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眼科疾病AAV载体基因疗法技术发展新动向
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作者 奚静 《工业微生物》 CAS 2024年第1期200-202,共3页
提到“病毒”,相信大家对它的第一印象就是“致病”。文章介绍的腺相关病毒(AAV)非但不“致病”,还能协助“治病”,是基因治疗技术的关键载体。文章对AAV在眼科疾病治疗方面的技术发展动向、应用现状及技术瓶颈进行综述,对比国内外创新... 提到“病毒”,相信大家对它的第一印象就是“致病”。文章介绍的腺相关病毒(AAV)非但不“致病”,还能协助“治病”,是基因治疗技术的关键载体。文章对AAV在眼科疾病治疗方面的技术发展动向、应用现状及技术瓶颈进行综述,对比国内外创新主体的专利布局情况,以期对该技术领域的发展热点和国内外发展差距进行初步了解。 展开更多
关键词 aav
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AAV基因治疗产品的免疫反应评估
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作者 何丹 夏艳 吴小兵 《中国医药导刊》 2024年第3期224-230,共7页
随着生命科学技术的进步,基因治疗因其特异性和精准性等优势已成为新药研发的重点领域。其中,腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)载体是一种应用前景广阔的体内基因治疗载体,也是基因治疗产品载体研究的热点。目前,全球范围内已有7... 随着生命科学技术的进步,基因治疗因其特异性和精准性等优势已成为新药研发的重点领域。其中,腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)载体是一种应用前景广阔的体内基因治疗载体,也是基因治疗产品载体研究的热点。目前,全球范围内已有7款AAV相关的基因治疗产品获批上市,并有多项临床试验正在进行。AAV载体的免疫原性较低,但部分人群体内存在针对AAV的预存免疫,其进入体内后也会诱导机体产生先天免疫反应,随后可能触发针对AAV衣壳和转基因产物的适应性免疫反应,从而影响药物的有效性和安全性。本综述旨在概述AAV基因治疗引起的免疫反应特征,并简要总结在临床前和临床研究中对AAV基因治疗免疫反应的评估,以期为AAV基因治疗药物评价提供参考。 展开更多
关键词 aav
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AAV-CRISPR/Cas9介导的血友病A基因治疗研究进展
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作者 房帅 王刚 杨林花 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1890-1893,共4页
血友病A是一种由凝血因子Ⅷ突变引起的X-连锁隐性出血性疾病。目前主要以外源凝血因子替代治疗为主。随着基因治疗的不断发展,为血友病A的治疗提供了新的研究方向。应用CRISPR-Cas9技术选择合适的靶位点,并通过相应的载体介导外源性B结... 血友病A是一种由凝血因子Ⅷ突变引起的X-连锁隐性出血性疾病。目前主要以外源凝血因子替代治疗为主。随着基因治疗的不断发展,为血友病A的治疗提供了新的研究方向。应用CRISPR-Cas9技术选择合适的靶位点,并通过相应的载体介导外源性B结构域删除的FⅧ变异体基因定向敲入和高效表达,达到治疗血友病A的目的。CRISPR-Cas9技术作为一种新兴的基因编辑工具,具有极大的高效性、安全性和有效性,已广泛用于血友病基因治疗研究。本文就现阶段血友病A基因治疗的载体选择、治疗基因的构建、基因编辑技术及表达靶位的选择进行综述。 展开更多
关键词 A CRISPR-Cas9 aav载体
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光控超小型CRISPR/Cas经AAV载体递送实现对人基因组的高效编辑 被引量:1
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作者 林钰莹 魏劲松 +1 位作者 林鑫华 赵冰 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期198-207,216,共11页
CRISRP/Cas系统是目前广为使用的基因编辑工具,而腺相关病毒(AAV)也是目前最安全有效的基因治疗递送载体。为了实现AAV载体介导的CRISRP/Cas基因编辑,各种可装载于AAV载体的基因编辑工具也先后被报道。尽管如此,AAV载体介导的时空特异... CRISRP/Cas系统是目前广为使用的基因编辑工具,而腺相关病毒(AAV)也是目前最安全有效的基因治疗递送载体。为了实现AAV载体介导的CRISRP/Cas基因编辑,各种可装载于AAV载体的基因编辑工具也先后被报道。尽管如此,AAV载体介导的时空特异性基因编辑仍较难实现。为此我们结合光遗传学,将蓝光诱导表达系统、超小型CRISPR/Un1Cas12f1基因编辑系统以及AAV载体递送系统进行有机整合,开发出光控诱导表达的超小型基因编辑系统(AAV-PA-Cas12f1),并将其通过AAV递送至人源细胞HEK293T中。在无光条件下其表达背景极低,而经过蓝光诱导实现了对人基因组的高效基因编辑:以Intergene2为例,利用PCR产物-TA克隆结合单克隆测序分析得到该系统的实际编辑效率高达56%,编辑类型为碱基缺失或兼具碱基缺失与插入。此工具的开发为实现体内精准基因编辑奠定了基础,为解析更多生物学机制及探索疾病治疗策略提供了技术平台。 展开更多
关键词 Un1Cas12f1
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Intravenous injection of AAV-PHP.eB across the blood-brain barrier in the adult mouse for central nervous system gene therapy
5
作者 Yongwei Shu Jie Yao +7 位作者 Yang Qu Jing Zheng Jing Ding Lina Zhang Yefan Wang Linlin Zhao Jingyu Zhang Siqi Tang 《Oncology and Translational Medicine》 2019年第1期1-5,共5页
Objective To verify the neurotypicality of AAV-PHP.eB after tail vein injection in adult mice and its efficiency in crossing the blood-brain barrier(BBB).Methods The rAAV-SYN-GFP plasmid was constructed, and adult C57... Objective To verify the neurotypicality of AAV-PHP.eB after tail vein injection in adult mice and its efficiency in crossing the blood-brain barrier(BBB).Methods The rAAV-SYN-GFP plasmid was constructed, and adult C57 BL mice were injected with AAV PHP.eB: SYN-GFP in the tail vein(300 nL, virus titer 3 × 10~9 vg) and in the prefrontal lobe(50 L, virus tite5 × 10^(11) vg). The green fluorescent protein(GFP) signal in the brain was observed at two weeks, while the GFP signal in the peripheral organs was observed at four weeks. Results Two weeks after tail vein injection, GFP expression was observed throughout the brain especially in the cortex, hippocampus, and geniculate nucleus. No GFP signal was observed or detected by western blotting in the peripheral organs after four weeks. GFP signal was observed mainly at the loca site after prefrontal lobe injection.Conclusion AAV-PHP.eB: SYN-GFP can effectively cross the BBB in adult mice. Using a neuron-specific promoter allows exogenous gene expression in neurons; therefore, AAV-PHP.eB can be used as an effective carrier for studying diseases in the central nervous system(CNS). 展开更多
关键词 gene therapy aav-PHP.eB blood-brain barrier regulatory element noninvasive viral injection
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生物质谱技术在腺相关病毒(AAV)载体制剂质量控制中的应用
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作者 李孟效 李惠琳 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期682-694,共13页
腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)是一种基因治疗中常用的病毒载体。由于其安全性较高且能够靶向多种细胞,在临床前和临床研究中得到了较多的应用。不过在设计和生产的过程中,AAV载体有着诸多会影响其安全性和疗效的关键质量属... 腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)是一种基因治疗中常用的病毒载体。由于其安全性较高且能够靶向多种细胞,在临床前和临床研究中得到了较多的应用。不过在设计和生产的过程中,AAV载体有着诸多会影响其安全性和疗效的关键质量属性。生物质谱技术的发展和应用为生物大分子的研究提供了一个便捷的平台,尤其是在蛋白质序列、结构和相互作用方面。对于AAV载体而言,质谱技术可以实现衣壳蛋白比率、翻译后修饰、血清型、空衣壳比率的测定或表征,从而协助对AAV载体的质量控制。与现有方法相比,质谱技术具有样品需求量少、分析快速灵敏、适用于完整AAV载体的分析和质量分辨率高的优点,并且可以区分空衣壳、满衣壳和部分包封的衣壳。未来,通过将更加高效的蛋白质分离技术与质谱技术联用、开发新的信息处理软件平台和新的质谱检测方法,质谱技术有望在AAV载体的设计和生产中发挥更加重要的作用。 展开更多
关键词
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阿尔茨海默病的AAV基因治疗研究进展
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作者 戴中华 张丽娜 +1 位作者 章嫣 吴小兵 《中国医药导刊》 2023年第7期677-686,共10页
阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease, AD)是导致痴呆最主要的疾病。据估计,2020年全球AD及相关痴呆患者有约5427万,其中超过1/4患者在我国。随着全球人口老龄化加快,AD患者数目快速增加,AD在给患者带来沉重疾病痛苦的同时,也将给家庭和... 阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease, AD)是导致痴呆最主要的疾病。据估计,2020年全球AD及相关痴呆患者有约5427万,其中超过1/4患者在我国。随着全球人口老龄化加快,AD患者数目快速增加,AD在给患者带来沉重疾病痛苦的同时,也将给家庭和社会带来沉重经济压力。当前,治疗AD的药物还只是着眼于缓解症状,并不影响疾病的进程。虽然最近临床试验数据表明,多个β-淀粉样蛋白(amyloid-beta, Aβ)抗体药物可以改善病理和减缓疾病进程,但其临床价值一直饱受争议。所以,研发出新的有效的AD治疗药物迫在眉睫。传统AD药物的研发失败率高达99.6%,使得科学家们不得不积极探寻新的AD疗法。腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)基因治疗是一种新兴的、强有力的治疗手段,在治疗其他神经退行性相关疾病上已取得较大成功,提示其在AD的治疗上极有可能取得突破。本研究在梳理当前国内外AD发病现状和风险因素的基础上,明确提出目前亟待新的AD治疗药物和治疗方法;通过介绍AAV基因治疗AD的优势和潜能,并基于Aβ级联反应假说、tau蛋白假说、神经营养因子假说、APOE假说、神经炎症假说,自噬-溶酶体障碍假说、线粒体功能障碍假说等各种假说机制,综述了AD的AAV基因治疗临床前和临床研究进展,并提出AAV基因治疗虽尚处早期阶段,其发展充满挑战,但终将可能为AD的治疗带来新希望和新突破。 展开更多
关键词 Β- 退
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rAAV-hGDNF对谷氨酸钠诱导原代培养大鼠胚胎脊髓神经元损伤的保护作用 被引量:1
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作者 焦建伟 高扬 +3 位作者 田竟生 吴小兵 伍志竖 林嘉友 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期484-487,共4页
目的 探讨rAAV hGDNF对谷氨酸钠诱导的大鼠脊髓神经元死亡的保护作用。 方法 建立谷氨酸钠诱导体外培养大鼠脊髓神经元损伤模型 ,用自行包装的rAAV hGDNF病毒感染原代培养大鼠脊髓神经元 ,经双醋酸荧光素和碘化丙啶法辨认存活细胞和... 目的 探讨rAAV hGDNF对谷氨酸钠诱导的大鼠脊髓神经元死亡的保护作用。 方法 建立谷氨酸钠诱导体外培养大鼠脊髓神经元损伤模型 ,用自行包装的rAAV hGDNF病毒感染原代培养大鼠脊髓神经元 ,经双醋酸荧光素和碘化丙啶法辨认存活细胞和死亡细胞 ,观察rAAV hGDNF抑制兴奋性氨基酸对脊髓神经元的毒性作用 ;同时运用半定量RT PCR法 ,以 β actin为内对照 ,检测脊髓神经元内NOSmRNA的表达。  结果 rAAV hGDNF感染组的细胞死亡率为 5 0 %± 0 0 2 ,对照组为 5 9 2 5 %± 0 0 2 3,统计分析两组有显著性差异 (P <0 0 5 )。rAAV hGDNF感染后的脊髓神经元NOSmRNA表达为 0 97± 0 0 5 ,未感染rAAV hGDNF的对照组NOSmRNA表达为 1 2 3± 0 10 ,统计分析两组有显著性差异 (P <0 0 1)。 结论 rAAV hGDNF能抑制兴奋性氨基酸诱导的神经元NOS的表达 。 展开更多
关键词
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AAV-TGFβ3的构建及其与AV-TGFβ1表达系统对反分化髓核细胞蛋白多糖合成的影响 被引量:1
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作者 赛佳明 胡有谷 王德春 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 2006年第12期946-950,I0024,共6页
目的:比较转化生长因子(TGF)β3腺相关病毒(AAV-TGFβ3)与TGFβ1腺病毒(AV-TGFβ1)表达系统对反分化早、晚期髓核细胞蛋白多糖合成的生物学效应。方法:制备具有感染活性的AAV-TGFβ3并采用酶切电泳和免疫荧光对其进行鉴定。将AAV-TGFβ3... 目的:比较转化生长因子(TGF)β3腺相关病毒(AAV-TGFβ3)与TGFβ1腺病毒(AV-TGFβ1)表达系统对反分化早、晚期髓核细胞蛋白多糖合成的生物学效应。方法:制备具有感染活性的AAV-TGFβ3并采用酶切电泳和免疫荧光对其进行鉴定。将AAV-TGFβ3和AV-TGFβ1分别转染反分化早、晚期髓核细胞,采用免疫印迹法检测TGFβ3和TGFβ1蛋白的表达,并通过Antonopulos法分别检测AAV-TGFβ3和AV-TGFβ1对蛋白多糖合成的生物学效应。结果:AAV-TGFβ3转染可提高反分化早、晚期髓核细胞TGFβ3蛋白的表达,并促进其蛋白多糖的合成。转染后第12天,蛋白多糖含量达到峰值,分别为0.399±0.029和0.152±0.011,此后蛋白多糖含量缓慢降低;于转染后第2个月,蛋白多糖含量稳定在较高水平,分别为0.309±0.021和0.115±0.009。AV-TGFβ1转染亦可提高反分化早、晚期髓核细胞TGFβ1蛋白的表达,但其仅促进反分化早期髓核细胞蛋白多糖的合成,转染后第10天蛋白多糖含量达到峰值(0.413±0.041),此后蛋白多糖含量快速降低,转染后第2个月时蛋白多糖含量降至较低水平(0.198±0.013);对于反分化晚期髓核细胞,AV-TGFβ1则抑制其蛋白多糖的合成。结论:AAV-TGFβ3可稳定地促进反分化早、晚期髓核细胞蛋白多糖的合成;AV-TGFβ1仅一过性地促进反分化早期髓核细胞蛋白多糖的合成,而且抑制反分化晚期髓核细胞蛋白多糖的合成。 展开更多
关键词 Β3 β1
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AAV载体基因药物临床生物样本分析要点及挑战
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作者 余双庆 吴小兵 《中国医药导刊》 2023年第7期669-676,共8页
细胞和基因治疗已进入高速发展期,多种病毒和非病毒载体被应用于细胞和基因治疗领域。其中,腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)载体因其对治疗基因的高效转导率、持久的表达能力和良好的安全性等特点,在遗传病的体内基因治疗领域... 细胞和基因治疗已进入高速发展期,多种病毒和非病毒载体被应用于细胞和基因治疗领域。其中,腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)载体因其对治疗基因的高效转导率、持久的表达能力和良好的安全性等特点,在遗传病的体内基因治疗领域得到广泛应用。随着越来越多的AAV载体基因药物进入临床研究阶段,AAV载体药物的生物分析也越来越受关注,涉及药物代谢动力学(pharmacokinetics, PK)、药效学(pharmacodynamics, PD)、免疫原性、病毒脱落和基因整合监测等方面,目前均缺乏标准化的分析方法、标准品和对照品,在分析方法验证方案、接受标准等方面亦尚无统一规定。囿于AAV载体药物组成和作用机制的复杂性,无论是分析方法、结果解释,还是监管机构的建议和要求等方面均不同于传统小分子和蛋白药物。本研究结合AAV载体基因药物特点、监管机构建议和已发表的临床研究,概述AAV载体基因药物临床生物样本给药前、给药后分析工作要点及面临的挑战,以期为临床上AAV载体基因治疗药物的研究开发提供借鉴和参考。 展开更多
关键词 aav载体
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A Brief Analysis of African American Vernacular English(AAVE)-A Case Study of an AAVE Hip-Pop Song "Live Your Life"
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作者 马艳晓 《海外英语》 2012年第12X期261-262,274,共3页
This paper tries to analyse the linguistic feafures of AAVE with a case study of a typical and popular AAVE hip-pop"Live your life"song sang by T.I.and Rihanna.And it also briefly analyses the potential soci... This paper tries to analyse the linguistic feafures of AAVE with a case study of a typical and popular AAVE hip-pop"Live your life"song sang by T.I.and Rihanna.And it also briefly analyses the potential social reasons that may contribute to the particular linguistic features of AAVE which is different from those of Standard American English. 展开更多
关键词 aavE LINGUISTIC features LIVE YOUR LIFE social rea
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腺相关病毒(AAV)载体研究进展 被引量:10
12
作者 赵丽琴 席斌 彭华松 《生物技术进展》 2012年第2期110-115,共6页
基因治疗的载体在基因治疗过程中起着至关重要的作用,其中腺相关病毒(AAV)载体具有低致病性、对宿主免疫原性弱、长期稳定表达、广泛的细胞和组织亲嗜性等优点,是目前发展最热,也是最有希望的载体之一,已被广泛应用于临床研究。本文综... 基因治疗的载体在基因治疗过程中起着至关重要的作用,其中腺相关病毒(AAV)载体具有低致病性、对宿主免疫原性弱、长期稳定表达、广泛的细胞和组织亲嗜性等优点,是目前发展最热,也是最有希望的载体之一,已被广泛应用于临床研究。本文综述了腺相关病毒载体的研究进展,包括AAV的血清型、新型载体的开发、生产工艺及其放大及临床研究及讨论了AAV载体还存在的问题及可能的解决方案。随着腺相关病毒载体研究的进展,新的载体系统必将在基因治疗中发挥更重要的作用。 展开更多
关键词 aav
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广西人群mTOR基因多态性与抗中性粒细胞胞浆抗体相关性血管炎的关系
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作者 苏珊 薛超 邱承高 《中国临床新医学》 2024年第8期860-865,共6页
目的探索广西人群mTOR基因rs4845856位点单核苷酸多态性(SNP)与抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)相关性血管炎(AAV)的关系。方法纳入2005—2022年在广西医科大学第二附属医院、梧州市工人医院确诊为AAV的住院门诊患者212例作为研究对象(AAV... 目的探索广西人群mTOR基因rs4845856位点单核苷酸多态性(SNP)与抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)相关性血管炎(AAV)的关系。方法纳入2005—2022年在广西医科大学第二附属医院、梧州市工人医院确诊为AAV的住院门诊患者212例作为研究对象(AAV组),另选择同期208名健康体检者作为对照组。采用多重聚合酶链反应结合高通量测序法,对选定的位点进行基因分型检测,比较两组的基因频率、基因型分布。通过遗传模型分析基因多态性与AAV发病风险的关系,并结合AAV组临床数据进行对比分析。结果两组间rs4845856位点基因型频率和等位基因频率分布差异无统计学意义(P>0.05)。对于女性亚群,在共显性模型[OR(95%CI):0.11(0.01~0.86),P=0.005]和隐性模型[OR(95%CI):0.09(0.01~0.75),P=0.003]中,TT基因型与AAV易感性表现出强关联性,为AAV发病的保护因素。对于汉族亚群,在隐性模型[OR(95%CI):0.29(0.08~1.05),P=0.038]中,TT基因型与AAV易感性同样存在关联。蛋白酶3(PR3)、髓过氧化物酶(MPO)与rs4845856位点SNP各基因型存在关联(P<0.05)。AAV组中rs4845856位点SNP各基因型与病理分型无关联(P>0.05)。结论mTOR基因rs4845856位点SNP可能与广西人群AAV的遗传易感性相关,TT基因型可能是女性亚群重要的保护因素。 展开更多
关键词 广西
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人体肝脏靶向性新型AAV血清型载体的研发 被引量:1
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作者 宁秦洁 陈颖 +5 位作者 闫梦迪 胡泽岚 吴侠 杜增民 郑静 肖啸 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期404-410,共7页
通过DNA shuffling技术选择8种AAV(AAV1~AAV4,AAV6~AAV9)cap基因序列进行cap基因的DNA改组,获得AAV突变体基因库。将突变体基因库插入到含有AAV2Rep基因和ITR序列的质粒中,最终获得了大于107的独立克隆(具有全套AAV基因组序列)。通过转... 通过DNA shuffling技术选择8种AAV(AAV1~AAV4,AAV6~AAV9)cap基因序列进行cap基因的DNA改组,获得AAV突变体基因库。将突变体基因库插入到含有AAV2Rep基因和ITR序列的质粒中,最终获得了大于107的独立克隆(具有全套AAV基因组序列)。通过转化实验获得随机感染质粒文库(pIRC)。将所得质粒经过共转染HEK293细胞,72 h后收集纯化病毒,获得感染性AAV文库。利用野生型5型腺病毒(Wild Type Ad5,wt Ad5)辅助感染人肝癌Hep G2细胞,进行筛选后,最终在肝细胞中富集获得1种新型AAV血清载体AAVXL12。通过将携带GFP基因的不同AAV血清型载体感染Hep G2细胞,观察到不同程度的绿色荧光的表达,最终显示筛选到的AAV血清型载体AAVXL12介导的GFP基因表达效果最好,荧光强度最强。 展开更多
关键词 腺相关病毒(aav) 新型aav血清型 DNA shuffling
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血清同型半胱氨酸与胱抑素C联合检测对ANCA相关性肾损伤的诊断价值
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作者 王婵 谈方方 +4 位作者 方珊 张彦青 段新旦 樊星涛 王欣 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期616-620,共5页
目的 研究抗中性粒细胞胞浆抗体(antineutrophil cytoplasmic antibody, ANCA)相关性血管炎(ANCA-associated vasculitis, AAV)相关性肾损伤患者血清中同型半胱氨酸(HCY)与胱抑素C(Cys-C)的水平,探讨血清HCY和Cys-C联合检测对ANCA相关... 目的 研究抗中性粒细胞胞浆抗体(antineutrophil cytoplasmic antibody, ANCA)相关性血管炎(ANCA-associated vasculitis, AAV)相关性肾损伤患者血清中同型半胱氨酸(HCY)与胱抑素C(Cys-C)的水平,探讨血清HCY和Cys-C联合检测对ANCA相关性肾损伤的诊断价值。方法 选取本院2016年1月—2019年1月肾内科收治的70例ANCA阳性合并肾损伤的患者,另选择同期前来就诊的48例ANCA阳性但并未合并肾损伤的患者(单纯ANCA阳性组)和50例体检的健康者(对照组)。比较各组检测结果并确定各检测指标对ANCA阳性合并肾损伤的受试者工作特征(ROC)曲线的曲线下面积(AUC),计算HCY、Cys-C联合检测对ANCA相关性肾损伤的相关性及诊断价值。结果 ANCA阳性合并肾损伤组、单纯ANCA阳性组与对照组中血清HCY、Cys-C水平差异有统计学意义(P<0.05);各组HCY、Cys-C的阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。HCY、Cys-C联合诊断对ANCA阳性相关性肾损伤的诊断灵敏度、特异度高于上述指标单独检测,差异有统计学意义(P<0.05);ROC曲线结果显示,HCY联合Cys-C对ANCA阳性合并相关性肾损伤的患者具有较好的诊断价值和较高的相关性。结论 HCY与Cys-C联合检测与AAV相关性肾损伤密切相关,联合检测对ANCA阳性相关性肾损伤患者的诊断有积极作用,对患者治疗具有指导价值。 展开更多
关键词 (ANCA) ANCA相关性血管炎(aav) (HCY) C(Cys-C)
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AAV-ITR基因表达微载体在小鼠体内表达
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作者 李泰明 许麒麟 +2 位作者 潘俊杰 刘晓玫 张春 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期246-254,共9页
旨在比较AAV-ITR基因表达微载体及其单体在小鼠不同部位的表达差异,将相同拷贝数的AAV-ITR基因表达微载体和p UC57-minivector-EGFP分别转入小鼠脑组织,另外将相同拷贝数的AAV-ITR基因表达微载体单体,AAV-ITR基因表达微载体和p UC57-min... 旨在比较AAV-ITR基因表达微载体及其单体在小鼠不同部位的表达差异,将相同拷贝数的AAV-ITR基因表达微载体和p UC57-minivector-EGFP分别转入小鼠脑组织,另外将相同拷贝数的AAV-ITR基因表达微载体单体,AAV-ITR基因表达微载体和p UC57-minivector-EGFP转入小鼠骨骼肌中,比较不同时期组织中的残余分子数量。荧光定量PCR、显微荧光观察以及荧光平均光密度和荧光灰度值分析表明,相同拷贝数的AAV-ITR基因表达微载体单体比AAV-ITR基因表达微载体和p UC57-minivectorEGFP具有更高的转染效率,其稳定性也优于AAV-ITR基因表达微载体。结果显示,AAV-ITR基因表达微载体单体在动物体内具有高效表达安全稳定的特点,有望成为基因治疗中一种安全可靠,稳定高效的新型载体。 展开更多
关键词 腺相关病毒(aav) RT-PCR
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低氧对rAAV-2介导的hVEGF165基因在大鼠心肌细胞中表达的影响
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作者 唐晓鸿 袁洪 曾均发 《实用预防医学》 CAS 2007年第1期7-9,共3页
目的探讨低氧对人血管内皮生长因子165(hVEGF165)基因在心肌细胞中表达的影响。方法以重组2型腺相关病毒(rAAV-2)为载体,构建rAAV2/hVEGF165,转染大鼠原代心肌细胞。对心肌细胞进行低氧培养,并于培养的0、24、48、72h,分别应用RT-PCR技... 目的探讨低氧对人血管内皮生长因子165(hVEGF165)基因在心肌细胞中表达的影响。方法以重组2型腺相关病毒(rAAV-2)为载体,构建rAAV2/hVEGF165,转染大鼠原代心肌细胞。对心肌细胞进行低氧培养,并于培养的0、24、48、72h,分别应用RT-PCR技术检测VEGF165 mRNA表达、ELISA法检测hVEGF165蛋白的水平,并与对照组(予以常氧培养)进行比较。结果rAAV2/hVEGF165体外转染后,低氧培养的心肌细胞在24、48、72hhVEGF165 mRNA转录水平均明显高于对照组,有显著性差异(P<0.05);在低氧培养的24、48、72h其培养上清中hVEGF165蛋白含量亦明显高于对照组,差异具有显著性(P<0.05)。结论低氧可促进重组2型腺相关病毒介导的人血管内皮生长因子(hVEGF165)基因在心肌细胞中表达。 展开更多
关键词
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肝细胞癌Adv-p53、AAV-HGFK1联合转基因治疗的临床疗效和预后分析
18
作者 张法标 方哲平 《中国现代医生》 2015年第26期8-11,F0003,共5页
目的分析肝细胞癌Adv-p53、AAV-HGFK1联合转基因治疗的临床疗效和预后。方法选取我科2009年1月~2012年1月进展期肝癌患者共50例,随机分为重组腺相关病毒-肝细胞生长因子第l螺旋区(recombinant adeno-associated virus-kringle 1 domain... 目的分析肝细胞癌Adv-p53、AAV-HGFK1联合转基因治疗的临床疗效和预后。方法选取我科2009年1月~2012年1月进展期肝癌患者共50例,随机分为重组腺相关病毒-肝细胞生长因子第l螺旋区(recombinant adeno-associated virus-kringle 1 domain of hepatocyte growth factor)AAV-HGFK1+Adv-p53组和AAV-HGFKI组。比较两组患者治疗后肝穿刺活检标本新生微血管和凋亡细胞率、临床疗效、复发率、生存率。结果 AAV-HGFK1+Adv-p53组治疗后第14天、第21天的新生微血管数量显著低于AAV-HGFK1组,凋亡细胞率显著高于AAVHGFK1组(P〈0.01)。AAV-HGFK1+Adv-p53组的疾病控制率为84.00%,显著高于AAV-HGFK1组48.00%(P〈0.05);两组患者的疾病缓解率差异无统计学意义(P〉0.05)。AAV-HGFK1+Adv-p53组1年、3年复发率显著低于AAVHGFK1组,1年、3年生存率显著高于AAV-HGFK1组(P〈0.05)。结论 Adv-p53、AAV-HGFK1联合治疗进展期肝细胞癌疗效优于AAV-HGFK1单独治疗,预后更佳。 展开更多
关键词 Adv-p53 aav-HGFK1
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rAAV-NGF-GFP载体的构建及鉴定
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作者 薛金凤 谭孟群 田晶 《华夏医学》 CAS 2016年第6期1-5,共5页
目的:构建携带神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的重组腺相关病毒载体(recombinant deno-associated virus,rAAV),为临床利用神经生长因子治疗阿尔兹海默病(Alzheimer’sdisease,AD)提供实验依据。方法:采用基因重组技术构建含有... 目的:构建携带神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的重组腺相关病毒载体(recombinant deno-associated virus,rAAV),为临床利用神经生长因子治疗阿尔兹海默病(Alzheimer’sdisease,AD)提供实验依据。方法:采用基因重组技术构建含有NGF基因的AAV-NGF载体,将pAAV-NGF-GFP、pRC、pHelper 3种质粒共转染HEK293细胞,包装获取重组腺相关病毒,采用SDS-PAGE胶和Dot-blot检测病毒纯度和滴度;重组腺相关病毒转染人类神经母细胞瘤细胞(SK),荧光显微镜下观察GFP表达。结果:成功构建rAAV-NGF-GFP载体,滴度为1.7×1010v.g/ml,将病毒转染SK细胞48 h后细胞中有荧光表达。结论 :构建的rAAV-NGF-GFP病毒载体可成功转染SK细胞。 展开更多
关键词 SK
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AAV-SaCas9敲除MSTN基因病毒的构建及鉴定 被引量:3
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作者 汪新建 樊爽爽 +3 位作者 翁少亭 杨国宇 褚贝贝 王江 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第1期118-121,共4页
为了研究肌肉生长抑制素(MSTN)的相关功能,应用分子生物学方法构建敲除MSTN的AAVSaCas9载体,通过转染293T细胞提取基因组后进行T7酶切鉴定、TA克隆及测序确定该基因的敲除效果;将鉴定正确的AAV-SaCas9重组质粒与pHelper质粒共转染AAV-29... 为了研究肌肉生长抑制素(MSTN)的相关功能,应用分子生物学方法构建敲除MSTN的AAVSaCas9载体,通过转染293T细胞提取基因组后进行T7酶切鉴定、TA克隆及测序确定该基因的敲除效果;将鉴定正确的AAV-SaCas9重组质粒与pHelper质粒共转染AAV-293细胞3 d后,分离纯化病毒并用实时荧光定量PCR法检测病毒滴度。结果显示,成功构建了敲除MSTN基因的AAV-SaCas9重组载体,T7酶切和测序鉴定出sgRNA2位点可以对MSTN进行编辑,并成功将其包装成病毒,经荧光定量PCR鉴定病毒滴度为2.73×10^(12)vg/mL。 展开更多
关键词 CRISPR-Cas9 293T
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