

27-羟基胆固醇对神经细胞和星形胶质细胞溶酶体胆固醇转运相关因子表达的影响

目的探讨27-羟基胆固醇(27-hydroxycholesterol,27-OHC)在神经细胞(SH-SY5Y)和星形胶质细胞(C6)共培养体系中对细胞溶酶体胆固醇转运相关因子表达的影响。方法采用Trans-well小室进行SH-SY5Y细胞和C6细胞共培养,使用不同剂量的27-OHC对共培养体系下细胞进行处理,分为对照组(DMEM组)、低剂量组(27-OHC 5μmol/L)、中剂量组(27-OHC 10μmol/L)及高剂量组(27-OHC 20μmol/L)。采用COD-PAP法检测两种细胞中的总胆固醇浓度;采用Real-time PCR和Western blotting检测两种细胞溶酶体内特异性胆固醇转运蛋白质——尼曼匹克蛋白质1(Niemann-Pick C protein 1,NPC1)、NPC2的基因表达水平和蛋白质表达水平。结果随着27-OHC处理浓度的升高,SH-SY5Y细胞内胆固醇浓度逐渐上升(P <0. 05),C6细胞内胆固醇浓度逐渐降低(P <0. 05); SH-SY5Y细胞溶酶体内NPC基因及蛋白质表达水平显著下调(P <0. 05); C6细胞内溶酶体NPC基因及蛋白质表达水平显著上调(P <0. 05)。结论 27-OHC可引起神经细胞及星形胶质细胞溶酶体内胆固醇转运障碍,使胆固醇在神经细胞溶酶体内蓄积。

多羟基甾醇25(R)-异螺甾环-5-烯-2β,3α,19-三醇的合成

以薯蓣皂素为原料,经过磺酰酯化、N-溴代丁二酰亚胺(NBS)氧化加成、Pb(OAc)4远程氧化关环、消去反应、间氯过氧苯甲酸(mCPBA)氧化、高氯酸开环及锌粉还原7步反应,合成多羟基甾体25(R)-异螺甾环-5-烯-2β,3α,19-三醇.并用IR,1H NMR,13C NMR,MS及元素分析对各中间体及目标化合物进行了表征.

胆固醇-25-羟化酶基因抗病毒功能研究进展

胆固醇-25-羟化酶(cholesterol-25-hydroxylase,CH25H)为干扰素刺激基因,可通过其酶活性产物25-羟基胆固醇(25-hydroxycholesterol,25HC)发挥广谱的抗病毒作用。本文对CH25H的结构、酶活作用、脂肪代谢通路、抗病毒功能以及在免疫中的作用进行了综述。

早期EC患者外周血27-HC预测保留生育功能术后复发的价值

目的 分析早期子宫内膜癌(EC)患者保留生育功能术后外周血27-羟基胆固醇(27-HC)水平对疾病复发的预测价值,为临床早期制定防治措施提供参考。方法 选取我院2018年1月至2020年12月接收的EC患者106例,均采用保留生育功能的宫腔镜电切术治疗;所有患者术后随访2年,观察疾病复发情况并分组(复发组与未复发组)。记录患者临床资料及术后血清27-HC水平,重点分析术后血清27-HC水平对疾病复发的预测价值。结果 106例患者术后随访2年期间肿瘤复发11例,占10.38%(11/106);与未复发组相比,复发组体质指数、合并高脂血症占比较高,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析发现,体质指数、血清27-HC水平是EC患者保留生育功能手术后复发的影响因素(P<0.05);受试者工作特征(ROC)曲线分析发现,EC患者保留生育功能手术后血清27-HC水平预测术后疾病复发的曲线下面积为0.752,具有一定预测价值。结论 早期EC患者保留生育功能术后血清27-HC水平会影响疾病复发情况,能对疾病复发风险进行良好的早期预测。

利用薯蓣皂甙元完整骨架形式合成1α,25-二羟基维生素D_3

首次利用薯蓣皂甙元的完整骨架经16步反应以7.6%的总收率合成了骨化三醇(1α,25-二羟基维生素D3)的光化反应前体.3-苄基保护的薯蓣皂甙元经还原开E/F环产生3,16,26-胆甾三醇-3-苄醚(5).除去化合物5C-16羟基后,其C-26羟基经消除和羟基化反应转移到C-25位.目标分子A/B环结构单元通过薯蓣皂甙元A/B环的官能团转化被构筑.按照已知的光化反应,(1S,3R)-胆甾-5,7-二烯-1,3,25-三醇能被转化成为1α,25-二羟基维生素D3.

不同剂量川芎-当归、三棱-莪术对AS小鼠Cyr61、Sgk1、Ch25h基因表达水平的影响

目的:探讨不同剂量川芎-当归、三棱-莪术对载脂蛋白E(Apoe)基因缺陷小鼠动脉粥样硬化(AS)模型主动脉组织Cyr61、Sgk1、Ch25h基因表达水平的影响。方法:将64只5周龄Apoe基因缺陷小鼠按随机数字表法分为模型对照组、阿托伐他汀钙组、低活血药组、高活血药组、低破血药组、高破血药组6组,造模成功后分别灌胃给药连续8周,处理动物并用基因芯片技术检测小鼠主动脉组织中差异表达基因,并通过RT-PCR法进行验证。结果:川芎-当归、三棱-莪术均能下调Cyr61、Sgk1、Ch25h基因表达水平且存在量效关系。结论:活血药(当归、川芎)、破血药(三棱、莪术)具有抗动脉粥样硬化的作用,其作用机制可能与调节主动脉Cyr61、Sgk1、Ch25h基因表达水平有关。

2型糖尿病合并冠心病患者的血清25-羟基维生素D和血脂水平变化及其相关性

目的:回顾性分析2型糖尿病(T2DM)合并冠心病(CHD)患者血清25-羟基维生素D[25(OH)VitD]和血脂水平变化及其相关性。方法:2017-03-2018-03武汉大学中南医院收治的129例T2DM合并CHD患者,按其血清25(OH)VitD水平分为25(OH)VitD缺乏组(A组,n=93)和25(OH)VitD正常组(B组,n=36)。比较分析两组25(OH)VitD、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖(FBG)水平差异以及25(OH)VitD与上述指标的相关性。结果:A组25(OH)VitD显著低于B组(P<0.01),TC、LDL-C水平明显高于B组(均P<0.05),TG、HDL-C、FBG水平两组无显著差异(均P>0.05)。T2DM合并CHD患者血清25(OH)VitD与TC、LDL-C水平呈显著负相关(P<0.05),25(OH)VitD与TG、HDL-C和FBG无明显相关性(P>0.05)。结论:T2DM合并CHD患者VitD缺乏,胆固醇代谢不良。