外源性重组膜联蛋白A6对小鼠离心运动后骨骼肌早期质膜损伤修复的影响

目的:探究外源性重组人源膜联蛋白A6(recombinant human Annexin A6,rhANX A6)干预对离心运动损伤模型小鼠骨骼肌早期质膜损伤的影响及其代谢特点。方法:将56只8周龄C57雄性小鼠随机分为安静对照组(C)、运动注射磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline,PBS)组(EP)和运动注射rhANX A6组(ER),其中运动组根据运动后不同取材时间点分为EP2、EP6、EP12和ER2、ER6、ER12,每组各8只。运动前2h根据小鼠体重对EP组和ER组分别腹腔注射1倍浓度PBS缓冲液和rhANX A6(0.8mg/kg)。运用ELISA检测各组小鼠血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)、膜联蛋白A6(Annexin A6,ANX A6)及骨骼肌中ANX A6的含量,运用伊文思蓝染色(Evans blue dye,EBD)观察各组小鼠骨骼肌质膜的损伤情况。结果:(1)EP组各时相、ER12h血清CK活力值显著高于C组(P<0.01);同一时间点对比,EP组各时相均显著高于ER组(P<0.05)。(2)EP组及ER组各时相EBD阳性区域平均荧光强度均显著高于C组(P<0.01);EP组各时相均显著高于ER组(P<0.01)。(3)ER组各时相及EP6h、EP12h血清ANX A6含量显著高于C组(P<0.01);12h时相ER组显著高于EP组(P<0.05)。(4)ER组及EP组各时相骨骼肌ANX A6显著高于C组(P<0.05);ER组各时相均显著高于EP组(P<0.05)。结论:小鼠离心运动前2h注射外源性rhANX A6可显著改善运动后骨骼肌早期质膜损伤,推测rhANX A6直接参与了离心运动诱导的骨骼肌早期质膜损伤修复。

牛HSPA6蛋白特性分析及蛋白互作网络构建

通过构建牛热休克蛋白A6(heat shock protein A6,HSPA6)序列与其他生物的系统进化树,以及运用生物信息学方法分析牛HSPA6蛋白的基本理化性质、亲疏水性等,并结合蛋白互作网络,探究牛HSPA6基因编码蛋白的结构和功能特性。结果显示,牛HSPA6蛋白与羊、长江江豚等哺乳动物的氨基酸序列相似性较高;牛HSPA6蛋白分子质量为70 570.64 u,理论等电点为5.66,为酸性亲水性蛋白,无跨膜结构和信号肽;可能存在11个得分>0.900的磷酸化位点,与N-糖基化激活位点可能位于后端碱基;牛HSPA6蛋白是一种主要由40.38%的α-螺旋和33.65%的无规卷曲组成的二级结构相对稳定的蛋白质,包含N-端核苷酸结合域和C-端多肽结合域两个主要的结构域,主要在细胞质中发挥作用;蛋白质互作网络构建结果显示,牛HSPA6蛋白主要与BAG1、DNAJA4、DNAJB1、DNAJC2等蛋白发生互作,参与腺苷酸交换因子活性、ATP酶调节活性、伴侣绑定等,表明牛HSPA6蛋白在牛机体能量代谢等过程中发挥潜在生物学功能。这些多重生物信息学分析为深入探讨牛HSPA6蛋白对肉品质的影响机制提供了理论依据。

银川市2016-2022年手足口病柯萨奇病毒A6型分离株VP1基因特征分析

目的 分析银川市2016-2022年引起手足口病的柯萨奇病毒A6型(CV-A6)VP1的基因特征,为手足口病的防治工作提供有效的参考依据。方法 收集2016-2022年银川市手足口病所有CV-A6核酸呈阳性的标本进行病毒分离培养,应用一步法聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增其VP1区完整基因核酸片段进行核苷酸序列测定,利用测序结果进行系统发育树构建、同源性分析及氨基酸突变位点分析。结果 2016-2022年银川市共分离到手足口病CV-A6型毒株90株,测序后成功获得CV-A6 VP1区全长序列的毒株83株。完整VP1区基因均由915个核苷酸组成,编码305个氨基酸。系统发育分析显示,2016-2022年银川市83株CV-A6分离株均属于D3基因亚型的D3a分支;同源性分析表明,银川市83株CV-A6分离株与原型株Gdula株(AY421764-USA-1949)之间核苷酸相似性为82.1%~84.1%,氨基酸相似性为76.2%~80.5%,遗传距离较远;银川市83株CV-A6分离株与原型株Gdula株的VP1区氨基酸序列比较发现32个氨基酸位点出现变异。结论 2016-2022年银川市手足口病83株CV-A6分离株均属于D3基因亚型的D3a分支。加强对CV-A6的持续监测及基因特征分析,对科学防控CV-A6引起的手足口病及其疫苗研发具有重要意义。

浸润性乳腺癌患者血清外泌体膜联蛋白A6表达水平与治疗反应的关系

目的探讨血清外泌体膜联蛋白A6(ANXA6)在浸润性乳腺癌(IBC)患者中的诊断及预后预测价值,以及与新辅助化疗/他莫昔芬辅助内分泌治疗反应之间的关系。方法选取2014年1月至2017年3月在该院进行手术且有腋窝淋巴结的100例IBC患者作为IBC组,其中50例术前接受新辅助化疗,50例术后接受他莫昔芬辅助内分泌治疗。另选取同期50例成年女性作为非癌对照组。入组后收集所有研究对象血液标本。对于辅助内分泌治疗的IBC患者,进一步收集术中肿瘤组织标本和辅助内分泌治疗前24 h的血清标本。分离血清外泌体,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清外泌体和肿瘤组织标本中ANXA6的表达水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清外泌体ANXA6和糖类抗原15-3(CA15-3)对IBC的诊断价值。采用Spearman相关对血清ANXA6表达水平与肿瘤组织ANXA6表达水平的相关性进行分析。结果IBC组入组时血清外泌体ANXA6相对表达水平高于非癌对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,入组时血清外泌体ANXA6诊断IBC的AUC为0.844(95%CI:0.792~0.896),明显大于CA15-3的0.715(95%CI:0.653~0.786)。血清外泌体ANXA6高表达亚组肿瘤最大径大于低表达亚组,国际妇产科联盟分期高于低表达亚组,差异均有统计学意义(P<0.05),且预示无复发生存结局不良。对于新辅助化疗和他莫昔芬辅助内分泌治疗患者,血清外泌体ANXA6低表达亚组患者获得完全反应加部分反应的比例高于高表达亚组,差异有统计学意义(P<0.05)。入组时血清外泌体ANXA6表达水平与肿瘤组织ANXA6表达水平呈正相关性(r=0.490,P<0.05)。术后进行辅助内分泌治疗前血清外泌体ANXA6表达水平明显低于入组时,差异有统计学意义(P<0.05)。结论IBC患者血清外泌体ANXA6具备成为诊断和预测预后生物标志物的潜力,且高表达与新辅助化疗和他莫昔芬辅助内分泌治疗反应不良有关。

2013-2022年江苏省柯萨奇病毒A6型全基因组序列特征分析

目的 研究江苏省2013-2022年分离到的柯萨奇病毒A6型(CV-A6)全基因组序列特征及对全基因组各编码区进行遗传进化分析,以期从分子流行病学特征的角度解释CV-A6取代肠道病毒A71和柯萨奇病毒A16成为江苏省引起手足口病(HFMD)主要病原的原因。方法 选取2013-2022年间江苏省地区流行的35株CV-A6毒株进行全基因组测序,采用DNASTAR、MEGA7.0和Similarity plots3.5.1等软件对获取的全基因组序列进行比对、相似性分析、系统进化分析和基因重组分析,对P1编码区和3D区主要氨基酸变异位点进行分析。结果 35株CV-A6江苏毒株的全基因组核苷酸和氨基酸序列相似性分别为87.5%~99.6%和97.0%~99.8%,与CV-A6原型株Gdula/USA/1949的全基因组核苷酸序列相似性仅为80.3%~81.0%,氨基酸序列相似性为94.7%~95.3%。基于VP1序列的系统进化树结果显示,2013-2022年江苏省有34株CV-A6分离毒株分属于D3a基因亚型,1株分属于D2基因亚型;基于3D区进化树划分不同重组模式,2013-2022年江苏省流行的CV-A6出现过4个重组进化分支:RF-A、RF-L、RF-K和RF-C型。重组分析结果显示:江苏省流行的CV-A6毒株与CV-A6原型株Gdula/USA/1949在结构蛋白序列上具有较高的相似性。而在非结构蛋白和非编码区则与其他EV-A原型株序列相似性更高。而氨基酸突变位点分析结果显示,与原型株Gdula/USA/1949相比,P1区和3D区多个氨基酸位点变异频繁,可能会使得衣壳蛋白的结构、潜在的受体结合位点产生变化。结论 通过对2013-2022年江苏省CV-A6的全基因组序列分析,有助于了解江苏省CV-A6基因重组及遗传进化关系,解释了近年来CV-A6成为手足口病的主要病原体的可能原因,对CV-A6的防控工作提供了基础资料。

CEACAM6、miR-146b、S100A6在甲状腺癌中的表达及意义分析

目的探讨甲状腺癌组织中癌胚抗原相关细胞黏附分子6(carcinoembryonic antigen related cell adhesion molecule 6,CEACAM6)、miR-146b、钙结合蛋白A6(calcium-binding protein A6,S100A6)表达与临床病理特征以及预后的关系。方法选择我院收治的行甲状腺切除手术治疗的甲状腺癌患者165例,分别取癌组织和癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)检测CEACAM6、miR-146b、S100A6表达。采用t检验甲状腺癌患者不同临床病理特征间CEACAM6、miR-146b、S100A6表达差异,Kaplan-Meier和Cox比例风险模型分析CEACAM6、miR-146b、S100A6表达与甲状腺癌患者预后的关系。结果癌组织CEACAM6、miR-146b、S100A6表达高于癌旁组织(P<0.05),肿瘤直径>1 cm、低中度分化、T_(3)~T_(4b)期、N_(1a)~N_(1b)患者癌组织中CEACAM6、miR-146b、S100A6表达高于肿瘤直径≤1 cm、高度分化、T_(1)~T_(2)期、N 0患者(P<0.05)。CEACAM6高表达组、miR-146b高表达组、S100A6高表达组患者总生存率低于CEACAM6低表达组、miR-146b低表达组、S100A6低表达组(P<0.05)。N_(1a)~N_(1b)、CEACAM6高表达、miR-146b高表达、S100A6高表达是甲状腺癌患者不良预后的危险因素(P<0.05)。结论甲状腺癌组织中CEACAM6、miR-146b、S100A6均呈高表达,且与甲状腺癌肿瘤临床病理特征以及预后不良有关。

滤泡辅助性T细胞在柯萨奇病毒A6型手足口病患儿外周血中的表达及作用

目的探讨滤泡辅助性T细胞(Tfh)在柯萨奇病毒A6型手足口病(HFMD)患儿外周血中的表达水平及作用。方法采集2022年6月至2023年8月杭州市儿童医院收治的A6型HFMD患儿33例作为HFMD组,选择同期体检健康儿童26例作为健康人对照组,利用流式细胞术检测HFMD患儿和体检健康儿童外周血中的Tfh频数,分析并比较二者之间的关系。结果HFMD组和健康人对照组CXCR5^(+)CD4^(+)细胞占CD4^(+)T淋巴细胞的频数分别为3.95(2.31,6.21)%和1.44(0,94,2.43)%,两组之间差异有统计学意义(P<0.001)。HFMD组中ICOS^(+)CXCR5^(+)CD4^(+)和PD-1^(+)CXCR5^(+)CD4^(+)Tfh细胞频数分别为1.44(0.81,2.86)%和1.64(0.65,4.05)%,而在健康人对照组分别为0.84(0.27,1.46)%和0.47(0.13,1.12)%,两组之间差异有统计学意义(P<0.05);且两者均与CXCR5^(+)CD4^(+)细胞水平呈显著正相关(P均<0.05)。结论Tfh细胞在柯萨奇病毒A6型肠道病毒感染引起的HFMD患儿免疫反应中具有重要的作用。

2013年西安地区柯萨奇病毒A6流行情况及基因特征

目的 研究2013年西安地区普通手足口病（HFMD）病例中柯萨奇病毒A6型（CA6）的流行情况及其基因特征.方法 从2013年采集的普通HFMD病例标本中随机挑选250份非肠道病毒71型（EV71）非柯萨奇病毒A16型（CA16）的其他肠道病毒核酸阳性者,利用实时荧光逆转录酶联聚合反应检测CA6,扩增部分阳性标本VP1 （viral protein,VP）基因,并测定序列,与CA6其他参考序列比对,进行进化分析.结果 在250份样本中CA6阳性者共191份,阳性率为76.4％.进化分析显示西安地区2013年CA6与近年来流行于世界各地的CA6新变种同源性较高,而与原型株进化距离较远.序列比对发现本地毒株VP1与CA6新变种核苷酸序列相似性在89.7％～97.5％,编码氨基酸相似性为96.0％～99.7％;与CA6原型株及2006年以前中国大陆分离株核苷酸相似性为82.3％～83.8％,氨基酸相似性为93.8％～94.9％.结论 2013年西安地区HFMD普通病例病原以CA6为主,流行株为近年来流行于全球各地的CA6新变种.

2013～2014年杭州地区手足口病柯萨奇病毒A6型和A10型VP1基因特征分析

目的了解2013-2014年杭州地区手足口病病原谱的分布,并对其病原基因特征进行分析。方法采集2013年3月至2014年4月手足口病患儿标本1 340例,提取病毒核酸,通过逆转录和PCR扩增肠道病毒VP1序列并测序,经Blast比对确定病毒基因型。对柯萨奇病毒A6型（CA-A6）和A10型（CA-A10）VP1全长序列进行同源性比对分析,并构建系统进化树。结果1 340例手足口病患儿标本中,肠道病毒检出阳性率为81.43%（1 090/1 340）。其中,CV-A6阳性率为41.04%,取代EV-71（14.48%）成为杭州地区检出阳性率最高的肠道病毒;CV-A10检出率（8.51%）也高于CV-A16（3.81%）,列于第三位。同源性比对及系统进化分析显示,2013-2014年的25株CV-A6病毒核苷酸同源性为89.0%-99.7%,主要分布于G、H基因亚型;15株CV-A10病毒核苷酸同源性为95.3%-99.9%,分布于F、G基因亚型。结论 2013-2014年杭州地区儿童手足口病的主要病原体发生重大变化,CV-A6病毒成为最主要病原,CV-A10病毒也存在潜在威胁,需加强对其他肠道病毒的持续监测和分子特征分析。

柯萨奇病毒A6型VP1蛋白的生物信息学分析

目的：预测柯萨奇病毒A组6型（Coxsackievirus A6,CVA6）的衣壳蛋白VP1的基本理化性质、结构功能及线性B细胞表位。方法：应用Bioedit软件、Sub Loc、Target P和生物信息学资源门户Ex PASy中的多种在线工具对CVA6 VP1的氨基酸序列进行分析。结果：CVA6 VP1为一亲水性蛋白,其相对分子量为33.6 k D,等电点为7.92,含有24个可能的磷酸化位点,没有信号肽、跨膜区和可能的脂酰化位点;其二级结构中以无规则卷曲居多,有48.52%的氨基酸残基暴露于溶液界面;该分子内存在多个潜在的线性B细胞表位,其中的155～165位氨基酸残基区域的抗原指数最高。结论：成功预测到CVA6 VP1的基本理化性质、结构功能特征及可能的线性B细胞表位,为该蛋白的进一步研究及疫苗和免疫诊断试剂的研制打下基础。

福州地区2012年柯萨奇A6型肠道病毒分子特征分析

目的对2012年福州地区分离的其他肠道病毒CVA6进行分子鉴定，并对其VP1部分序列进化分析。方法肛拭子标本采用RD细胞进行病毒分离，通过RT—PCR对分离株的VP1部分序列进行扩增、克隆和测序；经过Blast程序比对来确定病毒的基因型；通过Mega4．0软件对不同病毒株VP1部分序列的差异进行比较。结果从10份其他肠道病毒患者的肛拭子标本中分离到6株CVA6病毒。测序结果显示，该6株CVA6病毒核苷酸序列具有高度一致性，但与福州周边国家或地区CVA6的核苷酸一致性为91．8％～97．3％。结论2012年福州市HFMD的病源除Ev71和CVA16外，还包含CVA6病毒。序列分析表明，因此，应加强对手足口病例中其他肠道病原体的检测，并掌握其流行以及病毒遗传进化特征，为HFMD的防控提供科学依据。

博来霉素A6和平阳霉素抗大肠癌实验研究

本研究应用体外细胞毒试验，小鼠结肠癌移植瘤及裸鼠移植人大肠癌模型，观察博来霉素A6（A6）和平阳霉素（PYM）对大肠癌的疗效。结果发现2种药物在体外对人大肠癌细胞有较强的活性。在1／9LD50等毒性剂量下，A6和PYM对小鼠结肠癌26皮下和盲肠移植瘤的生长有明显的抑制作用，2次实验结果：对小鼠结肠癌皮下移植瘤，A6的抑瘤率分别为87％和88％，PYM为86％和91％，丝裂霉素C（MMC）为64％和25％，5—氟脲嘧啶（5—FU）为45％和27％；对盲肠移植瘤，A6抑瘤率分别为99％和97％，PYM为100％和97％，MMC为77％和25％，5—FU均为44％。同样A6和PYM对裸鼠移植的人结肠癌HT－29的生长也有较强的抑制作用，A6对肿瘤生长的抑制率为82％，PYM为78％，MMC为53％，5—FU为12％。表明A6和PYM对小鼠结肠癌的裸鼠移植的人结肠癌的生长抑制作用均明显较MMC和5—FU为强，A6的作用似略较PYM为强，但二者间无明显差别；在抑制肿瘤生长的同时，A6和PYM还使肿瘤的组织学发生变化，肿瘤坏死明显增加和核分裂数减少。在治疗剂量下A6和PYM对带瘤小鼠和荷瘤裸鼠的骨髓有核细胞数均无明显影响。

柯萨奇A6型病毒致重症手足口病危险因素分析

目的探讨柯萨奇A6型病毒(CVA6)感染所致重症手足口病的危险因素。方法采用1∶1匹配的病例对照研究方法,收集深圳市宝安人民医院2015年5月-2016年11月实验室确诊的CVA6感染所致重症和轻症手足口病例各101例,采用向后逐步回归的多因素logistic回归方法筛选影响因素。结果出现丘疹、患儿经常咬玩具、照看人文化程度高中以下和发热最高体温≥39℃为CVA6感染所致重症的危险因素,母乳喂养和发病诊断时间间隔较短为保护因素。结论及早诊断和母乳喂养可降低CVA6所致重症手足口病风险,丘疹和高热可作为手足口病重症早期识别指征。

大鼠单克隆抗体与博来霉素A6偶联物治疗人大肠癌实验研究

用Dextran T-40为中介体偶联大鼠抗人大肠癌单克隆抗体R19和博来霉素A6。体外实验显示R19与A6偶联物对人盲肠癌细胞Hce-8693抑制50%克隆生成浓度(IC_(50))为0.019μmol/L;游离A6及无关单抗与A6偶联物M3-A6分别为1.05和1.00μmol/L;对人结肠HT-29细胞IC_(50)为0.078μmol/L,而游离A6为4.0μmol/L。同时加入R19单抗能阻断R19-A6偶联物的细胞毒性。体内实验显示:R19-A6偶联物对裸鼠移植的人盲肠癌生长的抑制率达90%,而同等剂量的游离A6,R19与A6混合物和M3-A6的抑制率分别为52,34和48%。结果表明单抗R19与A6偶联物对人大肠癌的抑制作用明显比游离A6强。

S100A6 siRNA对卵巢癌细胞生物学行为的影响

目的探讨S100A6蛋白表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响。方法以卵巢癌细胞A2780为研究对象，利用RNA干扰技术特异性降低S100A6表达水平后，分别用实时定量PCR和Western blot检测S100A6 siRNA对S100A6表达水平的抑制效率。用流式细胞术检测S100A6 siRNA转染前后A2780细胞的细胞周期变化，用Transwell试验观察S100A6siRNA转染前后侵袭能力的变化，用MTT法检测S100A6 siRNA对A2780细胞顺铂敏感性的影响。结果S100A6siRNA转染组细胞中S100A6 mRNA和蛋白表达水平与S100A6 siRNA呈浓度、时间依赖性明显下调，抑制效率可达63．75％～80．68％。在与空白对照组和阴性对照siRNA组相比，S100A6 siRNA出现了G0／G1期比例升高，S期比例降低，差异有统计学意义（X^2=6．211，P=0．045）。Transwell试验表明，6．25、12．5nmol／LS100A6 siRNA分别转染48h后，A2780细胞芽膜细胞数目分别为78±7．51和27±8．24，与阴性对照组（91±5．78）相比，穿膜细胞显著减少，差异有统计学意义（X^2=3．898，P=0.048）。MTT法测定S100A6 siRNA转染后A2780细胞对顺铂敏感性的影响结果显示，S100A6 siRNA引起顺铂对A2780细胞的抑制率增加（X^2=9．609，P=0．022），而空白对照组和阴性对照siRNA组之间无明显差异。对顺铂半数致死剂量（IC50）的计算结果显示，分别转染6．25、12．5nmol／LS100A6 siRNA的A2780细胞对顺铂IC50值分别为13．42μmol／L和11．32μmoL／L，与空白对照组和阴性对照siRNA组相比均显著降低，差异有统计学意义（X^2=5．566，P=0．018）。结论S100A6 siRNA转染卵巢癌A2780细胞后，引起A2780细胞GO／G1期阻滞，侵袭能力降低，同时对顺铂的敏感性有所增强，可能是卵巢癌靶向治疗的候选基因。

柯萨奇病毒A6致手足口病研究进展

近年来由柯萨奇病毒A6(CVA6)导致的手足口病在欧洲、北美和亚洲多个国家暴发流行,已快速上升为手足口病的主要致病原。临床症状显示,CVA6导致的手足口病患者表现为多部位的出疹甚至脱甲,成人感染和重症病例也有较多报道。分子流行病学显示,近年来流行的CVA6为新型变异株与其他型别的肠道病毒存在重组,可能是导致临床症状改变的潜在原因。

A6钢软化退火工艺研究

利用ＦｏｒｍａｓｔｏｒＤｉｇｉｔａｌ全自动相变测量仪，测定了Ａ６钢的临界点，进行了软化退火工艺试验。

2013年北京市朝阳区柯萨奇A6型病毒分子流行病学研究

目的了解2013年北京市朝阳区柯萨奇A6型（Coxsackievirus A6,CVA6）病毒的流行特点及其基因特征。方法对2013年收集的795份手足口病患者的咽拭子样本进行肠道病毒检测,对非EV71、非CVA16型病毒阳性样本进行CVA6荧光定量PCR检测,选取CVA6阳性样本进行VP1片段（794bp）序列扩增与测序,运用Clustalx软件和MEGA4.0软件对本地区CVA6的VP1片段序列与从NCBI下载的CVA6的VP1参考序列进行聚类分析。结果肠道病毒通用型核酸阳性样本共计382例（48.1%,382/795）,其中非EV71、非CVA16型病毒236例（61.8%,236/382）;非EV71、非CVA16型病毒阳性样本中有CVA6型病毒样本185例（78.4%,185/236）。基于VP1片段的聚类分析,结果显示2013年该地区的CVA6型病毒与中国地区的参考序列明显聚为一类;CVA6在系统进化树中形成A、B和C等3个基因型,C基因型又可分为C1和C2两个基因亚型;两个基因亚型间的核苷酸序列差异度为10.8%-13.2%。朝阳区所有的CVA6都位于C基因型,C1亚型包括了大部分该地区序列。结论 2013年该地区的CVA6已经超过了EV71和CVA16,首次成为北京市朝阳区手足口病的主要病原体。该地区存在CVA6的C1和C2两个基因亚型的共循环,其中C1亚型对该地区2013年CVA6的暴发流行起关键作用。

微小RNA-15a-5p靶向蛋白质二硫键异构酶A6前体蛋白抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的探讨微小RNA-15a-5p(miR-15a-5p)是否可通过靶向蛋白质二硫键异构酶A6前体蛋白(PDIA6)而抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭。方法选取2018年2月至2019年3月江南大学附属医院接受治疗的前列腺癌病人50例,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)与蛋白印迹法(Western blotting)分别检测前列腺癌组织、癌旁组织中miR-15a-5p、PDIA6的表达量;体外培养人前列腺癌DU145细胞,将细胞分为miR-NC组、miR-15a-5p组、si-NC组、si-PDIA6组、miR-15a-5p+pcDNA组、miR15a-5p+pcDNA-PDIA6组;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验验证miR-15a-5p、PDIA6的靶向关系。结果与癌旁组织相比,前列腺癌组织中miR-15a-5p的表达水平降低[(1.00±0.17)比(0.68±0.11)],PDIA6 mRNA[(0.99±0.09)比(1.64±0.18)]和蛋白[(0.44±0.07)比(0.76±0.17)]表达水平升高;转染miR-15a-5p mimics或转染si-PDIA6可降低细胞存活率(P<0.05),减少迁移及侵袭细胞数(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-15a-5p可靶向结合PDIA6;PDIA6过表达可降低miR-15a-5p过表达对DU145细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论过表达miR-15a-5p通过降低PDIA6的表达对列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力有抑制作用。

动物双歧杆菌A6对减轻小鼠慢性酒精肝损伤的作用

本试验通过给雄性7周龄ICR小鼠灌胃50%乙醇,造成慢性酒精肝损伤模型,处理组灌胃不同浓度的动物双歧杆菌A6菌悬液（低剂量组1.0×10~8CFU/mL,高剂量组1.0×10~10CFU/mL）。12周后,通过观察小鼠表观特征,测量小鼠血清中ALT、AST、TC、TG、HDL-C、LDL-C、肝脏中ALT、AST、MDA、GSH、GSH-Px等指标,评价不同浓度动物双歧杆菌A6在改善慢性酒精肝损伤方面的能力。结果显示,动物双歧杆菌A6低剂量组能维持小鼠体重持续增长,料重比较酒精损伤组升高;显著降低小鼠血清TG水平（P〈0.05）;肝脏重量、肾脏重量显著高于酒精损伤组（P〈0.05）;小鼠血清AST含量显著提高（P〈0.05）,且高于对照组和酒精损伤组,血清LDL-C含量显著高于对照组（P〈0.05）。高剂量组能维持小鼠体重持续增长;料重比较酒精损伤组升高;肝脏重量显著高于酒精损伤组（P〈0.05）;肝脏MDA含量高于对照组和酒精损伤组（P〉0.05）,GSH含量显著高于对照组和酒精损伤组（P〈0.05）。结果表明,动物双歧杆菌A6具有一定减轻慢性酒精肝损伤的作用,为益生菌的功能开发提供了新的思路。