2018年盐城市CVA6型肠道病毒全基因组分子特征分析

目的掌握盐城市肠道病毒CVA6型基因进化特征。方法对盐城市鉴定为CVA6型的肠道病毒,通过反转录聚合酶链式反应的方法扩增全基因组序列,扩增产物经纯化测序,采用相应的生物信息软件进行核苷酸及氨基酸序列比对、分子进化树构建以及重组分析。结果盐城市2018年共检测疑似疱疹性咽峡炎病例107例,肠道病毒核酸阳性率73.83%,其中CVA6、CVA16、其他肠道病毒分别占50.63%、5.06%、44.30%,未检出EV71。选取3株2018年疱疹性咽峡炎、3株2018年手足口病(流行月峰前、峰中、峰后)、1株2017年手足口病CVA6型代表株进行全基因组测序,遗传进化树显示:7株盐城株位于B进化分支B2基因亚群分支,3株疱疹性咽峡炎CVA6型代表株与2株2018年手足口病CVA6型毒株聚集成簇构成一进化小分支,2株手足口病毒株(2017年、2018年各1株)形成独立的进化小分支,形成2条传播链。选取2个进化小分支中疱疹性咽峡炎、手足口病CVA6型各1株,进行分子进化重组分析,均未发现明显的重组来源。结论2018年盐城市疱疹性咽峡炎的病原谱呈现遗传多样性,CVA6型肠道病毒为优势流行株,与手足口病的CVA6型肠道病毒可能有着共同的来源,盐城株未发现基因重组。

牛HSPA6蛋白特性分析及蛋白互作网络构建

通过构建牛热休克蛋白A6(heat shock protein A6,HSPA6)序列与其他生物的系统进化树,以及运用生物信息学方法分析牛HSPA6蛋白的基本理化性质、亲疏水性等,并结合蛋白互作网络,探究牛HSPA6基因编码蛋白的结构和功能特性。结果显示,牛HSPA6蛋白与羊、长江江豚等哺乳动物的氨基酸序列相似性较高;牛HSPA6蛋白分子质量为70 570.64 u,理论等电点为5.66,为酸性亲水性蛋白,无跨膜结构和信号肽;可能存在11个得分>0.900的磷酸化位点,与N-糖基化激活位点可能位于后端碱基;牛HSPA6蛋白是一种主要由40.38%的α-螺旋和33.65%的无规卷曲组成的二级结构相对稳定的蛋白质,包含N-端核苷酸结合域和C-端多肽结合域两个主要的结构域,主要在细胞质中发挥作用;蛋白质互作网络构建结果显示,牛HSPA6蛋白主要与BAG1、DNAJA4、DNAJB1、DNAJC2等蛋白发生互作,参与腺苷酸交换因子活性、ATP酶调节活性、伴侣绑定等,表明牛HSPA6蛋白在牛机体能量代谢等过程中发挥潜在生物学功能。这些多重生物信息学分析为深入探讨牛HSPA6蛋白对肉品质的影响机制提供了理论依据。

银川市2016-2022年手足口病柯萨奇病毒A6型分离株VP1基因特征分析

目的 分析银川市2016-2022年引起手足口病的柯萨奇病毒A6型(CV-A6)VP1的基因特征,为手足口病的防治工作提供有效的参考依据。方法 收集2016-2022年银川市手足口病所有CV-A6核酸呈阳性的标本进行病毒分离培养,应用一步法聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增其VP1区完整基因核酸片段进行核苷酸序列测定,利用测序结果进行系统发育树构建、同源性分析及氨基酸突变位点分析。结果 2016-2022年银川市共分离到手足口病CV-A6型毒株90株,测序后成功获得CV-A6 VP1区全长序列的毒株83株。完整VP1区基因均由915个核苷酸组成,编码305个氨基酸。系统发育分析显示,2016-2022年银川市83株CV-A6分离株均属于D3基因亚型的D3a分支;同源性分析表明,银川市83株CV-A6分离株与原型株Gdula株(AY421764-USA-1949)之间核苷酸相似性为82.1%~84.1%,氨基酸相似性为76.2%~80.5%,遗传距离较远;银川市83株CV-A6分离株与原型株Gdula株的VP1区氨基酸序列比较发现32个氨基酸位点出现变异。结论 2016-2022年银川市手足口病83株CV-A6分离株均属于D3基因亚型的D3a分支。加强对CV-A6的持续监测及基因特征分析,对科学防控CV-A6引起的手足口病及其疫苗研发具有重要意义。

浸润性乳腺癌患者血清外泌体膜联蛋白A6表达水平与治疗反应的关系

目的探讨血清外泌体膜联蛋白A6(ANXA6)在浸润性乳腺癌(IBC)患者中的诊断及预后预测价值,以及与新辅助化疗/他莫昔芬辅助内分泌治疗反应之间的关系。方法选取2014年1月至2017年3月在该院进行手术且有腋窝淋巴结的100例IBC患者作为IBC组,其中50例术前接受新辅助化疗,50例术后接受他莫昔芬辅助内分泌治疗。另选取同期50例成年女性作为非癌对照组。入组后收集所有研究对象血液标本。对于辅助内分泌治疗的IBC患者,进一步收集术中肿瘤组织标本和辅助内分泌治疗前24 h的血清标本。分离血清外泌体,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清外泌体和肿瘤组织标本中ANXA6的表达水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清外泌体ANXA6和糖类抗原15-3(CA15-3)对IBC的诊断价值。采用Spearman相关对血清ANXA6表达水平与肿瘤组织ANXA6表达水平的相关性进行分析。结果IBC组入组时血清外泌体ANXA6相对表达水平高于非癌对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,入组时血清外泌体ANXA6诊断IBC的AUC为0.844(95%CI:0.792~0.896),明显大于CA15-3的0.715(95%CI:0.653~0.786)。血清外泌体ANXA6高表达亚组肿瘤最大径大于低表达亚组,国际妇产科联盟分期高于低表达亚组,差异均有统计学意义(P<0.05),且预示无复发生存结局不良。对于新辅助化疗和他莫昔芬辅助内分泌治疗患者,血清外泌体ANXA6低表达亚组患者获得完全反应加部分反应的比例高于高表达亚组,差异有统计学意义(P<0.05)。入组时血清外泌体ANXA6表达水平与肿瘤组织ANXA6表达水平呈正相关性(r=0.490,P<0.05)。术后进行辅助内分泌治疗前血清外泌体ANXA6表达水平明显低于入组时,差异有统计学意义(P<0.05)。结论IBC患者血清外泌体ANXA6具备成为诊断和预测预后生物标志物的潜力,且高表达与新辅助化疗和他莫昔芬辅助内分泌治疗反应不良有关。

2013-2022年江苏省柯萨奇病毒A6型全基因组序列特征分析

目的 研究江苏省2013-2022年分离到的柯萨奇病毒A6型(CV-A6)全基因组序列特征及对全基因组各编码区进行遗传进化分析,以期从分子流行病学特征的角度解释CV-A6取代肠道病毒A71和柯萨奇病毒A16成为江苏省引起手足口病(HFMD)主要病原的原因。方法 选取2013-2022年间江苏省地区流行的35株CV-A6毒株进行全基因组测序,采用DNASTAR、MEGA7.0和Similarity plots3.5.1等软件对获取的全基因组序列进行比对、相似性分析、系统进化分析和基因重组分析,对P1编码区和3D区主要氨基酸变异位点进行分析。结果 35株CV-A6江苏毒株的全基因组核苷酸和氨基酸序列相似性分别为87.5%~99.6%和97.0%~99.8%,与CV-A6原型株Gdula/USA/1949的全基因组核苷酸序列相似性仅为80.3%~81.0%,氨基酸序列相似性为94.7%~95.3%。基于VP1序列的系统进化树结果显示,2013-2022年江苏省有34株CV-A6分离毒株分属于D3a基因亚型,1株分属于D2基因亚型;基于3D区进化树划分不同重组模式,2013-2022年江苏省流行的CV-A6出现过4个重组进化分支:RF-A、RF-L、RF-K和RF-C型。重组分析结果显示:江苏省流行的CV-A6毒株与CV-A6原型株Gdula/USA/1949在结构蛋白序列上具有较高的相似性。而在非结构蛋白和非编码区则与其他EV-A原型株序列相似性更高。而氨基酸突变位点分析结果显示,与原型株Gdula/USA/1949相比,P1区和3D区多个氨基酸位点变异频繁,可能会使得衣壳蛋白的结构、潜在的受体结合位点产生变化。结论 通过对2013-2022年江苏省CV-A6的全基因组序列分析,有助于了解江苏省CV-A6基因重组及遗传进化关系,解释了近年来CV-A6成为手足口病的主要病原体的可能原因,对CV-A6的防控工作提供了基础资料。

CEACAM6、miR-146b、S100A6在甲状腺癌中的表达及意义分析

目的探讨甲状腺癌组织中癌胚抗原相关细胞黏附分子6(carcinoembryonic antigen related cell adhesion molecule 6,CEACAM6)、miR-146b、钙结合蛋白A6(calcium-binding protein A6,S100A6)表达与临床病理特征以及预后的关系。方法选择我院收治的行甲状腺切除手术治疗的甲状腺癌患者165例,分别取癌组织和癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)检测CEACAM6、miR-146b、S100A6表达。采用t检验甲状腺癌患者不同临床病理特征间CEACAM6、miR-146b、S100A6表达差异,Kaplan-Meier和Cox比例风险模型分析CEACAM6、miR-146b、S100A6表达与甲状腺癌患者预后的关系。结果癌组织CEACAM6、miR-146b、S100A6表达高于癌旁组织(P<0.05),肿瘤直径>1 cm、低中度分化、T_(3)~T_(4b)期、N_(1a)~N_(1b)患者癌组织中CEACAM6、miR-146b、S100A6表达高于肿瘤直径≤1 cm、高度分化、T_(1)~T_(2)期、N 0患者(P<0.05)。CEACAM6高表达组、miR-146b高表达组、S100A6高表达组患者总生存率低于CEACAM6低表达组、miR-146b低表达组、S100A6低表达组(P<0.05)。N_(1a)~N_(1b)、CEACAM6高表达、miR-146b高表达、S100A6高表达是甲状腺癌患者不良预后的危险因素(P<0.05)。结论甲状腺癌组织中CEACAM6、miR-146b、S100A6均呈高表达,且与甲状腺癌肿瘤临床病理特征以及预后不良有关。

滤泡辅助性T细胞在柯萨奇病毒A6型手足口病患儿外周血中的表达及作用

目的探讨滤泡辅助性T细胞(Tfh)在柯萨奇病毒A6型手足口病(HFMD)患儿外周血中的表达水平及作用。方法采集2022年6月至2023年8月杭州市儿童医院收治的A6型HFMD患儿33例作为HFMD组,选择同期体检健康儿童26例作为健康人对照组,利用流式细胞术检测HFMD患儿和体检健康儿童外周血中的Tfh频数,分析并比较二者之间的关系。结果HFMD组和健康人对照组CXCR5^(+)CD4^(+)细胞占CD4^(+)T淋巴细胞的频数分别为3.95(2.31,6.21)%和1.44(0,94,2.43)%,两组之间差异有统计学意义(P<0.001)。HFMD组中ICOS^(+)CXCR5^(+)CD4^(+)和PD-1^(+)CXCR5^(+)CD4^(+)Tfh细胞频数分别为1.44(0.81,2.86)%和1.64(0.65,4.05)%,而在健康人对照组分别为0.84(0.27,1.46)%和0.47(0.13,1.12)%,两组之间差异有统计学意义(P<0.05);且两者均与CXCR5^(+)CD4^(+)细胞水平呈显著正相关(P均<0.05)。结论Tfh细胞在柯萨奇病毒A6型肠道病毒感染引起的HFMD患儿免疫反应中具有重要的作用。

2013年西安地区柯萨奇病毒A6流行情况及基因特征

目的 研究2013年西安地区普通手足口病（HFMD）病例中柯萨奇病毒A6型（CA6）的流行情况及其基因特征.方法 从2013年采集的普通HFMD病例标本中随机挑选250份非肠道病毒71型（EV71）非柯萨奇病毒A16型（CA16）的其他肠道病毒核酸阳性者,利用实时荧光逆转录酶联聚合反应检测CA6,扩增部分阳性标本VP1 （viral protein,VP）基因,并测定序列,与CA6其他参考序列比对,进行进化分析.结果 在250份样本中CA6阳性者共191份,阳性率为76.4％.进化分析显示西安地区2013年CA6与近年来流行于世界各地的CA6新变种同源性较高,而与原型株进化距离较远.序列比对发现本地毒株VP1与CA6新变种核苷酸序列相似性在89.7％～97.5％,编码氨基酸相似性为96.0％～99.7％;与CA6原型株及2006年以前中国大陆分离株核苷酸相似性为82.3％～83.8％,氨基酸相似性为93.8％～94.9％.结论 2013年西安地区HFMD普通病例病原以CA6为主,流行株为近年来流行于全球各地的CA6新变种.

2013～2014年杭州地区手足口病柯萨奇病毒A6型和A10型VP1基因特征分析

目的了解2013-2014年杭州地区手足口病病原谱的分布,并对其病原基因特征进行分析。方法采集2013年3月至2014年4月手足口病患儿标本1 340例,提取病毒核酸,通过逆转录和PCR扩增肠道病毒VP1序列并测序,经Blast比对确定病毒基因型。对柯萨奇病毒A6型（CA-A6）和A10型（CA-A10）VP1全长序列进行同源性比对分析,并构建系统进化树。结果1 340例手足口病患儿标本中,肠道病毒检出阳性率为81.43%（1 090/1 340）。其中,CV-A6阳性率为41.04%,取代EV-71（14.48%）成为杭州地区检出阳性率最高的肠道病毒;CV-A10检出率（8.51%）也高于CV-A16（3.81%）,列于第三位。同源性比对及系统进化分析显示,2013-2014年的25株CV-A6病毒核苷酸同源性为89.0%-99.7%,主要分布于G、H基因亚型;15株CV-A10病毒核苷酸同源性为95.3%-99.9%,分布于F、G基因亚型。结论 2013-2014年杭州地区儿童手足口病的主要病原体发生重大变化,CV-A6病毒成为最主要病原,CV-A10病毒也存在潜在威胁,需加强对其他肠道病毒的持续监测和分子特征分析。

柯萨奇病毒A6型VP1蛋白的生物信息学分析

目的：预测柯萨奇病毒A组6型（Coxsackievirus A6,CVA6）的衣壳蛋白VP1的基本理化性质、结构功能及线性B细胞表位。方法：应用Bioedit软件、Sub Loc、Target P和生物信息学资源门户Ex PASy中的多种在线工具对CVA6 VP1的氨基酸序列进行分析。结果：CVA6 VP1为一亲水性蛋白,其相对分子量为33.6 k D,等电点为7.92,含有24个可能的磷酸化位点,没有信号肽、跨膜区和可能的脂酰化位点;其二级结构中以无规则卷曲居多,有48.52%的氨基酸残基暴露于溶液界面;该分子内存在多个潜在的线性B细胞表位,其中的155～165位氨基酸残基区域的抗原指数最高。结论：成功预测到CVA6 VP1的基本理化性质、结构功能特征及可能的线性B细胞表位,为该蛋白的进一步研究及疫苗和免疫诊断试剂的研制打下基础。

福州地区2012年柯萨奇A6型肠道病毒分子特征分析

目的对2012年福州地区分离的其他肠道病毒CVA6进行分子鉴定，并对其VP1部分序列进化分析。方法肛拭子标本采用RD细胞进行病毒分离，通过RT—PCR对分离株的VP1部分序列进行扩增、克隆和测序；经过Blast程序比对来确定病毒的基因型；通过Mega4．0软件对不同病毒株VP1部分序列的差异进行比较。结果从10份其他肠道病毒患者的肛拭子标本中分离到6株CVA6病毒。测序结果显示，该6株CVA6病毒核苷酸序列具有高度一致性，但与福州周边国家或地区CVA6的核苷酸一致性为91．8％～97．3％。结论2012年福州市HFMD的病源除Ev71和CVA16外，还包含CVA6病毒。序列分析表明，因此，应加强对手足口病例中其他肠道病原体的检测，并掌握其流行以及病毒遗传进化特征，为HFMD的防控提供科学依据。

博来霉素A6和平阳霉素抗大肠癌实验研究

本研究应用体外细胞毒试验，小鼠结肠癌移植瘤及裸鼠移植人大肠癌模型，观察博来霉素A6（A6）和平阳霉素（PYM）对大肠癌的疗效。结果发现2种药物在体外对人大肠癌细胞有较强的活性。在1／9LD50等毒性剂量下，A6和PYM对小鼠结肠癌26皮下和盲肠移植瘤的生长有明显的抑制作用，2次实验结果：对小鼠结肠癌皮下移植瘤，A6的抑瘤率分别为87％和88％，PYM为86％和91％，丝裂霉素C（MMC）为64％和25％，5—氟脲嘧啶（5—FU）为45％和27％；对盲肠移植瘤，A6抑瘤率分别为99％和97％，PYM为100％和97％，MMC为77％和25％，5—FU均为44％。同样A6和PYM对裸鼠移植的人结肠癌HT－29的生长也有较强的抑制作用，A6对肿瘤生长的抑制率为82％，PYM为78％，MMC为53％，5—FU为12％。表明A6和PYM对小鼠结肠癌的裸鼠移植的人结肠癌的生长抑制作用均明显较MMC和5—FU为强，A6的作用似略较PYM为强，但二者间无明显差别；在抑制肿瘤生长的同时，A6和PYM还使肿瘤的组织学发生变化，肿瘤坏死明显增加和核分裂数减少。在治疗剂量下A6和PYM对带瘤小鼠和荷瘤裸鼠的骨髓有核细胞数均无明显影响。

柯萨奇A6型病毒致重症手足口病危险因素分析

目的探讨柯萨奇A6型病毒(CVA6)感染所致重症手足口病的危险因素。方法采用1∶1匹配的病例对照研究方法,收集深圳市宝安人民医院2015年5月-2016年11月实验室确诊的CVA6感染所致重症和轻症手足口病例各101例,采用向后逐步回归的多因素logistic回归方法筛选影响因素。结果出现丘疹、患儿经常咬玩具、照看人文化程度高中以下和发热最高体温≥39℃为CVA6感染所致重症的危险因素,母乳喂养和发病诊断时间间隔较短为保护因素。结论及早诊断和母乳喂养可降低CVA6所致重症手足口病风险,丘疹和高热可作为手足口病重症早期识别指征。

大鼠单克隆抗体与博来霉素A6偶联物治疗人大肠癌实验研究

用Dextran T-40为中介体偶联大鼠抗人大肠癌单克隆抗体R19和博来霉素A6。体外实验显示R19与A6偶联物对人盲肠癌细胞Hce-8693抑制50%克隆生成浓度(IC_(50))为0.019μmol/L;游离A6及无关单抗与A6偶联物M3-A6分别为1.05和1.00μmol/L;对人结肠HT-29细胞IC_(50)为0.078μmol/L,而游离A6为4.0μmol/L。同时加入R19单抗能阻断R19-A6偶联物的细胞毒性。体内实验显示:R19-A6偶联物对裸鼠移植的人盲肠癌生长的抑制率达90%,而同等剂量的游离A6,R19与A6混合物和M3-A6的抑制率分别为52,34和48%。结果表明单抗R19与A6偶联物对人大肠癌的抑制作用明显比游离A6强。

S100A6 siRNA对卵巢癌细胞生物学行为的影响

目的探讨S100A6蛋白表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响。方法以卵巢癌细胞A2780为研究对象，利用RNA干扰技术特异性降低S100A6表达水平后，分别用实时定量PCR和Western blot检测S100A6 siRNA对S100A6表达水平的抑制效率。用流式细胞术检测S100A6 siRNA转染前后A2780细胞的细胞周期变化，用Transwell试验观察S100A6siRNA转染前后侵袭能力的变化，用MTT法检测S100A6 siRNA对A2780细胞顺铂敏感性的影响。结果S100A6siRNA转染组细胞中S100A6 mRNA和蛋白表达水平与S100A6 siRNA呈浓度、时间依赖性明显下调，抑制效率可达63．75％～80．68％。在与空白对照组和阴性对照siRNA组相比，S100A6 siRNA出现了G0／G1期比例升高，S期比例降低，差异有统计学意义（X^2=6．211，P=0．045）。Transwell试验表明，6．25、12．5nmol／LS100A6 siRNA分别转染48h后，A2780细胞芽膜细胞数目分别为78±7．51和27±8．24，与阴性对照组（91±5．78）相比，穿膜细胞显著减少，差异有统计学意义（X^2=3．898，P=0.048）。MTT法测定S100A6 siRNA转染后A2780细胞对顺铂敏感性的影响结果显示，S100A6 siRNA引起顺铂对A2780细胞的抑制率增加（X^2=9．609，P=0．022），而空白对照组和阴性对照siRNA组之间无明显差异。对顺铂半数致死剂量（IC50）的计算结果显示，分别转染6．25、12．5nmol／LS100A6 siRNA的A2780细胞对顺铂IC50值分别为13．42μmol／L和11．32μmoL／L，与空白对照组和阴性对照siRNA组相比均显著降低，差异有统计学意义（X^2=5．566，P=0．018）。结论S100A6 siRNA转染卵巢癌A2780细胞后，引起A2780细胞GO／G1期阻滞，侵袭能力降低，同时对顺铂的敏感性有所增强，可能是卵巢癌靶向治疗的候选基因。

柯萨奇病毒A6致手足口病研究进展

近年来由柯萨奇病毒A6(CVA6)导致的手足口病在欧洲、北美和亚洲多个国家暴发流行,已快速上升为手足口病的主要致病原。临床症状显示,CVA6导致的手足口病患者表现为多部位的出疹甚至脱甲,成人感染和重症病例也有较多报道。分子流行病学显示,近年来流行的CVA6为新型变异株与其他型别的肠道病毒存在重组,可能是导致临床症状改变的潜在原因。

A6钢软化退火工艺研究

利用ＦｏｒｍａｓｔｏｒＤｉｇｉｔａｌ全自动相变测量仪，测定了Ａ６钢的临界点，进行了软化退火工艺试验。

2013年北京市朝阳区柯萨奇A6型病毒分子流行病学研究

目的了解2013年北京市朝阳区柯萨奇A6型（Coxsackievirus A6,CVA6）病毒的流行特点及其基因特征。方法对2013年收集的795份手足口病患者的咽拭子样本进行肠道病毒检测,对非EV71、非CVA16型病毒阳性样本进行CVA6荧光定量PCR检测,选取CVA6阳性样本进行VP1片段（794bp）序列扩增与测序,运用Clustalx软件和MEGA4.0软件对本地区CVA6的VP1片段序列与从NCBI下载的CVA6的VP1参考序列进行聚类分析。结果肠道病毒通用型核酸阳性样本共计382例（48.1%,382/795）,其中非EV71、非CVA16型病毒236例（61.8%,236/382）;非EV71、非CVA16型病毒阳性样本中有CVA6型病毒样本185例（78.4%,185/236）。基于VP1片段的聚类分析,结果显示2013年该地区的CVA6型病毒与中国地区的参考序列明显聚为一类;CVA6在系统进化树中形成A、B和C等3个基因型,C基因型又可分为C1和C2两个基因亚型;两个基因亚型间的核苷酸序列差异度为10.8%-13.2%。朝阳区所有的CVA6都位于C基因型,C1亚型包括了大部分该地区序列。结论 2013年该地区的CVA6已经超过了EV71和CVA16,首次成为北京市朝阳区手足口病的主要病原体。该地区存在CVA6的C1和C2两个基因亚型的共循环,其中C1亚型对该地区2013年CVA6的暴发流行起关键作用。

微小RNA-15a-5p靶向蛋白质二硫键异构酶A6前体蛋白抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的探讨微小RNA-15a-5p(miR-15a-5p)是否可通过靶向蛋白质二硫键异构酶A6前体蛋白(PDIA6)而抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭。方法选取2018年2月至2019年3月江南大学附属医院接受治疗的前列腺癌病人50例,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)与蛋白印迹法(Western blotting)分别检测前列腺癌组织、癌旁组织中miR-15a-5p、PDIA6的表达量;体外培养人前列腺癌DU145细胞,将细胞分为miR-NC组、miR-15a-5p组、si-NC组、si-PDIA6组、miR-15a-5p+pcDNA组、miR15a-5p+pcDNA-PDIA6组;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验验证miR-15a-5p、PDIA6的靶向关系。结果与癌旁组织相比,前列腺癌组织中miR-15a-5p的表达水平降低[(1.00±0.17)比(0.68±0.11)],PDIA6 mRNA[(0.99±0.09)比(1.64±0.18)]和蛋白[(0.44±0.07)比(0.76±0.17)]表达水平升高;转染miR-15a-5p mimics或转染si-PDIA6可降低细胞存活率(P<0.05),减少迁移及侵袭细胞数(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-15a-5p可靶向结合PDIA6;PDIA6过表达可降低miR-15a-5p过表达对DU145细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论过表达miR-15a-5p通过降低PDIA6的表达对列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力有抑制作用。

动物双歧杆菌A6对减轻小鼠慢性酒精肝损伤的作用

本试验通过给雄性7周龄ICR小鼠灌胃50%乙醇,造成慢性酒精肝损伤模型,处理组灌胃不同浓度的动物双歧杆菌A6菌悬液（低剂量组1.0×10~8CFU/mL,高剂量组1.0×10~10CFU/mL）。12周后,通过观察小鼠表观特征,测量小鼠血清中ALT、AST、TC、TG、HDL-C、LDL-C、肝脏中ALT、AST、MDA、GSH、GSH-Px等指标,评价不同浓度动物双歧杆菌A6在改善慢性酒精肝损伤方面的能力。结果显示,动物双歧杆菌A6低剂量组能维持小鼠体重持续增长,料重比较酒精损伤组升高;显著降低小鼠血清TG水平（P〈0.05）;肝脏重量、肾脏重量显著高于酒精损伤组（P〈0.05）;小鼠血清AST含量显著提高（P〈0.05）,且高于对照组和酒精损伤组,血清LDL-C含量显著高于对照组（P〈0.05）。高剂量组能维持小鼠体重持续增长;料重比较酒精损伤组升高;肝脏重量显著高于酒精损伤组（P〈0.05）;肝脏MDA含量高于对照组和酒精损伤组（P〉0.05）,GSH含量显著高于对照组和酒精损伤组（P〈0.05）。结果表明,动物双歧杆菌A6具有一定减轻慢性酒精肝损伤的作用,为益生菌的功能开发提供了新的思路。